本发明专利技术公开了mtDAMPs作为放射性肺损伤早期预测生物标志物及治疗靶点的应用，属于生物检验领域。线粒体对电离辐射极为敏感，本发明专利技术发现在放疗过程中大剂量X射线暴露基因引起线粒体损伤，mtDAMPs释放，诱发炎症反应，造成组织细胞严重损伤。发明专利技术人检测放射前、放射后细胞中mtDAMPs的水平，结果显示照射组mtDAMPs水平明显上升，炎症反应加剧并伴有线粒体功能障碍。因此，可以将mtDAMPs作为放射性肺损伤的生物标志物用于放射性肺损伤早期预测、预后随访及药物筛选靶点。及药物筛选靶点。及药物筛选靶点。
【技术实现步骤摘要】
mtDAMPs作为放射性肺损伤早期预测生物标志物及治疗靶点的应用
[0001]本专利技术涉及mtDAMPs作为放射性肺损伤早期预测生物标志物及治疗靶点的应用，属于生物检验领域。
技术介绍
[0002]放射性肺损伤(Radiation
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induced lung injury,RILI)是胸部恶性肿瘤放射治疗后常见的并发症，严重限制了肿瘤的放疗剂量，是一种以间质性肺炎和肺纤维化为主要特征的致命性疾病。RILI临床表现主要有咳嗽、气短、发热、呼吸功能不全、重者发展为呼吸衰竭。目前RILI发病率高(15.5
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36％)，隐匿性强，潜伏期长，临床上缺乏有效的预测指标和治疗措施，严重影响患者的后续治疗及生活质量，危及患者生命安全。所以对放射性肺损伤的早期预测与诊断十分重要，但是目前对于放射性肺损伤来说尚未找到合适的早期诊断和预后随访生物标志物。
[0003]因此，寻找一种预测放射性肺损伤发生的早期生物标志物迫在眉睫。
[0004]线粒体对电离辐射极为敏感，是电离辐射的重要靶点。电离辐射的能量沉积，造成线粒体严重损伤，线粒体内容物如线粒体DNA(mtDNA)、细胞色素C(Cyto
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c)、线粒体活性氧(mtROS)等释放，这些物质统称为线粒体来源的损伤相关分子模式(mitochondrial damage
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associated molecular patterns,mtDAMPs)。mtDAMPs从线粒体释放后被模式识别受体识别，引起大量炎症因子失控性释放，诱发炎症反应，造成组织严重损伤。线粒体损伤后所释放的mtDAMPs是诱导肺损伤发生的关键因素，然而，mtDAMPs能否作为一种预测放射性肺损伤发生的早期生物标志物尚有待明确。
技术实现思路
[0005]本专利技术的首要目的是提供一种早期预测放射性肺损伤的生物标志物，通过检测机体mtDAMPs水平，判断放射性肺损伤发生。
[0006]为实现此目的，在基础的实施方案中，本专利技术从动物与细胞两个层面检测。
[0007]在本专利技术中，X射线诱导的放射性肺损伤组织病理切片H&E结果可见，照射组有明显肺泡结构破坏、炎性细胞浸润现象。X射线照射的RAW264.7细胞系可见，照射后的细胞间隙模糊、细胞结构破坏。
[0008]在本专利技术中，X射线照射后，RAW264.7细胞IL
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6、TNF
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a等炎症因子mRNA水平升高；线粒体功能相关因子Tomm20、ATP5a
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1的mRNA水平降低。
[0009]在本专利技术中，X射线照射后，RAW264.7细胞mtDAMPs如Cyto
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c、细胞ROS、线粒体ROS增加，线粒体呼吸链关联分子COXI蛋白水平和ATP水平降低。
[0010]本专利技术的第一个目的是提供mtDAMPs作为放射性肺损伤标志物的应用。
[0011]在本专利技术的一种实施方式中，mtDAMPs包括Cyto
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c、ATP、线粒体DNA、活性氧ROS中的任意一种或多种。
[0012]在本专利技术的一种实施方式中，mtDAMPs中Cyto
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c、活性氧ROS增加，ATP水平降低，线粒体呼吸链关联分子COXI蛋白水平降低。
[0013]在本专利技术的一种实施方式中，线粒体损伤相关分子模式Cyto
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c的核苷酸序列的NCBI登录号为13063或54205，线粒体呼吸链关联分子COXI的核苷酸序列的NCBI登录号为5912286或6775083。
[0014]在本专利技术的一种实施方式中，所述应用为定量检测mtDAMPs的试剂在制备放射性肺损伤的诊断试剂盒，或用于筛选预防放射性肺损伤发生的试剂，或用于筛选治疗或辅助治疗放射性肺损伤的试剂，或用于制备放射性肺损伤预后评估的试剂。
[0015]在本专利技术的一种实施方式中，所述放射性肺损伤为早期放射性肺损伤。
[0016]在本专利技术的一种实施方式中，通过酶联免疫吸附试验、免疫荧光法、免疫印迹法、免疫化学发光法、免疫
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PCR技术检测所述mtDAMPs。
[0017]本专利技术的第二个目的是提供一种早期放射性肺损伤诊断试剂盒，含有用于mtDAMPs定量检测的试剂。
[0018]在本专利技术的一种实施方式中，mtDAMPs包括Cyto
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c、ATP、mtDNA、ROS中的任意一种或多种。
[0019]在本专利技术的一种实施方式中，所述试剂盒的检测样本为血清、肺泡灌洗液或细胞培养上清液。
[0020]在本专利技术的一种实施方式中，线粒体损伤相关分子模式Cyto
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c的核苷酸序列的NCBI登录号为13063或54205，线粒体呼吸链关联分子COXI的核苷酸序列的NCBI登录号为5912286或6775083。
附图说明
[0021]图1 X射线诱导的小鼠肺组织损伤与细胞损伤，A：Micro
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CT分析，B：H&E病理切片分析。
[0022]图2 X射线诱导细胞炎症与线粒体功能障碍，A：X射线照射的RAW264.7细胞，B：炎症因子IL
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6和TNF
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α的mRNA水平，C：线粒体功能相关因子Tomm20和ATP5a
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1的mRNA水平。
[0023]图3 X射线诱导细胞mtDAMPs水平增加，A：粒体损伤相关分子模式Cyto
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c与线粒体呼吸链关联分子COXI的表达水平，B：细胞ROS与线粒体ROS的表达水平，C：细胞ATP水平，D：细胞ATP水平。
[0024]图4 X射线诱导小鼠血清中mtDAMPs水平。
具体实施方式
[0025]以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定，除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。
[0026]下述实施例中涉及到的方法
[0027](1)蛋白质免疫印记
[0028]用试剂盒提取总蛋白，BCA法定量，常规处理样品、电泳、电转膜。NC膜在5％的脱脂奶粉中封闭2小时，然后加入一抗，4℃摇床过夜，TBST溶液洗涤3次封闭后加入相应的二抗，
室温1小时。TBST洗膜后，加入显色剂后曝光显影成像。
[0029](2)肺组织Micro
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CT扫描
[0030]吸入异氟烷麻醉的小鼠固定在工作台上，使用Quantum FX micro
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CT成像系统进行扫描。在70kV、88μA和36mm FOV的参数下扫描每只小鼠4分钟。分析并分析了通过扫描获取的数据，使用Analyze 12.0软件进行肺部3D重建和计算肺体积相关参数。
[0031](3)肺损伤组织病理切片H&本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.mtDAMPs作为放射性肺损伤标志物的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为定量检测mtDAMPs的试剂在制备放射性肺损伤的诊断试剂盒，或用于筛选预防放射性肺损伤发生的试剂，或用于筛选治疗或辅助治疗放射性肺损伤的试剂，或用于制备放射性肺损伤预后评估的试剂。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，mtDAMPs包括Cyto
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c、ATP、线粒体DNA、活性氧ROS中的一种或多种。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，mtDAMPs中Cyto
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c、活性氧ROS水平增加，ATP水平降低。5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，Cyto
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【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书一页说明书四页附图二页，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：
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