一种肺腺癌诊断标志物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，尤其是涉及一种肺腺癌诊断标志物及其应用。在肺腺癌中，YAP高表达，并发现在NSUN2和ALYREF的促进下，YAP m5C修饰发生在其328

【技术实现步骤摘要】
一种肺腺癌诊断标志物及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，尤其是涉及一种肺腺癌诊断标志物及其应用。

技术介绍

[0002]YAP是Hippo信号通路下游的促癌转录共激活因子，主要功能是通过调节细胞增殖和接触抑制来控制器官的大小(Moya I M等,Nature reviews Molecular cell biology,2019,20(4):211
‑
26)。在肿瘤中，YAP的高表达导致细胞获得干性，并与上皮间质转化的作用相呼应(Qin S等,Signal transduction and targeted therapy,2020,5(1):228)，因此，YAP高表达的肿瘤具有较高的侵袭和转移能力(Jin D等,Molecular cancer,2020,19(1):40)。
[0003]m5C修饰是一种RNA甲基化修饰，由5
‑
甲基胞嘧啶RNA甲基转移酶催化，将甲基转移到RNA序列中胞嘧啶碱基的第五个碳上(Wnuk M等,International journal of molecular sciences,2020,21(21))。m5C经常与tRNA有关，但也经常在mRNA的5
’
和3
’
非翻译区(UTR)区中发现(Nombela P等,Molecular cancer,2021,20(1):18)，并已成为基因表达的许多方面的重要调节因子，包括RNA输出、核糖体组装、翻译和RNA稳定性(Bohnsack K E等,Genes,2019,10(2))。然而，YAP m5C修饰是否可作为肺腺癌的肿瘤标志物仍然未知。

技术实现思路

[0004]为了解决上述问题，本专利技术的目的是提供一种肺腺癌诊断标志物及其应用，YAP的3
’
UTR区域被m5C修饰进而增加了其mRNA的稳定性，这种修饰依赖于NSUN2和ALYREF，靶向YAP m5C修饰(简称“YAP m5C”)将有助于未来肺腺癌的治疗。
[0005]本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
[0006]本专利技术的第一个目的是提供YAP m5C修饰在作为肺腺癌诊断的标志物中的应用。
[0007]在本专利技术的一个实施方式中，所述YAP m5C修饰为YAP的3
’
UTR区域被m5C修饰。
[0008]在本专利技术的一个实施方式中，所述YAP m5C修饰依赖于NSUN2和ALYREF。
[0009]本专利技术的第二个目的是提供一种肺腺癌的肿瘤诊断试剂盒，包括权利要求1所述的标志物：YAP m5C修饰。
[0010]本专利技术的第三个目的是提供YAP m5C修饰在筛选人肺腺癌的肿瘤诊断药物中的应用。
[0011]本专利技术的第四个目的是提供YAP m5C修饰在筛选人肺腺癌的肿瘤诊断试剂盒中的应用。
[0012]本专利技术的第五个目的是提供YAP m5C修饰作为治疗靶点在制备治疗肺腺癌药物中的应用。
[0013]本专利技术的第六个目的是提供YAP m5C修饰作为治疗靶点在制备肺腺癌试剂盒中的应用。
[0014]本专利技术的第七个目的是提供YAP m5C修饰抑制剂在制备治疗肺腺癌药物中的应
用。
[0015]本专利技术的第八个目的是提供YAP m5C修饰抑制剂在制备肺腺癌试剂盒中的应用。
[0016]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0017]在肺腺癌中，YAP高表达，并发现在NSUN2和ALYREF的促进下，YAP m5C修饰发生在其328
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331 3
’
UTR区域，并增加了YAP mRNA的稳定性，这种m5C修饰还抑制了附近区域的miR
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582
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3p结合和m6A修饰。总之，YAP是通过其m5C修饰来促进的，阻断YAP m5C修饰将有助于未来肺腺癌的治疗，本专利技术的思路将为肺腺癌诊断和治疗提供一种非常有价值的靶点。
附图说明
[0018]图1表明YAP在肺腺癌中高表达；其中图1A为通过ELISA在肺腺癌和癌旁正常组织中检测YAP蛋白水平；图1B和图1C为不同阶段(图1B)和肿瘤直径(图1C)肺腺癌组织中的YAP蛋白水平；图1D为YAP被用于区分肺腺癌和非肿瘤组织的ROC曲线。
[0019]图2表明YAP的m5C修饰依赖于NSUN2；其中图2A为m5C在A549、H1299、Wi
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38、MRC
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5和BEAS
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2B细胞中YAP 3
’
UTR的指定区域(P1:1～700,P2:701～1400,P3:1401～2100,P4:2101～2800P5:2801～3493)富集情况通过Input和RNA
‑
IP样本的比值计算，RNA
‑
IP使用anti
‑
m5C抗体进行实验；图2B为m5C writers在A549和H1299细胞中YAP 3
’
UTR P1区域的富集情况通过Input和RNA
‑
IP样本的比值计算，RNA
‑
IP使用anti
‑
m5C抗体进行实验；图2C为YAP mRNA水平通过qPCR在A549和H1299细胞中测量，指示质粒过表达；图2D为通过免疫印迹在A549细胞中测量YAP蛋白水平，其中指定的质粒过表达。将蛋白质水平标准化为GAPDH，阴性对照组的蛋白质标准化水平任意设置为1；图2E为在肺腺癌和癌旁正常组织中测量NSUN2蛋白水平；图2F为肺腺癌样本中血浆外泌体浓度与组织YAP蛋白水平的相关性；图2H为在肺腺癌和癌旁正常组织中检测YAP m5C水平。图2I
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2J为不同阶段(图2I)和肿瘤直径(图2J)肺腺癌组织中的NSUN2蛋白水平；图2K为NSUN2和YAP m5C的ROC曲线，用于区分肺腺癌和非肿瘤组织。
[0020]图3表明YAP m5C修饰也依赖于ALYREF并增加YAP mRNA稳定性；图3A为ALYREF和YBX1在A549和H1299细胞中YAP 3
’
UTR P1区域的富集情况通过Input和RNA
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IP样本的比值计算，RNA
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IP使用anti
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ALYREF和anti
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YBX1抗体进行实验；图3B为在A549和H1299细胞中通过qPCR测量YAP mRNA水平，其中ALYREF或YBX1在有或没有NSUN2敲低的情况下过表达；图3C
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3D为通过免疫印迹方法在A549(图3C)和H1299(图3D)细胞中检测YAP蛋白水平，ALYREF或YBX1在有或没有NSUN2敲低的情况下过表达；将蛋白质水平标准化为GAPDH，阴性对照组的蛋白质标准化水平任意设置为1；图3E
‑
3J为在NUSN2(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.YAPm5C修饰在作为肺腺癌诊断的标志物中的应用。2.根据权利要求1所述的YAPm5C修饰在作为肺腺癌诊断的标志物中的应用，其特征在于，所述YAPm5C修饰为YAP的3
’
UTR区域被m5C修饰。3.根据权利要求2所述的YAPm5C修饰在作为肺腺癌诊断的标志物中的应用，其特征在于，所述YAPm5C修饰依赖于NSUN2和ALYREF。4.一种肺腺癌的肿瘤诊断试剂盒，其特征在于，包...

【专利技术属性】
技术研发人员：张骁，王佳谊，张聪聪，于永春，夏金晶，于文俊，马丽芳，王一琨，田晓婷，缪雅悠，
申请(专利权)人：上海市胸科医院，
类型：发明
国别省市：