一种氟醚菌酰胺的毒性评价方法技术

本发明专利技术提供了一种氟醚菌酰胺毒性评价方法：将秀丽线虫暴露于含氟醚菌酰胺的环境或样品中，通过秀丽线虫体长、体宽、头部摆动频率、身体弯曲频率、向前运动次数、咽泵速率和子代数目的变化，判断待测样品的毒性；秀丽线虫的龄期为L4；暴露的时间为24 h。本发明专利技术的方法实现了低浓度农药样品毒性的快速评价，处理过程短，不需要复杂仪器、可操作性强；具有灵敏度高、成本低，试验周期短的优点，为新型创制农药的毒性评价提供了有效途径。的毒性评价提供了有效途径。的毒性评价提供了有效途径。

【技术实现步骤摘要】
一种氟醚菌酰胺的毒性评价方法


[0001]本专利技术属于化学品毒性评价
，涉及一种利用秀丽线虫进行氟醚菌酰胺毒性评价的方法。

技术介绍

[0002]氟醚菌酰胺是山东中农联合生物科技股份有限公司与山东农业大学合作于2010年研发的含氟苯甲酰胺类杀菌剂，其化学名称为：N
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（3
‑
氯
‑5‑
（三氟甲基）吡啶
‑2‑
甲基）
‑
2,3,5,6
‑
四氟
‑4‑
甲氧基苯甲酰胺，英文通用名称为Fluopimomide。
[0003]氟醚菌酰胺是一种吡啶甲基苯甲酰胺类杀菌剂，最初用于防治卵菌和丝核菌，能较好防治黄瓜霜霉病、水稻纹枯病，显著抑制辣椒疫霉病的致病能力。此外，氟醚菌酰胺与烯酰吗啉或保护性杀菌剂无交互抗性，因此推广氟醚菌酰胺与烯酰吗啉等杀菌剂交替使用或混用，可降低病原菌对氟醚菌酰胺的抗性发展速度。另有研究表明，氟醚菌酰胺能够与己唑醇混用显著提高对水稻纹枯病的防治效果。因此，氟醚菌酰胺具有低毒、广谱的杀菌活性，广泛应用于农业防治番茄灰霉病、叶霉病、枯萎病、马铃薯晚疫病、水稻纹枯病、棉花立枯病等多种植物病害。
[0004]此外，氟醚菌酰胺对根结线虫有一定抑制效果。Li et al.（Li Jingjing, Meng Zhen, Li Na, Dong Bei, Ji Xiaoxue, Zhang Shouan, Qiao Kang. Evaluating a new non
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fumigant nematicide fluopimomide for management of southern root
‑
knot nematodes in tomato. Crop Protection, 2020, 129: 105040）研究表明，与对照组相比，氟醚菌酰胺在番茄移栽后30天和60天能够显著抑制土壤中的南方根结线虫数量，降低根结指数。这说明，氟醚菌酰胺在防治南方根结线虫方面也具有很好的应用前景。
[0005]氟醚菌酰胺由于其高效、广谱，目前被广泛应用于农业以控制多种植物病原菌和根结线虫，但其大量使用可能对环境产生生态风险。有研究发现，氟醚菌酰胺对土壤可培养微生物有一定影响，对脲酶、蔗糖酶和过氧化氢等酶活力有一定的抑制或激活作用。由此表明，氟醚菌酰胺可能会对人类身体健康产生危害。目前尚未有氟醚菌酰胺对非靶标生物、人类健康和环境风险评估的相关研究报道。因此，亟需建立一种氟醚菌酰胺对环境和非靶标生物的毒性效应评估方法。
[0006]秀丽线虫基因组中约有60%
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80%的基因与人基因组具有同源性，暗示在秀丽线虫中所进行的毒理学研究将很大程度上反映污染物可能对人体导致的毒害。检测污染物在亚致死浓度下短时暴露对秀丽线虫造成的影响，提出可用于环境检测的简单可行指标，探讨农药及其他污染物对非靶生物的毒性机理，应用生物标志物对农药等污染物的生态效应进行预警、评价，为建立基于秀丽线虫对农药的环境毒物毒性的检测评估研究体系提供依据，也为农药污染的环境监测和综合治理提供技术支持。

技术实现思路

[0007]针对目前缺乏氟醚菌酰胺毒性评价方法的问题，本专利技术提供一种氟醚菌酰胺毒性
评价方法，以秀丽线虫为靶标，测定其行为学和体征等指标，操作简便、易观察且对浓度变化敏感。
[0008]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案。
[0009]一种氟醚菌酰胺毒性评价方法，包括以下步骤：将秀丽线虫暴露于含氟醚菌酰胺的环境或样品中，通过秀丽线虫体长、体宽、头部摆动频率、身体弯曲频率、向前运动次数、咽泵速率、子代数目的变化，判断待测样品的毒性。
[0010]优选地，所述秀丽线虫的龄期为4龄幼虫（L4）；暴露的时间为24 h。
[0011]优选地，通过身体弯曲频率、向前运动次数和子代数目的变化，判断待测样品的毒性。
[0012]优选地，秀丽线虫体长、体宽、头部摆动频率、咽泵速率的变化相较于未暴露的秀丽线虫出现显著降低p < 0.05，表明环境或样品中氟醚菌酰胺浓度超过0.2 mg/L。
[0013]优选地，身体弯曲频率、向前运动次数和子代数目的变化相较于未暴露的秀丽线虫出现显著降低p < 0.05，表明环境或样品中氟醚菌酰胺浓度超过0.1 mg/L。
[0014]本专利技术具有以下优点：本专利技术通过氟醚菌酰胺暴露后秀丽线虫在体长、体宽、头部摆动频率、身体弯曲频率、向前运动次数、咽泵速率、子代数目的变化，实现含低浓度农药样品毒性的快速评价，处理过程短，不需要复杂仪器、可操作性强；具有灵敏度高、成本低，试验周期短的优点，为新型创制农药氟醚菌酰胺的环境毒性评价提供了有效途径。
附图说明
[0015]图1是不同浓度氟醚菌酰胺暴露下秀丽线虫体长、体宽的变化；图2是不同浓度氟醚菌酰胺暴露下秀丽线虫头部摆动频率的变化；图3是不同浓度氟醚菌酰胺暴露下秀丽线虫身体弯曲频率的变化；图4是不同浓度氟醚菌酰胺暴露下秀丽线虫向前运动次数的变化；图5是不同浓度氟醚菌酰胺暴露下秀丽线虫咽泵速率的变化；图6是不同浓度氟醚菌酰胺暴露下秀丽线虫子代数目的变化。
具体实施方式
[0016]下面结合实施例和附图对本专利技术做进一步说明，但本专利技术不受下述实施例的限制。
[0017]实施例1秀丽线虫对不同浓度氟醚菌酰胺的反应将野生型秀丽线虫培养在涂有大肠杆菌OP50（Escherichia coli OP50）的线虫生长培养基（nematode growth medium，NGM）上于20℃培养箱中培养，将培养至产卵期的成虫裂解，离心去掉上清液获得卵，转移至新的含E. coli OP50的NGM培养基，恒温培养48 h得到同期化的4龄幼虫（L4）。
[0018]将L4期线虫暴露于浓度0.05、0.1、0.2、1.0和5.0 mg/L的氟醚菌酰胺溶液中24 h，然后观察测定秀丽线虫对氟醚菌酰胺的反应。
[0019]1.体长体宽的测定
用M9缓冲液冲洗并收集氟醚菌酰胺暴露24 h后的线虫，吸取50 μL的线虫液于载玻片上，然后放在酒精灯上灼烧10 s，当线虫被杀死并保持僵直的状态时，通过自带的显微镜微尺和测量工具测量体长和体宽，每个处理组测量20条，试验重复三次。
[0020]秀丽线虫体长和体宽在不同浓度氟醚菌酰胺暴露后的变化如图1所示。L4期的秀丽线虫在0.05
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5.0 mg/L的氟醚菌酰胺24 h急性暴露后，与对照组相比，0.05和0.1 mg/L氟醚菌酰胺对秀丽线虫的体长和体宽无显著性影响（p > 0.05）；0.2、1.0和5.0 mg/L氟醚菌酰胺处理秀丽线虫后体长和体宽显著缩短（p < 0.001）。因此，大于等于0.2 mg/L氟醚菌酰胺处理对线虫生长发育产生了毒性。
[0021]2.运动行为的测定（1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种氟醚菌酰胺毒性评价方法，其特征在于，包括以下步骤：将秀丽线虫暴露于含氟醚菌酰胺的环境或样品中，通过秀丽线虫体长、体宽、头部摆动频率、身体弯曲频率、向前运动次数、咽泵速率、子代数目变化，判断待测样品的毒性。2.根据权利要求1所述的氟醚菌酰胺毒性评价方法，其特征在于，所述秀丽线虫的龄期为4龄幼虫；暴露的时间为24 h。3.根据权利要求1所述的氟醚菌酰胺毒性评价方法，其特征在于，秀丽线虫的体长、体宽、头部摆动频率、咽泵速率的变化相较于未暴露的秀丽线虫...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔康，姬小雪，刘慧敏，张伟萍，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：