细胞凝集块的制造方法技术

提供细胞凝集块制造用基板、其制造方法、细胞凝集块的制造方法、及使制造细胞凝集块时的细胞利用效率提高的方法。提供细胞凝集块制造用基板、其制造方法、以及使用该基板的细胞凝集块的制造方法及使制造细胞凝集块时的细胞利用效率提高的方法，所述细胞凝集块制造用基板在具有抑制细胞附着的能力的基板上具备由下述聚合物形成的多个斑点，斑点的总面积相对于基板的表面积的比例为30％以上，且各斑点的直径为50～5000μm，斑点间的间隔为30～1000μm，所述聚合物包含由下述式(I)表示的单体衍生的重复单元，式中，U

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞凝集块的制造方法


[0001]本专利技术涉及细胞凝集块制造用基板、其制造方法、细胞凝集块的制造方法、及使制造细胞凝集块时的细胞利用效率提高的方法。

技术介绍

[0002]细胞凝集块(也称为球状体或细胞块等)是被三维地培养、细胞彼此自组装
·
凝集化而成的细胞集合体，由于构建了生物体样结构，因此报道了能够长期维持细胞的功能，生理功能提高。因此，对于细胞凝集块在创新药物研究中或者在细胞治疗、再生治疗中的应用的期待正在高涨。
[0003]与此相伴，开发能够简便且迅速、均匀且大量地制作细胞凝集块的组织工程技术被认为是用于实现再生医疗的实用化、创新药物试验的高效化的重要课题，然而在利用使用了以往的细胞低粘附性培养皿(例如，多孔板)的浮游细胞的随机凝集化现象的方法中，在1孔中仅形成1个球状体，因此存在操作性及量产性不优异这样的课题。
[0004]目前为止，作为涉及细胞培养的技术，本申请的专利技术人报道了，包含含有特定的阴离子性基团和阳离子性基团的共聚物的涂覆剂能够与基体种类无关地牢固地固着，另外，固着后成为对水系溶剂的耐受性优异的涂覆膜，并且显示出优异的抑制生物材料(例如，血小板、纤维蛋白原等)附着的能力(例如，参见专利文献1、2)。另外报道了，以被该涂覆剂涂覆为特征的细胞培养容器的抑制细胞附着的能力优异，并且对溶剂、放射线的耐受性也优异，进而能够用于长期(例如14天以上，例如21天以上)的非粘附培养，适于球状体的制作(例如，参见专利文献3、4)。此外，本申请的专利技术人还报道了：诱导粘附细胞的自发集合(自集合化)的涂覆剂；和使用以用该涂覆剂进行涂覆为特征的细胞培养容器的球状体的制作(例如，参见PCT/JP2019/32785)。然而，它们均无法在球状体的制作的操作性及量产性方面令人满意。
[0005]现有技术文献
[0006]专利文献
[0007]专利文献1：国际公开第2014/196650号
[0008]专利文献2：国际公开第2016/093293号
[0009]专利文献3：国际公开第2014/196652号
[0010]专利文献4：国际公开第2019/107503号

技术实现思路

[0011]专利技术所要解决的课题
[0012]本专利技术的目的在于提供球状体制作的操作性及量产性优异的、细胞凝集块制造用基板及其制造方法。
[0013]用于解决课题的手段
[0014]本申请的专利技术人发现，通过将诱导粘附细胞的自发集合(自集合化)的涂覆剂与例
如喷墨装置组合以点状高密度地涂布于具有抑制细胞附着的能力的基板(例如，细胞低粘附培养皿)上，从而能够使接种细胞几乎全部粘附于涂布膜(斑点)而凝集化，由此完成了本专利技术。
[0015]即，本专利技术如下所述：
[0016][1]细胞凝集块制造用基板，其在具有抑制细胞附着的能力的基板上具备由下述聚合物形成的多个斑点，斑点的总面积相对于基板的表面积的比例为30％以上，且各斑点的直径为50～5000μm，斑点间的间隔为30～1000μm，
[0017]所述聚合物包含由下述式(I)表示的单体衍生的重复单元，
[0018][化学式1][0019][0020][式中，
[0021]U
a1
及U
a2
各自独立地表示氢原子或者碳原子数1至5的直链或支链烷基，R
a1
表示氢原子或者碳原子数1至5的直链或支链烷基，R
a2
表示碳原子数1至5的直链或支链亚烷基]。
[0022][2]如[1]所述的细胞凝集块制造用基板，其细胞利用效率为90％以上。
[0023][3]如[1]或[2]所述的细胞凝集块制造用基板，其中，上述细胞为干细胞。
[0024][4]如[1]～[3]中任一项所述的细胞凝集块制造用基板，其中，上述聚合物还包含由式(II)表示的单体衍生的重复单元，
[0025][化学式2][0026][0027][式中，
[0028]R
b
表示氢原子或者碳原子数1至5的直链或支链烷基]。
[0029][5]如[1]～[4]中任一项所述的细胞凝集块制造用基板，其中，上述聚合物还包含由下述式(III)表示的单体衍生的结构单元，
[0030][化学式3][0031][0032][式中，
[0033]R
c
及R
d
各自独立地表示氢原子或者碳原子数1至5的直链或支链烷基，R
e
表示碳原子数1至5的直链或支链亚烷基，n表示1～50的数字]。
[0034][6]如[1]～[5]中任一项所述的细胞凝集块制造用基板，其中，上述具有抑制细胞附着的能力的基板在前述基板表面的至少一部分上含有包含下述共聚物(P)的涂覆膜，所述共聚物(P)包含含有下述式(a)表示的基团的重复单元、和含有下述式(b)表示的基团的重复单元，
[0035][化学式4][0036][0037][式中，
[0038]U
a11
、U
a12
、U
b11
、U
b12
及U
b13
各自独立地表示氢原子或者碳原子数1至5的直链或支链烷基，An
‑
表示选自由卤化物离子、无机酸根离子、氢氧化物离子及异硫氰酸根离子组成的组中的阴离子]。
[0039][7]细胞凝集块制造用基板的制造方法，其包括将下述聚合物以多个点状涂布于具有抑制细胞附着的能力的基板上且接着进行干燥的工序，此处斑点的总面积相对于基板的表面积为30％以上，且各斑点的直径为50～5000μm，斑点间的间隔为30～1000μm，
[0040]所述聚合物包含由下述式(I)表示的单体衍生的重复单元，
[0041][化学式5][0042][0043][式中，
[0044]U
a1
及U
a2
各自独立地表示氢原子或者碳原子数1至5的直链或支链烷基，R
a1
表示氢原子或者碳原子数1至5的直链或支链烷基，R
a2
表示碳原子数1至5的直链或支链亚烷基]。
[0045][8]如[7]所述的细胞凝集块制造用基板的制造方法，其细胞利用效率为90％以上。
[0046][9]如[7]或[8]所述的细胞凝集块制造用基板的制造方法，其中，利用喷墨方式进行上述涂布工序。
[0047][10]细胞凝集块的制造方法，其包括：将下述聚合物以多个点状涂布于具有抑制
细胞附着的能力的基板上的工序；
[0048]接着接种细胞的工序，
[0049]此处斑点的总面积相对于基板的表面积为30％以上，且各斑点的直径为50～5000μm，斑点间的间隔为30～1000μm，
[0050]所述聚合物包含由下述式(I)表示的单体衍生的重复单元，
[0051][化学式6][00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.细胞凝集块制造用基板，其在具有抑制细胞附着的能力的基板上具备由下述聚合物形成的多个斑点，斑点的总面积相对于基板的表面积的比例为30％以上，且各斑点的直径为50～5000μm，斑点间的间隔为30～1000μm，所述聚合物包含由下述式(I)表示的单体衍生的重复单元，[化学式20]式(I)中，U
a1
及U
a2
各自独立地表示氢原子或者碳原子数1至5的直链或支链烷基，R
a1
表示氢原子或者碳原子数1至5的直链或支链烷基，R
a2
表示碳原子数1至5的直链或支链亚烷基。2.如权利要求1所述的细胞凝集块制造用基板，其细胞利用效率为90％以上。3.如权利要求1或2所述的细胞凝集块制造用基板，其中，所述细胞为干细胞。4.如权利要求1～3中任一项所述的细胞凝集块制造用基板，其中，所述聚合物还包含由式(II)表示的单体衍生的重复单元，[化学式21]式(II)中，R
b
表示氢原子或者碳原子数1至5的直链或支链烷基。5.如权利要求1～4中任一项所述的细胞凝集块制造用基板，其中，所述聚合物还包含由下述式(III)表示的单体衍生的结构单元，[化学式22]式(III)中，R
c
及R
d
各自独立地表示氢原子或者碳原子数1至5的直链或支链烷基，R
e
表示碳原子数1至5的直链或支链亚烷基，n表示1～50的数字。6.如权利要求1～5中任一项所述的细胞凝集块制造用基板，其中，所述具有抑制细胞
附着的能力的基板在所述基板表面的至少一部分上含有包含下述共聚物(P)的涂覆膜，所述共聚物(P)包含含有下述式(a)表示的基团的重复单元、和含有下述式(b)表示的基团的重复单元，[化学式23]式中，U
a11
、U
a12
、U
b11
、U
b12
及U
b13
各自独立地表示氢原子或者碳原子数1至5的直链或支链烷基，An
‑
表示选自由卤化物离子、无机酸根离子、氢氧化物离子及异硫氰酸根离子组成的组中的阴离子。7.细胞凝集块制造用基板的制造方法，其包括将下述聚合物以多个点...

【专利技术属性】
技术研发人员：铃木康平，广井佳臣，岩井良辅，
申请(专利权)人：学校法人加计学园，
类型：发明
国别省市：