一种枯草芽孢杆菌菌株、菌粉及其应用制造技术

本发明专利技术提供一株枯草芽孢杆菌菌株，为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HY

【技术实现步骤摘要】
一种枯草芽孢杆菌菌株、菌粉及其应用


[0001]本专利技术涉及一株能耐受高温的枯草芽孢杆菌菌株及其制备的菌粉和应用。

技术介绍

[0002]枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，是一种好氧的革兰氏阳性芽孢杆菌，其菌体生长过程中产生的枯草菌素与多粘菌素等活性物质，能对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用。枯草芽孢杆菌代谢可合成α
‑
淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶等多种酶类，在消化道中提高消化能力，且能分解有机物及有毒有害物质。
[0003]从目前现有的研究报道中可见，枯草芽孢杆菌的生长温度一般在10
‑
40℃，而耐高温的报道主要是其代谢酶类或其形成的芽孢状态，至于非芽孢状态的菌体能耐受高于50℃的报道基本没有。故筛选一种能在高温下能正常生长代谢的枯草芽孢杆菌，在堆肥腐熟的运用具有重大意义。
[0004]农业部于2015年10月起禁止使用蛭弧菌微生态制剂，故在水产弧菌病原菌的防治上急需安全可靠的替代品。而枯草芽孢杆菌在水产中的运用主要体现在水质调节方面，在抑菌水体病原菌的运用较少，故筛选一种能有效抑制水产病原菌的枯草芽孢杆菌具有重大意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术为了弥补现有枯草芽孢杆菌存在的不足之处，从而提供了一种枯草芽孢杆菌HY
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001，该菌株具有能耐受高温培养、抑制多株水产病原菌的能力，将在堆肥腐熟及水产养殖具有广泛的运用价值。
[0006]本专利技术提供的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HY
‑
001，为广东省微生物菌种保藏中心、采购编号为GDMCC1.372的枯草芽孢杆菌，经过紫外诱变、50℃高温诱导及高产纤维素酶、淀粉酶一系列筛选获得，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO.M 2022622，保藏日期为2022年05月13日。
[0007]在对枯草芽孢杆菌HY
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001的产酶能力对比试验中发现，其产纤维素酶、淀粉酶的酶活力高于枯草芽孢杆菌GDMCC1.372，且在温度耐受方面也明显优于枯草芽孢杆菌GDMCC1.372。
[0008]在对水产病原菌抑制试验检测中发现，本专利技术的枯草芽孢杆菌HY
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001对副溶血弧菌、溶藻弧菌、铜绿假单胞菌、嗜水气单胞菌等水产病原菌上具有明显抑制效果，其对水产病原菌的抑制能力高于枯草芽孢杆菌GDMCC1.372。
[0009]本专利技术的一株枯草芽孢杆菌菌粉的制备方法，包括以下步骤：将枯草芽孢杆菌HY
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001摇瓶活化后接入10L种子罐，装发酵液4L，发酵结束后按4％接入200L发酵罐，装发酵液100L。发酵温度40℃，发酵25h，搅拌150r/min，溶氧80％。发酵结束通过碟式离心机离心收集菌泥后通过离心式喷雾干燥机喷雾制备成菌粉，其中控制进风温度110℃，出风温度70℃。
[0010]进一步的，所述发酵液原料包括：葡萄糖25g/L，酵母浸膏5g/L，复合氨基酸粉2g/L，氯化铵2g/L，硫酸镁0.1g/L，硫酸锰0.05g/L，碳酸钙3g/L，pH自然。
[0011]本专利技术的枯草芽孢杆菌HY
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001具有以下优点：
[0012]1.遗传性质稳定，能够在50
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55℃环境中生存并进行正常生长代谢，有利于在高温环境状态下存活发挥其功能，从而扩展了枯草芽孢杆菌的运用范围。
[0013]2.能有效抑制多种水产病原菌，从而在功能上由普遍调水功能向防治水产动物疾病转变，从而部分替代蛭弧菌及抗生素产品。
[0014]3.能产生大量高效的纤维素酶、淀粉酶，在堆肥腐熟应用中效果显著。
附图说明
[0015]图1为枯草芽孢杆菌HY
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001在不同温度下的生长曲线；
[0016]图2为枯草芽孢杆菌HY
‑
001菌株耐高温测试试验涂布平板；
[0017]图3为枯草芽孢杆菌GDMCC1.372菌株耐高温测试试验涂布平板；
[0018]图4为枯草芽孢杆菌HY
‑
001抑制大肠杆菌、副溶血弧菌抑菌圈照片；
[0019]图5为菌株在对虾养殖防治弧菌的运用中试验前所涂布的平板，稀释度为10
‑1；
[0020]图6为菌株在对虾养殖防治弧菌的运用中试验5天所涂布的平板，稀释度为10
‑1。
具体实施方式
[0021]为了对本专利技术的技术方案做进一步的描述，故做如下具体实施例，但本专利技术的内容不仅仅局限于实施例所述范围，凡是不背离本专利技术的构思及等同替代均在本专利技术的保护范围之内。
[0022]实施例1紫外诱变及高温诱导培养
[0023]取培养24h的枯草芽孢杆菌GDMCC1.372培养液，采用10倍稀释至10
‑3制成菌悬液。取直径9cm无菌平皿1套，加入上述10
‑3菌悬液2mL，用无菌涂布棒涂成薄薄一层。置于在距离为30cm，功率为15W的紫外线灯下照射3min，在照射前将紫外线灯开关打开预热约20min。用无菌涂布棒蘸取菌液快速涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板中，操作过程不开白炽灯，保持暗光线操作。将上述涂匀的平板，用黑布包好，置50℃培养48h。将50℃培养后在平板上长出来的枯草芽孢杆菌菌落，全部挑取至30mL营养肉汤培养基，100mL三角瓶装，50℃摇床培养24h备用。
[0024]本专利技术提供的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HY
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001，为广东省微生物菌种保藏中心、采购编号为GDMCC1.372的枯草芽孢杆菌，经过紫外诱变及50℃高温诱导及高产纤维素酶、淀粉酶一系列筛选获得，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO.M 2022622，保藏日期为2022年05月13日。
[0025]实施例2产淀粉酶、纤维素酶筛选
[0026]1.产淀粉酶筛选
[0027]将50℃高温诱导培养后的菌液，进行10倍稀释，选取10
‑4、10
‑5、10
‑6各0.1mL涂布淀粉酶培养基，50℃培养48h，将碘液滴加平板上，观察测量透明圈大小。将产生较大透明圈的菌株进行纯化分离备用。其中淀粉酶筛选培养基：可溶性淀粉10g、牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂20g。
[0028]2.产纤维素酶筛选
[0029]将在淀粉酶筛选试验中纯化后的菌株进行活化培养18h，进行10倍稀释，选取10
‑4、10
‑5、10
‑6各0.1mL涂布纤维素酶筛选培养基，50℃培养48h，观察测量透明圈大小。将产生较大透明圈的菌株进行纯化分离备用。其中纤维素酶筛选培养基：羧甲基纤维素钠10g、酵母膏1g、刚果红0.2g、硫酸铵4g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁0.5g、硫酸锰0.5g、琼脂20g、pH 5.5。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株枯草芽孢杆菌菌株，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HY
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001，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO.M2022622，保藏日期为2022年05月13日。2.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌菌株，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌HY
‑
001，由广东省微生物菌种保藏中心采购编号为GDMCC1.372，经过紫外诱变、50℃高温诱导及高产纤维素酶、淀粉酶的筛选获得。3.根据权利要求2所述的一种枯草芽孢杆菌菌株，其特征在于，紫外诱变：取培养24h的枯草芽孢杆菌GDMCC1.372培养液，采用10倍稀释至10
‑3制成菌悬液；取直径9cm无菌平皿1套，加入上述10
‑3菌悬液2mL，用无菌涂布棒涂成薄薄一层；置于在距离为30cm，功率为15W的紫外线灯下照射3min，在照射前将紫外线灯开关打开预热约20min；用无菌涂布棒蘸取菌液快速涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板中，操作过程不开白炽灯，保持暗光线操作。4.根据权利要求2所述的一种枯草芽孢杆菌菌株，其特征在于，50℃高温诱导：将上述涂匀的平板，用黑布包好，置50℃培养48h；将50℃培养后在平板上长出来的枯草芽孢杆菌菌落，全部挑取至30mL营养肉汤培养基，100mL三角瓶装，50℃摇床培养24h备用。5.根据权利要求2所述的一种枯草芽孢杆菌菌株，其特征在于，产淀粉酶筛选：将50℃高温诱导培养后的菌液，进行10倍稀释，选取10
‑4、10
‑5、10
‑6各0.1mL涂布淀粉酶培养基，50℃培养48h，将碘液滴...

【专利技术属性】
技术研发人员：庄若飞，林松泉，刘兵，李惠静，曾海燕，
申请(专利权)人：厦门惠盈动物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：