具有改变的功能活性的Fc突变体制造技术

本发明专利技术涉及包含突变的Fc区并具有Fc区介导的功能活性的多肽，所述活性与亲本多肽的相比是改变的。本发明专利技术还涉及所述多肽的用途，包含所述多肽的组合物和用于制备所述多肽的方法。法。

【技术实现步骤摘要】
具有改变的功能活性的Fc突变体
[0001]本申请是申请日为2016年5月6日的、专利技术名称为“具有改变的功能活性的Fc突变体”的中国专利申请201680025478.7(PCT/FR2016/051068)的分案申请。


[0002]本专利技术涉及包含突变的Fc区并具有Fc区介导的功能活性的多肽，所述活性与亲本多肽的相比是改变的。

技术介绍

[0003]抗体由重链和轻链的四聚物形成。两条轻链是相同的，且两条重链是相同的并且由二硫桥键连接。存在五种类型的重链(α、γ、δ、ε、μ)，这决定了免疫球蛋白类别(IgA、IgG、IgD、IgE、IgM)。轻链基团包括两个亚型：λ和κ。
[0004]IgG是可以在血液和其他体液中找到的可溶性抗体。IgG是具有150kDa的大概分子量的Y
‑
型糖蛋白，由两条重链和两条轻链组成。每条链的特征在于恒定区和可变区。重链的两个羧基末端结构域形成Fc片段，而重链和轻链的氨基末端结构域识别抗原并且称为Fab片段。
[0005]通过将抗体Fc片段与提供针对给定治疗靶标的特异性的蛋白结构域组合，可以形成Fc融合蛋白。实例是Fc片段与所有类型的治疗性蛋白或其片段的组合。
[0006]治疗性抗体和Fc融合蛋白目前用于治疗各种疾病，如类风湿性多关节炎、牛皮鲜、多发性硬化和各种形式的癌症。治疗性抗体可以是单克隆或多克隆抗体。单克隆抗体获自独特的抗体细胞产生系，其呈现出针对单个抗原的相同特异性。治疗性Fc融合蛋白被用作或开发为对抗自身免疫疾病的医学产品，例如，etanercept(Amgen的Enbrel，连接Fc片段的TNF受体)或Alefacept(Biogen ldec的Amevive：连接人IgG1的Fc部分的LFA
‑
3)。
[0007]抗体和Fc融合蛋白能够发挥其作用，Fc片段必须具有可能的最佳活性(例如，抗体依赖性细胞毒性、补体依赖性细胞毒性、或抗体依赖性细胞吞噬作用)，即，对其进行优化。所述优化将允许获得具有改善的活性和/或功效和/或降低的副作用的蛋白。
[0008]申请人自此已经研发了具有改善的活性的特定Fc片段。这些片段可以用于治疗，以赋予含有其的产品提高的功效。

技术实现思路

[0009]本专利技术因此提供了亲本多肽的变体，所述变体具有与Fc区介导的功能活性相关的优化性质。
[0010]本专利技术涉及包含突变的Fc区并具有Fc区介导的功能活性的多肽，所述功能活性与亲本多肽的相比是改变的，所述Fc区包含至少一个选自以下的突变：
[0011]G316D，K326E，N315D，N361H，P396L，T350A，V284L，V323I，P352S，A378V，Y436H，V266M，N421T，G385R，K326T，H435R，K447N，N434K，K334N，V397M，E283G，A378T，F423L，A431V，F423S，N325S，P343S，K290E，S375R，F405V，K322E，K340E，N389S，F243I，T307P，
N389T，S442F，K248E，Y349H，N286I，T359A，S383R，K334R，T394P，V259A，T393A，P352L，Q418P，V302A，L398P，F423P，S442P，V363I，S383N，S254F，K320E，G402D，I253F，V284A，A431T，N315H，Y319H，C226Y，F405L，T393I，N434S，R255W，A287T，N286Y，A231V，K274R，V308G，K414R，M428T，E345G，F243L，P247T，Q362R，S440N，Y278H，D312G，V262A，V305A，K246R，V308I，E380G，N276S，K439Q，S267G，F423Y，A231T，K320R，L410R，K320M，V412M，T307N，T366A，P230S，Y349S，A339T，K246E，K274E，A231P，I336T，S298N，L234P，S267N，V263A，E333G，V308A，K439R，K392R，S440G，V397I，I336V，Y373D，K288E，L309P，P227S，V379A，K288R，K320T，V282A，I377T，N421S和C261R，
[0012]编号是EU索引编号或Kabat等同编号。
[0013]所述多肽在本申请中称为“本专利技术的多肽”。
[0014]更具体地，本专利技术涉及包含突变的Fc区并具有Fc区介导的功能活性的多肽，所述功能活性与亲本多肽的相比是改变的，所述Fc区包含至少2个突变的组合，所述组合选自：
[0015](i)一个突变选自307N、326E、326T、334N、334R、352L、378V、378T、394P、396L、397M和421T；
[0016](ii)至少一个突变选自226Y、227S、230S、231V、234P、243I、243L、246R、246E、247T、248E、253F、254F、255W、259A、261R、262A、263A、266M、267N、267G、274E、274R、276S、278H、282A、283G、284L、286I、286Y、287T、288E、288R、290E、298N、302A、305A、307P、308A、308I、308G、309P、312G、315D、316D、319H、320T、320R、320M、322E、323I、325S、333G、334N、334R、336T、339T、340E、343S、345G、349S、349H、350A、352S、359A、361H、362R、363I、366A、373D、375R、377T、378V、378T、379A、380G、383R、385R、389S、389T、392R、393A、393I、394P、396L、397I、397M、398P、405V、405L、410R、412M、414R、421T、421S、423L、423Y、423S、423P、428T、431V、431T、434K、434S、435R、436H、439R、440G、440N、442F、442P和447N，
[0017]编号是EU索引编号或Kabat等同编号，条件是：突变(i)与突变(ii)不发生在相同氨基酸上。
[0018]优选，突变(i)选自378V、396L和397M。优选，多肽还可以包括选自248E、326T、333G和423Y的突变。
[0019]优选，本专利技术的突变(ii)选自226Y、227S、230S、231V、234P、243I、243L、246R、246E、247T、248E、253F、254F、255W、259A、261R、262A、263A、266M、267G、274E、274R、276S、278H、282A、283G、284L、286I、286Y、2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.包含突变的Fc区并具有Fc区介导的功能活性的多肽，所述活性与亲本多肽的相比是改变的，所述多肽的特征在于所述Fc区包含至少2个突变的组合，所述组合选自：(i)选自307N、326E、326T、334N、334R、352L、378V、378T、394P、396L、397M和421T的一个突变；和(ii)选自以下的至少一个突变：226Y、227S、230S、231V、234P、243I、243L，246R，246E，247T，248E，253F，254F，255W，259A，261R，262A，263A，266M，267N，267G，274E，274R，276S，278H，282A，283G，284L，286I，286Y，287T，288E，288R，290E，298N，302A，305A，307P，308A，308I，308G，309P，312G，315D，316D，319H，320T，320R，320M，322E，323I，325S，333G，334N，334R，336T，339T，340E，343S，345G，349S，349H，350A 352S，359A，361H，362R，363I，366A，373D，375R，377T，378V，378T，379A，380G，383R，385R，389S，389T，392R，393A，393I，394P，396L，397I，397M，398P，405V，405L，410R，412M，414R，421T，421S，423L，423Y，423S，423P，428T，431V，431T，434K，434S，435R，436H，439R，440G，440N，442F，442P和447N，编号是EU索引或Kabat等价体系的编号，条件是：突变(i)与突变(ii)不发生在相同氨基酸上。2.根据权利要求1的多肽，其特征在于突变(i)选自378V、396L和397M。3.根据权利要求1或2的多肽，其特征在于其进一步包含选自248E、326T、333G和423Y的突变。4.根据权利要求1至3之一的多肽，其特征在于所述Fc区介导的功能活性选自抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、补体依赖性细胞毒性(CDC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)，以及这些活性中的至少两种的组合。5.根据权利要求1至4之一的多肽，其特征在于其具有Fc区介导的功能活性，该功能活性与亲本多肽的相比提高。6.根据权利要求1至5之一的多肽，其特征在于其具有Fc区介导的功能活性，该功能活性与亲本多肽的相比提高至少2倍，优选5倍以上，优选10倍以上，优选15倍以上，优选20倍以上，优选25倍以上，和优选30倍以上。7.根据权利要求1至4之一的多肽，其特征在于其具有Fc区介导的功能活性，该功能活性与亲本多肽的相比降低。8.根据权利要求1至4或7之一的多肽，其特征在于其具有Fc区介导的功能活性，该功能活性与亲本多肽的相比降低至少2倍，优选5倍以上，优选10倍以上，优选15倍以上，优选20倍以上，优选25倍以上，和优选30倍以上。9.根据权利要求1至8之一的多肽，其特征在于所述的突变Fc区对于至少一种Fc区受体(FcR)具有改变的亲合力，所述受体选自C1q补体、FcgRIIIa(CD16a)、FcgRIIa(CD32a)和FcgRIIb(CD32b)受体。10.根据权利要求9的多肽，其特征在于所述的突变Fc区对于至少一种Fc区受体(FcR)具有提高的亲合力，所述受体选自C1q补体以及FcgRIIIa(CD16a)、FcgRIIa(CD32a)和FcgRIIb(CD32b)受体。11.根据权利要求9的多肽，其特征在于所述的突变Fc区对于至少一种Fc区受体(FcR)具有降低的亲合力，所述受体选自C1q补体以及FcgRIIIa(CD16a)、FcgRIIa(CD32a)和FcgRIIb(CD32b)受体。
12.根据权利要求1至11之一的多肽，其特征在于所述突变的Fc区与亲本多肽相比包含2至20个突变，优选2至10个突变。13.根据权利要求1至10或12之一的多肽，其特征在于所述的突变Fc区对于C1q补体具有提高的亲合力，并且包含至少2个突变的组合，所述组合包含：i)选自378V、378T、396L、421T、334R和326E的一个突变；和ii)选自361H、290E、316D、248E、410R、421T、334R、394P、307P、447N、378V、284L、421T、396L、286I、315D和397M的至少一个突变，编号是EU索引或Kabat等价体系的编号，并且条件是：突变(i)与突变(ii)不发生在相同氨基酸上。14.权利要求1至10或12之一的多肽，特征在于所述的突变Fc区对FcgRIIIa受体(CD16a)具有提高的亲合力，并且包括至少2个突变的组合，所述组合包括：i)选自378V、326E、397M、334N和396L的一个突变；和ii)选自316D、397M、334N、248E、231V、246R、336T、421T、361H、366A、439R、290E、394P、307P、378V、378T、286I、286Y和298N的至少一个突变，编号是EU索引或Kabat等价体系的编号，并且条件是：突变(i)与突变(ii)不发生在相同氨基酸上。15.根据权利要求1至10或12之一的多肽，特征在于所述的突变Fc区对FcgRIIa受体(CD32a)具有提高的亲合力，并且包括至少2个突变的组合，所述组合包括：i)选自378V、326E、397M、307N、394P、326T、396L和334N的一个突变；和ii)选自316D、334R、334N、323I、231V、246R、336T、378T、286Y、286I、352S、383R、359A、421T、361H、315D、366A、290E、307P和439R的至少一个突变，编号是EU索引或Kabat等价体系的编号，并且条件是：突变(i)与突变(ii)不发生在相同氨基酸上。16.根据权利要求1至10或12之一的多肽，特征在于所述的突变Fc区对FcgRIIb受体(CD32b)具有提高的亲合力，并且包括至少2个突变的组合，所述组合包括：i)选自326E、326T、378V、397M、352L、394P、396L和421T的一个突变；和ii)选自316D、334R、248E、334N、418P、231V、320E、402D、359A、383R、421T和361H的至少一个突变，编号是EU索引或Kabat等价体系的编号，并且条件是：突变(i)与突变(ii)不发生在相同氨基酸上。17.根据权利要求1至6或12之一的多肽，特征在于所述的突变Fc区具有提高的CDC活性，并且包括至少2个突变的组合，所述组合包括：i)选自378V、378T、396L、421T、334R和326E的一个突变，和ii)选自361H、290E、316D、248E、410R、421T、334R、394P、307P、447N、378V、284L、421T、396L、286I、315D和397M的至少一个突变，编号是EU索引或Kabat等价体系的编号，并且条件是：突变(i)与突变(ii)不发生在相同氨基酸上。18.根据权利要求1至6或12之一的多肽，特征在于所述的突变Fc区具有提高的ADCC活性，并且包括至少2个突变的组合，所述组合包括：
i)选自378V、326E、397M、334N和396L的一个突变；和ii)选自316D、397M、334N、248E、231V、246R、336T、421T、361H、366A、439R、290E、394P、307P、378V、378T、286I、286Y和298N的至少一个突变，编号是EU索引或Kabat等价体系的编号，并且条件是：突变(i)与突变(ii)不发生在相同氨基酸上。19.根据权利要求1至18之一的多肽，特征在于所述的突变Fc区包括至少3个突变的组合，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：C，
申请(专利权)人：法国血液分割暨生化制品实验室，
类型：发明
国别省市：