一种丛枝菌根真菌的连续扩繁方法技术

本发明专利技术公开了一种丛枝菌根真菌的连续扩繁方法，本发明专利技术涉及微生物应用的技术领域，它包括以下步骤：S1、制作培养装置；S2、在填装前将沸石、河沙和土壤混合，混合后对其辐照灭菌；在菌根室和尼龙网袋的混合基质内均添加营养液，同时在尼龙网袋的混合基质内添加磷营养液；S3、利用层接法在培养室将菌剂接种于菌根室的混合基质内；选择多年生豆科植物为宿主植物，将种子播种于菌根室的混合基质内，一周后间苗，每个菌根室保留5株长势一致的植株。本发明专利技术的有益效果是：提高生产出的丛枝菌根真菌的遗传稳定性、高节省人力物力、便于AM真菌技术的规模化应用和普及。的规模化应用和普及。的规模化应用和普及。

【技术实现步骤摘要】
一种丛枝菌根真菌的连续扩繁方法


[0001]本专利技术涉及微生物应用的
，特别是一种丛枝菌根真菌的连续扩繁方法。

技术介绍

[0002]丛枝菌根(arbuscular mycorrhiza，AM)真菌是自然界中普遍存在的土壤真菌，能与大多数陆生植物形成共生体并产生互惠关系。AM真菌能够促进植物吸收矿质元素和水分，特别是对磷的吸收，增强植物的抗逆性和抗病性，提高苗木移栽的成活率，促进植物生长，提高作物的品质和产量，而且能提高土壤质量，改善退化土壤肥力等。由于AM真菌对于植物重要的作用，其在农林生产、环境保护和生态修复等方面的应用前景十分广阔，AM真菌的研究和发展日益受到世界各国的关注，对其进行广泛的开发应用也成为目前的重要任务。
[0003]由于AM真菌是一种专性活体营养微生物，只能与宿主植物共生以完成生命周期，故借助宿主植物对其进行扩繁是获取AM真菌的有效途径。目前AM真菌的扩繁方法主要有盆栽培养法、培养基培养法、营养液培养法、玻璃珠分室培养法、雾化培养法、大田培养法及离体双重培养法等。其中，营养液培养法对技术要求高，操作复杂，成本较高，AM真菌菌物产量相对较少，扩繁效果差；离体双重培养法和玻璃珠培养法可获得纯度较高的AM真菌，但数量较少，操作和技术难度大，仅适用于科研和特殊目的要求；大田培养法是在开放的环境中培养AM真菌，容易受到污染，不适用于商业化菌剂生产。盆栽培养法还是当前广泛使用的AM真菌扩繁方法，是将AM真菌的孢子、菌丝和植株被侵染的根段等繁殖体，接种于宿主植物生长的基质中，经过培养获得风干后的包含AM真菌繁殖体的培养基质。此方法操作简单，生产的菌剂也比较可靠，但其需要较大的空间和较长的时间培养，菌剂体积大不便于运输，且菌剂的质量降低速度较快，每半年至一年就需要转接一次，培养或转接过程中可能受到污染而造成菌株的损失，以至于造成菌种的退化和性状丢失。
[0004]因此，需要一种便捷高效的AM真菌扩繁方法，既能减少菌剂生产中人力物力的耗费，又能保证菌种的遗传稳定性，收获高质量的AM真菌菌剂，满足农林、生态、环境等行业对AM真菌菌剂的迫切需求。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种提高生产出的丛枝菌根真菌的遗传稳定性、高节省人力物力、便于AM真菌技术的规模化应用和普及的丛枝菌根真菌的连续扩繁方法。
[0006]本专利技术的目的通过以下技术方案来实现：一种丛枝菌根真菌的连续扩繁方法，它包括以下步骤：
[0007]S1、制作培养装置，取用一个顶部带开口的塑料长方体盒，在塑料长方体盒内焊接一个隔板，隔板将塑料长方体盒分隔为菌根室和菌丝室，在隔板上开出连通菌根室和菌丝室内的窗口，在窗口处焊接将其遮挡住的滤网，然后在菌丝室内填装带开口的尼龙网袋，随
后在菌根室的上开口处套装顶部带开口的透明防护罩，从而最终实现了培养装置的制作；
[0008]S2、在菌根室内填装体积比分别为7：2：1的沸石、河沙和土壤的混合基质，在填装前将沸石、河沙和土壤混合，混合后对其辐照灭菌；在尼龙网袋内填装体积比分别为5：2：3的沸石、河沙和土壤的混合基质，在填装前将沸石、河沙和土壤混合，混合后对其辐照灭菌；在菌根室和尼龙网袋的混合基质内均添加营养液，同时在尼龙网袋的混合基质内添加磷营养液；
[0009]S3、利用层接法在培养室将菌剂接种于菌根室的混合基质内；选择多年生豆科植物为宿主植物，用10％过氧化氢溶液将宿主植物浸泡消毒9～10min，浸泡后，用蒸馏水对种子清洗，待洗净后，将种子置于黑暗潮湿的室温环境下催芽1～2天，待种子露白后，将种子播种于菌根室的混合基质内，一周后间苗，每个菌根室保留5株长势一致的植株；
[0010]S4、待生长2个半月后，第一次采取植株根系样品进行侵染率测定，收取并更换相同的菌丝室中尼龙网袋内的混合基质，对授权的混合基质进行孢子密度和菌丝密度的测定，之后每隔一个半月重复上述操作，共计三次；
[0011]S5、步骤S5结束后，将植株地下部的根系剪碎，待干燥后与培养基质混合即可得丛枝菌根真菌。
[0012]所述步骤S1中，滤网的网孔直径为30～50μm，滤网完整覆盖所述窗口。
[0013]所述步骤S1中，尼龙网袋的孔径大小为70～100μm，尼龙网袋的形状为长方体或椭球形。
[0014]所述步骤S1中，透明防护罩为塑料或玻璃材质，透明防护罩高出菌根室15～20cm。
[0015]所述步骤S1中，菌丝室的形状为长方形。
[0016]所述步骤S3中，多年生豆科植物为白三叶草、甘草、紫穗槐、胡枝子中任意一种。
[0017]本专利技术具有以下优点：
[0018]1.扩繁装置简单，培养材料易获得且培养条件要求较低，节省人力物力，便于AM真菌技术的规模化应用和普及。
[0019]2.扩繁培养周期长，植物生长期持续2～3年，培养过程中能连续不断地生产菌剂，缓解目前对菌剂量的需求压力。
[0020]3.生产的菌剂为含有新鲜纯净的菌丝和孢子体基质，菌种的遗传稳定性高，可作为优良菌剂接种使用。
附图说明
[0021]图1为培养装置的结构示意图；
[0022]图2为培养装置的实物图；
[0023]图3为图2的俯视图；
[0024]图4为培养植株的实物图；
[0025]图5为图5的俯视图；
[0026]图6为BJ09菌剂在植株根系中的侵染结构示意图；
[0027]图7为BJ09菌剂在植株根系中的菌丝结构示意图；
[0028]图8为AH01菌剂在植株根系中的侵染结构示意图；
[0029]图9为AH01菌剂在植株根系中的菌丝结构示意图；
[0030]图中，1
‑
透明防护罩，2
‑
尼龙网袋，3
‑
滤网，4
‑
菌根室，5
‑
菌丝室。
具体实施方式
[0031]下面通过具体实例对本专利技术进行进一步说明。应注意的是，以下所述仅为本专利技术的具体实施例，并不用于限制本专利技术。凡在本专利技术的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内：
[0032]一种丛枝菌根真菌的连续扩繁方法，它包括以下步骤：
[0033]S1、制作培养装置，取用一个顶部带开口的塑料长方体盒，在塑料长方体盒内焊接一个隔板，隔板将塑料长方体盒分隔为菌根室4和菌丝室5，在隔板上开出连通菌根室4和菌丝室5内的窗口，在窗口处焊接将其遮挡住的滤网3，然后在菌丝室5内填装带开口的尼龙网袋2，随后在菌根室4的上开口处套装顶部带开口的透明防护罩1，从而最终实现了培养装置的制作，其中滤网3的网孔直径为30～50μm，滤网3完整覆盖所述窗口；尼龙网袋2的孔径大小为70～100μm，尼龙网袋2的形状为长方体或椭球形；透明防护罩1为塑料或玻璃材质，透明防护罩1高出菌根室415～20cm；菌丝室5的形状为长方形；
[0034]S2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种丛枝菌根真菌的连续扩繁方法，其特征在于：它包括以下步骤：S1、制作培养装置，取用一个顶部带开口的塑料长方体盒，在塑料长方体盒内焊接一个隔板，隔板将塑料长方体盒分隔为菌根室(4)和菌丝室(5)，在隔板上开出连通菌根室(4)和菌丝室(5)内的窗口，在窗口处焊接将其遮挡住的滤网(3)，然后在菌丝室(5)内填装带开口的尼龙网袋(2)，随后在菌根室(4)的上开口处套装顶部带开口的透明防护罩(1)，从而最终实现了培养装置的制作；S2、在菌根室(4)内填装体积比分别为7：2：1的沸石、河沙和土壤的混合基质，在填装前将沸石、河沙和土壤混合，混合后对其辐照灭菌；在尼龙网袋(2)内填装体积比分别为5：2：3的沸石、河沙和土壤的混合基质，在填装前将沸石、河沙和土壤混合，混合后对其辐照灭菌；在菌根室(4)和尼龙网袋(2)的混合基质内均添加营养液，同时在尼龙网袋(2)的混合基质内添加磷营养液；S3、利用层接法在培养室将菌剂接种于菌根室(4)的混合基质内；选择多年生豆科植物为宿主植物，用10％过氧化氢溶液将宿主植物浸泡消毒9～10min，浸泡后，用蒸馏水对种子清洗，待洗净后，将种子置于黑暗潮湿的室温环境下催芽1～2天，待种子露白后，将种子播种于菌根室(4)的混合基质内，一周后间苗，...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢利国，付荣军，
申请(专利权)人：北京金必来生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：