纳米结构脂质载体佐剂的制备方法以及兽用疫苗技术

本发明专利技术公开一种纳米结构脂质载体佐剂的制备方法以及兽用疫苗，涉及兽用疫苗佐剂及其制备与应用技术领域。所述纳米结构脂质载体佐剂的制备方法，包括以下步骤：S10、将液体油和固体脂质加热混合，得油相；S20、在加热条件下，将所述油相加入到含有表面活性剂的水相，混合均匀得预乳状液；S30、将所述预乳状液均质后冷却，得纳米结构脂质载体佐剂。本发明专利技术制得的纳米结构脂质载体佐剂，含生物安全性液体油相及免疫功能固体脂质，可有效提高抗原的免疫功能；该纳米结构脂质载体佐剂具有高比表面积，能有效的稳定疫苗抗原并起到缓释作用；该佐剂亦可有效增加免疫细胞的识别和吞噬，提高抗原递呈效率，且具有较好的生物相容性和安全性。且具有较好的生物相容性和安全性。且具有较好的生物相容性和安全性。

【技术实现步骤摘要】
纳米结构脂质载体佐剂的制备方法以及兽用疫苗


[0001]本专利技术涉及兽用疫苗佐剂及其制备与应用
，特别涉及一种纳米结构脂质载体佐剂的制备方法以及兽用疫苗。

技术介绍

[0002]疫苗佐剂也称佐剂或抗原佐剂，是一类自身不具备抗原特性的，但能够增强机体的非特性免疫能力及抗原的免疫原性的物质。佐剂是疫苗密不可分的一部分，佐剂的加入能够减少疫苗中抗原的用量，增强效应T细胞的反应和抗体滴度，更快的激发免疫保护。当与抗原一起注射或预先注入机体时，可增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型。佐剂通过改变抗原的物理形状，延缓抗原降解和排除，延长抗原在机体内保留时间；刺激单核吞噬细胞对抗原的递呈能力；刺激淋巴细胞分化，增加扩大免疫应答能力等机制来增强机体的免疫应答。佐剂的使用可降低抗原的用量或接种剂量/次数，提高疫苗的免疫效力。
[0003]兽用疫苗佐剂中，矿物油佐剂在油乳佐剂中占居主导地位，如弗氏佐剂、白油佐剂、Montanide ISA 201等，其中白油佐剂仍然是目前兽用佐剂使用最为广泛的佐剂。白油佐剂主要由矿物油、span
‑
80与硬脂酸铝加热溶解后形成的淡黄色油状液体，与抗原乳化呈W/O型乳液。它可以延缓免疫原在机体内的存留时间，使之持续缓慢释放，增强巨噬细胞的吞噬能力。由于其出色的免疫效果，以及成本优势，在兽用疫苗中使用非常广泛。但白油佐剂的缺点也是十分明显的，如易产生较强的副反应，局部反应严重，且矿物油于2012年被WHO列为一类致癌物质。

技术实现思路

[0004]本专利技术的主要目的是提出一种纳米结构脂质载体佐剂的制备方法以及兽用疫苗，旨在制备一种安全、生物相容性好且能有效提高抗原免疫功能的纳米结构脂质载体佐剂。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提出一种纳米结构脂质载体佐剂的制备方法，包括以下步骤：
[0006]S10、将液体油和固体脂质加热混合，得油相；
[0007]S20、在加热条件下，将所述油相加入到含有表面活性剂的水相，混合均匀得预乳状液；
[0008]S30、将所述预乳状液均质后冷却，得纳米结构脂质载体佐剂。
[0009]可选地，在步骤S10中，所述液体油包括角鲨烯和植物油中的至少一种。
[0010]可选地，在步骤S10中，所述固体脂质包括十六烷基甘油醚和十八烷基甘油醚中的至少一种。
[0011]可选地，在步骤S10中，
[0012]所述液体油和固体脂质的质量之比为1∶(0.1～0.3)；和/或，
[0013]所述加热温度为30～60℃；和/或，
[0014]所述混合时间为15～30min。
[0015]可选地，在步骤S20中，
[0016]所述表面活性剂包括吐温
‑
80、月桂基葡糖苷、十聚甘油单油酸酯和六聚甘油单油酸酯中的至少一种；和/或，
[0017]所述加热温度为30～60℃。
[0018]可选地，在步骤S20中，油相的质量与所述表面活性剂的质量之比为1∶(2～5)。
[0019]可选地，在步骤S30中，所述均质为在6000～12000rpm下搅拌10～20min。
[0020]本专利技术进一步提出一种兽用疫苗，包括纳米结构脂质载体佐剂，所述纳米结构脂质载体佐剂通过如上所述的纳米结构脂质载体佐剂的制备方法制得。
[0021]可选地，所述兽用疫苗还包括抗原。
[0022]可选地，所述抗原包括猪圆环病毒CP08株抗原。
[0023]本专利技术的技术方案中，提出一种纳米结构脂质载体佐剂的制备方法，采用液体油和固体脂质混合，既可以利用固体脂质作为免疫激活剂，又可减缓油相代谢速率、实现疫苗和免疫激活剂的缓释效应；液体油和固体脂质都具有生物安全、可降解的特点，在动物安全方面，相对于矿物油佐剂副作用明显减少。本专利技术制得的纳米结构脂质载体佐剂，含生物安全性液体油相及免疫功能固体脂质，可有效提高抗原的免疫功能；该纳米结构脂质载体佐剂具有高比表面积，能有效的稳定疫苗抗原并起到缓释作用；该佐剂亦可有效增加免疫细胞的识别和吞噬，提高抗原递呈效率，且具有较好的生物相容性和安全性。
附图说明
[0024]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图示出的结构获得其他的附图。
[0025]图1为本专利技术提出的纳米结构脂质载体佐剂的制备方法的一实施例的流程示意图；
[0026]图2为本专利技术实施例1得到的纳米结构脂质载体佐剂的水合粒径分布图；
[0027]图3为本专利技术实施例1得到的纳米结构脂质载体佐剂的TEM图；
[0028]图4为本专利技术实施例6至实施例8得到的兽用疫苗对仔猪的有效性效果图；
[0029]图5为本专利技术实施例6至实施例8得到的兽用疫苗对小鼠的抗体释放效果图；
[0030]图6为本专利技术实施例6至实施例8得到的兽用疫苗对小鼠的IL
‑
2释放效果图；
[0031]图7为本专利技术实施例6至实施例8得到的兽用疫苗对小鼠的IL
‑
6释放效果图。
[0032]本专利技术目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
[0033]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0034]需要说明，若本专利技术实施例中有涉及方向性指示(诸如上、下、左、右、前、后、外、
内
……
)，则该方向性指示仅用于解释在某一特定姿态(如附图所示)下各部件之间的相对位置关系、运动情况等，如果该特定姿态发生改变时，则该方向性指示也相应地随之改变。
[0035]另外，若本专利技术实施例中有涉及“第一”、“第二”等的描述，则该“第一”、“第二”等的描述仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示其相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。另外，全文中出现的“和/或”的含义，包括三个并列的方案，以“A和/或B”为例，包括A方案、或B方案、或A和B同时满足的方案。另外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本专利技术要求的保护范围之内。
[0036]兽用疫苗佐剂中，矿物油佐剂在油乳佐剂中占居主导地位，如弗氏佐剂、白油佐剂、Montanide ISA 201等，其中白油佐剂仍然是目前兽用佐剂使用最为广泛的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纳米结构脂质载体佐剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S10、将液体油和固体脂质加热混合，得油相；S20、在加热条件下，将所述油相加入到含有表面活性剂的水相，混合均匀得预乳状液；S30、将所述预乳状液均质后冷却，得纳米结构脂质载体佐剂。2.如权利要求1所述的纳米结构脂质载体佐剂的制备方法，其特征在于，在步骤S10中，所述液体油包括角鲨烯和植物油中的至少一种。3.如权利要求1所述的纳米结构脂质载体佐剂的制备方法，其特征在于，在步骤S10中，所述固体脂质包括十六烷基甘油醚和十八烷基甘油醚中的至少一种。4.如权利要求1所述的纳米结构脂质载体佐剂的制备方法，其特征在于，在步骤S10中，所述液体油和固体脂质的质量之比为1：(0.1～0.3)；和/或，所述加热温度为30～60℃；和/或，所述混合时间为15～30min。5.如权利要求1所述的纳米结构脂质载体佐剂的制备方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺军波，刘希健，吴扬，张飞雁，秦红刚，聂晶晶，朱薇，石宝兰，漆世华，谢红玲，
申请(专利权)人：武汉轻工大学，
类型：发明
国别省市：