一种快速净化固相萃取柱及其应用、咖啡制品的前处理方法和丙烯酰胺的检测方法技术

本发明专利技术涉及分析检测技术领域，具体涉及一种快速净化固相萃取柱及其应用、咖啡制品的前处理方法和丙烯酰胺的检测方法。本发明专利技术提供的快速净化固相萃取柱中的填料为混合型阴离子交换填料和混合型阳离子交换填料，能够去除咖啡制品提取物中干扰物。本发明专利技术以水为提取剂对于丙烯酰胺的提取率高，采用的快速净化固相萃取柱经水淋洗一次净化即可高效快速去除咖啡制品中的色素、糖等，同时吸附了酸性、碱性干扰杂质，从而有效去除了杂质干扰，经乙腈盐析浓缩进一步降低了基质干扰，

【技术实现步骤摘要】
一种快速净化固相萃取柱及其应用、咖啡制品的前处理方法和丙烯酰胺的检测方法


[0001]本专利技术涉及分析检测
，具体涉及一种快速净化固相萃取柱及其应用、咖啡制品的前处理方法和丙烯酰胺的检测方法。

技术介绍

[0002]丙烯酰胺被国际癌症研究机构(IARC)归类为2A级致癌物，被证明在人体中具有神经毒性，在实验动物中具有生殖毒性和遗传毒性。近年来咖啡越来越受到消费者的喜爱。咖啡属于高温烘焙热加工食品，在其焙烤加工过程产生丙烯酰胺，且含量较高，引起消费者、生产者、管理层关注。2017年11月20日欧盟委员会发布2017/2158号令，制定减少食品中丙烯酰胺含量的缓解措施和基准水平的规范，欧盟对食品中丙烯酰胺含量限定范围大多在300～850μg/kg之间，其中烘焙咖啡为400μg/kg、速溶咖啡为850μg/kg。24个国家获得的2002～2004年间食品中丙烯酰胺的检测数据共6752个，检测的数据包含早餐谷物、土豆制品、咖啡及其制品、奶类等主要消费食品，其中含量较高的三类食品为：高温加工的土豆制品(包括薯片、薯条等)，平均含量为0.48mg/kg，最高含量为5.3mg/kg；咖啡及其制品，平均含量为0.51mg/kg，最高含量为7.3mg/kg；早餐谷物类食品，平均含量为0.31mg/kg，最高含量为7.8mg/kg；其它种类食品的丙烯酰胺含量基本在0.1mg/kg以下。
[0003]目前，咖啡制品中丙烯酰胺检测过程中采用的净化柱主要有HLB柱、MAX柱、MCX柱、Carb柱、Al2O3柱、C18柱、Bond Elut
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Accucat柱、IsoluteMultimode柱，Isolute ENV+柱等，然而，上述净化柱一般采用2次或更多柱净化，净化效率低。
[0004]食品中丙烯酰胺的测定主要是气相色谱质谱法(GC
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MS)、液相色谱串联质谱法(LC
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MS/MS)，如现行的食品中丙烯酰胺的标准检测方法主要有GB5009.204
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2014《食品安全国家标准
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食品中丙烯酰胺的测定》和SN/T 2096
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2008《食品中丙烯酰胺的检测方法
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气相色谱质谱同位素内标法》。GB 5009.204
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2014中包括两种LC
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MS/MS和GC
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MS两种检测方法，LC
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MS/MS法以水为提取溶剂，经HLB固相萃取柱和Bond Elut
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Accucat固相萃取柱或基质分散固相萃取净化，以LC
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MS/MS检测，内标法定量，检测限为10μg/kg。但在实际咖啡(尤其是速溶咖啡)样品检测中，由于丙烯酰胺分子量小(分子量为71)，极性大，杂质干扰大，检测灵敏度低。欧盟BS ISO 18862:2016采用水为提取溶剂，正己烷脱脂，水相经铁氰化钾试剂沉淀后，再经C18固相萃取柱和离子交换固相萃取柱2次净化，稀释后进液相色谱
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串联质谱分析；GC
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MS法为经溴试剂衍生后，经极性阳离子交换柱进一步净化后进GC
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MS分析，然而，LC
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MS/MS法检测由于其稀释倍数较大及定性离子72>44灵敏度低，导致方法检测灵敏度低。因此，提供一种灵敏度高的丙烯酰胺的检测方法具有重要的意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种快速净化固相萃取柱及其应用、咖啡制品的前处理方法和丙烯酰胺的检测方法，本专利技术提供的快速净化固相萃取柱能够实现咖啡的快速、简便、
高效净化和降低基质干扰现象，本专利技术提供的前处理方法处理后样品杂质干扰小，检测准确度和灵敏度高。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种快速净化固相萃取柱，其特征在于，包括柱体，所述柱体内设置有两块筛板，所述两块筛板之间装填有填料，所述填料包括混合型阴离子交换填料和混合型阳离子交换填料。
[0008]优选的，所述填料包括：混合型阴离子交换填料和层叠设置在所述混合型阴离子交换填料表面的混合型阳离子交换填料，或，混合型阳离子交换填料和层叠设置在所述混合型阳离子交换填料表面的混合型阴离子交换填料，或混合型阴离子交换填料和混合型阳离子交换填料的混合物。
[0009]优选的，所述填料的粒径为10～100μm；
[0010]所述填料中混合型阴离子交换填料和混合型阳离子交换填料的质量比为(1～4)：(1～4)。
[0011]优选的，所述混合型阳离子交换填料包括divinylbenzene/vinylpyrrolidone+SO3H；
[0012]所述混合型阴离子交换填料包括divinylbenzene/vinylpyrrolidone+CH2N
+
R3，其中，R为烷基。
[0013]本专利技术提供了上述技术方案所述的快速净化固相萃取柱在咖啡制品的前处理中的应用。
[0014]本专利技术提供了一种咖啡制品的前处理方法，包括以下步骤：
[0015]将待测咖啡制品、
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C3D3‑
丙烯酰胺内标应用液和水混合，进行提取，得到的提取物进行脱脂，得到样品提取液；
[0016]采用上述技术方案所述的快速净化固相萃取柱对所述样品提取液进行水淋洗净化，得到样品净化液；
[0017]将所述样品净化液进行乙腈盐析浓缩，将所得浓缩物复溶于甲酸水溶液中，得到待测样品液。
[0018]优选的，所述提取为涡旋提取，所述涡旋提取的速度为1500～2500r/min，时间为1～15min。
[0019]本专利技术提供了一种咖啡制品中丙烯酰胺的检测方法，包括以下步骤：
[0020]采用液相色谱串联质谱对上述技术方案所述前处理方法得到的待测样品液中丙烯酰胺进行定性和定量检测。
[0021]优选的，所述液相色谱串联质谱检测中液相色谱检测的条件包括：
[0022]色谱柱：联苯基色谱柱；
[0023]柱温：30℃；
[0024]进样量：1～20μL；
[0025]流动相：流动相A和流动相B，所述流动相A为甲酸水溶液，所述甲酸水溶液中甲酸的体积分数为0.1～0.3％；所述流动相B为甲醇，所述流动相的流速为0.2～0.4mL/min；
[0026]洗脱方式：梯度洗脱；
[0027]所述梯度洗脱的程序如下：
[0028]0.00～6.00min，所述流动相A的体积分数为80～95％；
[0029]6.00～6.10min，所述流动相A的体积分数由80～95％匀速降低到0～5％；
[0030]6.10～8.00min，所述流动相A的体积分数为0～5％；
[0031]8.00～8.10min，所述流动相A的体积分数由0～5％匀速增加到80～本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速净化固相萃取柱，其特征在于，包括柱体，所述柱体内设置有两块筛板，所述两块筛板之间装填有填料，所述填料包括混合型阴离子交换填料和混合型阳离子交换填料。2.根据权利要求1所述的快速净化固相萃取柱，其特征在于，所述填料包括：混合型阴离子交换填料和层叠设置在所述混合型阴离子交换填料表面的混合型阳离子交换填料，或，混合型阳离子交换填料和层叠设置在所述混合型阳离子交换填料表面的混合型阴离子交换填料，或混合型阴离子交换填料和混合型阳离子交换填料的混合物。3.根据权利要求1或2所述的快速净化固相萃取柱，其特征在于，所述填料的粒径为10～100μm；所述填料中混合型阴离子交换填料和混合型阳离子交换填料的质量比为(1～4)：(1～4)。4.根据权利要求1或2所述的快速净化固相萃取柱，其特征在于，所述混合型阳离子交换填料包括divinylbenzene/vinylpyrrolidone+SO3H；所述混合型阴离子交换填料包括divinylbenzene/vinylpyrrolidone+CH2N
+
R3，其中，R为烷基。5.权利要求1～4任一项所述的快速净化固相萃取柱在咖啡制品的前处理中的应用。6.一种咖啡制品的前处理方法，其特征在于，包括以下步骤：将待测咖啡制品、
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丙烯酰胺内标应用液和水混合，进行提取，得到的提取物与二氯甲烷混合进行脱脂，得到样品提取液；采用权利要求1～4任一项所述的快速净化固相萃取柱对所述样品提取液进行水淋洗净化，得到样品净化液；将所述样品净化液进行乙腈盐析浓缩，将所得浓缩物复溶于甲酸水溶液中，得到待测样品...

【专利技术属性】
技术研发人员：王军淋，俞莎，张念华，应英，蔡增轩，张京顺，胡争艳，王志园，吴平谷，
申请(专利权)人：浙江省疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：