一种卵巢癌类器官无血清专用培养基制造技术

本发明专利技术涉及肿瘤类器官培养领域。具体涉及一种卵巢癌类器官无血清专用培养基和培养方法。所述培养基为一种无需添加重组蛋白的无血清专用培养基，由基础培养基和添加物组成，基础培养基为含有1％青链霉素、1％HEPES缓冲液、1％GlutaMax溶液的DMEM/F12培养基。添加物包括生长因子EGF、FGF2、FGF7、FGF10、Neuregulin1，胰岛素，氢化可的松，小分子抑制剂A83

【技术实现步骤摘要】
一种卵巢癌类器官无血清专用培养基


[0001]本专利技术涉及一种肿瘤类器官培养
，尤其涉及一种卵巢癌类器官的无血清专用培养基和培养方法。

技术介绍

[0002]卵巢癌的是一种高度异质性的恶性肿瘤，由于卵巢癌的高度异质性，包括不同的亚型和基因型，这些亚型在遗传表型、病理特征和临床表现均不相同，因此构建基于患者来源的肿瘤体外模型，能够准确模拟体内肿瘤的生物学特征和对药物治疗的反应，对于肿瘤研究、药物测试及筛选有着巨大的价值。传统的肿瘤细胞系模型建立成功率低、肿瘤异质性缺失、缺少三维结构，异种移植动物模型需要较长时间和耗费大量实验资源、不适合进行大规模培养及动物特异性肿瘤的进化，因此建立基于肿瘤类器官技术的三维肿瘤体外模型，才能满足临床个体化治疗和肿瘤研究的需求。
[0003]Hill et al.(Hill,S.J.,et al.(2018).Prediction of DNA RepairInhibitor Response in Short
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Term Patient
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Derived Ovarian CancerOrganoids.Cancer Discov 8,1404
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1421)提出了一种卵巢癌类器官的培养方法，使用含有Wnt激动剂R
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spondin 1和BMP抑制剂Noggin 重组蛋白及多种生长因子作为添加物的培养基，成功建立了卵巢癌类器官。专利CN111040996B亦公开了一种卵巢癌类器官的培养方法，即将饲养层细胞、温敏性水凝胶、卵巢癌细胞和第一培养基混合培养7
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9天直至卵巢癌类器官形成。然而，这些设计存在以下问题和缺点，第一种方法即文献报道的方法在培养基种添加Wnt激动剂R
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spondin 1、BMP抑制剂Noggin等调控因子，此类重组蛋白价格昂贵，且主要生产企业均位于国外，这导致卵巢癌类器官专用培养基存在生产成本较高、主要添加成分需要进口、采购周期长且供应周期易受外部环境影响等问题。这些问题极大的阻碍了卵巢癌类器官的大规模培养和更广范围的应用研究。第二种方法即专利 CN111040996B公开的方法需要与饲养层细胞混合培养，饲养层细胞的准备耗时耗力，对操作要求高，对最终培养结果影响大。因此，迫切希望开发更低成本、更易用的卵巢癌类器官专用培养基的出现。

技术实现思路

[0004]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种全新的卵巢癌类器官无血清专用培养基的组成和培养方法，其目的在于，提供一种无需饲养层细胞，无需添加Wnt激动剂及BMP抑制剂等昂贵重组蛋白的卵巢癌类器官无血清专用培养基。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供的方案是这样实现的：一方面，本专利技术所述卵巢癌类器官无血清专用培养基由基础培养基和培养添加物两部分组成。基础培养基为含有1％青
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链霉素、1％HEPES缓冲液、1％GlutaMax溶液的DMEM/F12培养基。
[0006]进一步地，所述培养添加物包括生长因子EGF、FGF2、FGF7、FGF10、Neuregulin1，胰岛素，氢化可的松，小分子抑制剂 A83
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01、Y
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27632、SB202190，其他添加成分B27 supplement。
[0007]进一步地，所述培养添加物的终浓度为：EGF：0.01
‑ꢀ
0.1μg/mL、FGF2：0.005
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0.05μg/mL、FGF7：0.005
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0.05μg/mL、 FGF10：0.005
‑
0.05μg/mL、Neuregulin1：5
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50nM，胰岛素：10
‑ꢀ
50μg/mL，氢化可的松：0.1
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10μg/mL，小分子抑制剂A83
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01：0.1
‑ꢀ
1.0μM、Y
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27632：0.1
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1.0μM、SB202190：0.1
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1.0μM，B27 supplement：1％。
[0008]进一步地，所述卵巢癌类器官无血清专用培养基在使用时配制，在已配制好的基础培养基中，按照终浓度加入所有培养添加物，混合均匀后即可获得。
[0009]在本专利技术的另一个方面中，提供一种卵巢癌类器官体外培养的方法，包括以下步骤：
[0010](1)将卵巢癌组织样本切成3mm3左右大小，清洗后加入浓度为1mg/mL的胶原酶中，37度消化30分钟左右；
[0011](2)将消化后的细胞按照2
×
106个细胞/mL的浓度重悬于冷的 Cultrex
TM growth factor reduced BME type2中，加入24孔细胞培养板，每孔加40微升，放入37度细胞培养箱20分钟，使含有细胞的 BME固化；
[0012](3)每孔加入上述卵巢癌类器官无血清专用培养基400微升，放入5％CO2浓度、37℃细胞培养箱培养，每4～6天更换一次上述卵巢癌类器官无血清专用培养基，7天左右即可获得所需卵巢癌类器官。
[0013]由于本专利技术所采用培养方法不需要饲养层细胞，不需要制备条件培养基，采用的培养添加物中去除了价格昂贵的重组蛋白成分，从而可以得到以下有益效果：
[0014](1)本专利技术所述培养基对于卵巢癌类器官的生长有较好的支持和促进作用，而无需饲养层细胞的存在。7天左右即可获得典型的卵巢癌类器官，在体外较好的保留了患者来源肿瘤一致性和保留异质性，为进一步进行研究应用奠定了基础；
[0015](2)本专利技术所述培养基的成本较其他方法有明显下降，主要原因在于去除了价格较为昂贵的Wnt信号调节重组蛋白R
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Spondin和发育调控蛋白Noggin等重组蛋白，而使用其他成分替代，从而为以后进行大规模卵巢癌类器官培养用于药物筛选等研究应用提供了可能。
[0016](3)本专利技术所述培养方法步骤清晰简便，不需要准备饲养层细胞，不需要单独制备和生产WNT条件培养基及其他条件培养基。操作人员对培养结果影响较小，提高了培养结果的一致性，为后续大规模培养提供了便利条件。
附图说明
[0017]无。
具体实施方式
[0018]实施例：
[0019]本专利技术的优选实施方式是，提供一种无需添加Wnt通路调控重组蛋白及BMP抑制剂头蛋白Noggin的卵巢癌类器官无血清专用培养基及培养方法，所述培养基包括无血清基础培养基和培养添加物。所述基础培养基为含有1％青
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链霉素、1％HEPES缓冲液、 1％GlutaMax溶液的DMEM/F12培养基，所述培养添加物由以下终浓度的成分组成：EGF：0.05μg/mL、FGF2：0.05μg/mL、FGF7： 0.05μg/mL、FGF10：0.005μg/mL、Neureguli本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种卵巢癌类器官无血清专用培养基，其特征在于：包括基础培养基和培养添加物，基础培养基为含有1％青
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链霉素、1％HEPES缓冲液、1％GlutaMax溶液的DMEM/F12培养基，培养添加物包括生长因子EGF、FGF2、FGF7、FGF10、Neuregulin1，胰岛素，氢化可的松，小分子抑制剂A83
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01、Y
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27632、SB202190，B27supplement。2.根据权利要求1所述的一种卵巢癌类器官无血清专用培养基，其特征在于，所述培养添加物的终浓度为：EGF：0.01
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0.1μg/mL、FGF2：0.005
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0.05μg/mL、FGF7：0.005
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0.05μg/mL、FGF10：0.005
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0.05μg/mL、Neuregulin1：5
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50nM，胰岛素：10
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50μg/mL，氢化可的松：0.1
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10μg/mL，小分子抑制剂A83
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01：0.1
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【专利技术属性】
技术研发人员：扈晖，郑维越，扈晓玉，
申请(专利权)人：扈晖扈晓玉，
类型：发明
国别省市：