一种猪瘟病毒E2的核酸-蛋白复合标记性疫苗制造技术

本发明专利技术属于生物疫苗制备技术领域，公开了一种猪瘟病毒E2的核酸

【技术实现步骤摘要】
一种猪瘟病毒E2的核酸
‑
蛋白复合标记性疫苗


[0001]本专利技术属于生物疫苗制备
，具体涉及一种猪瘟病毒E2的核酸
‑
蛋白复合标记性疫苗。

技术介绍

[0002]猪瘟(Classical swine fever，CSF)，又称经典猪瘟亦或古典猪瘟，是由猪瘟病毒(Classicalswine fever virus，CSFV)引起的发热、急性、高度接触性传染病，四季均可发生。猪瘟病毒为单股正链RNA病毒，表面有囊膜，含有Erns、E1、和E2三个囊膜糖蛋白。其中E2蛋白为主要保护性抗原，分子量大小为51～55KD，既能与E1形成异源二聚体，也能形成自身同源二聚体结构。猪瘟病毒基因型分为多个亚型，我国目前流行的亚型多为2.1亚型和2.2亚型，其中 2.1型居多，但是血清型只有一个。
[0003]传统猪瘟病毒弱毒疫苗高效、安全，可以刺激机体同时产生良好的体液免疫和细胞免疫。包括LPC株、C株（也称HCLV）、GPE
‑
株、Thiverval株、PAV株以及弱毒株等，其中以兔化弱毒C株（以下简称C株）在世界范围内使用最为广泛。然而，上述疫苗毒株和野毒株在血清学上高度相似，二者刺激机体产生的抗体难以相互区分开。因此，无法通过检测抗体来剔除感染的、和可疑的猪只来控制疫情，也使免疫过此类疫苗的猪及其产品的贸易受到限制。因此研制可进行鉴别诊断的新型猪瘟疫苗势在必行。
[0004]二十世纪九十年代荷兰的Moormann等研制出了第一代E2亚单位疫苗，使用杆状病毒在昆虫细胞内表达E2蛋白并纯化。目前商品化的E2亚单位疫苗，国际上只有一种油包水剂型的在出售，注射后二周产生免疫保护，保护期6个月。我国新疆天康畜牧生物技术股份有限公司的 E2亚单位疫苗在2018年获准上市，但仍然没有解决该疫苗需要二次注射的缺点。一些学者为增强E2蛋白的免疫原性做了一些尝试，比如用腺病毒表达E2，杆状病毒表达新型CSFV的E2。基于E2的多肽类疫苗也做了很多尝试，包括，单一多肽疫苗，多个多肽的混合疫苗，或将多个中和位点串联在一起的疫苗。这些疫苗缺乏E2的天然构象，实验结果都不尽人意，只能提供部分保护。然而，以上这些以蛋白或多肽为基础的亚单位疫苗只能刺激机体产生体液免疫，需要多次注射以应对猪瘟病毒野毒株的攻击，而且，这些疫苗均不具有鉴别诊断的能力。
[0005]猪瘟病毒的DNA疫苗具有同时刺激机体产生体液免疫和细胞免疫的功能，比如在E2基因之外，插入一些细胞因子，比如IL3、IL12，或细胞表面分子CD154、CD81等等来加强免疫反应。由于疫苗递送途径受限，目的基因表达量低，DNA在体内易降解等原因，大剂量、多次注射的效果也不尽人意。
[0006]目前还没有一个理想的猪瘟病毒标记疫苗，既可以同时刺激机体产生体液免疫和细胞免疫，又能进行鉴别诊断、淘汰净化。

技术实现思路

[0007]本专利技术第一方面的目的，在于提供Fd片段作为鉴别标签在制备猪瘟病毒亚单位疫
苗和/或核酸疫苗中的应用。
[0008]本专利技术第二方面的目的，在于提供一种含有猪IgG的Fc片段的猪瘟病毒重组E2蛋白。
[0009]本专利技术第三方面的目的，在于提一种供编码本专利技术第二方面的猪瘟病毒重组E2蛋白的核酸分子。
[0010]本专利技术第四方面的目的，在于提供与本专利技术第三方面的核酸分子相关的生物材料。
[0011]本专利技术第五方面的目的，在于提供本专利技术第二方面的猪瘟病毒重组E2蛋白在制备预防或治疗猪瘟的疫苗中的应用。
[0012]本专利技术第六方面的目的，在于提供一种猪瘟病毒E2亚单位疫苗。
[0013]本专利技术第七方面的目的，在于提供一种猪瘟病毒E2的核酸
‑
蛋白复合疫苗。
[0014]本专利技术第八方面的目的，在于提供一种区别A免疫、B免疫、弱毒疫苗C株免疫或野毒株感染的鉴别方法。
[0015]为了实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案是：
[0016]本专利技术的第一个方面，提供Fd片段作为鉴别标签在制备中猪瘟病毒亚单位疫苗和/或核酸疫苗中的应用，所述Fd片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0017]所述Fd，英文全称为Foldon，是T4噬菌体纤维蛋白的一个小多肽，具有帮助蛋白质正确折叠，增强重组蛋白的免疫活性的功能。
[0018]本专利技术第二个方面，在于提供一种猪瘟病毒重组E2蛋白，所述猪瘟病毒重组E2蛋白包括猪瘟病毒2.1亚型的E2ab片段、Fd片段和猪免疫球蛋白IgG的Fc片段，所述Fd片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0019]优选地，所述猪瘟病毒2.1亚型的E2ab片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0020]优选的，所述猪免疫球蛋白IgG的Fc片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0021]优选的，所述猪瘟病毒重组E2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
[0022]优选的，所述猪瘟病毒E2重组蛋白还包括His标签。
[0023]优选的，所述His标签的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0024]本专利技术第三个方面，在于提供一种供编码本专利技术第二方面的猪瘟病毒重组E2蛋白的核酸分子。
[0025]优选地，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。
[0026]本专利技术第四个方面，在于提供与本专利技术第三方面的核酸分子相关的生物材料，所述生物材料为(1)～(3)中任一种；
[0027](1)表达盒，含有本专利技术第三方面的核酸分子；
[0028](2)重组载体，含有本专利技术第三方面的核酸分子或(1)中的表达盒；
[0029](3)重组细胞，含有本专利技术第三方面的核酸分子、(1)中的表达盒或(2)中的重组载体。
[0030]优选地，所述重组载体为质粒载体、病毒载体或细胞载体。
[0031]优选地，所述质粒载体可以是任选的质粒，所述病毒载体可以任选的病毒，所述细胞载体不包括繁殖材料。
[0032]优选地，所述细胞为昆虫细胞和/或哺乳动物细胞。
[0033]进一步优选地，所述昆虫细胞为昆虫细胞Sf9。
[0034]进一步优选地，所述哺乳动物细胞为HEK293细胞。
[0035]本专利技术第五方个方面，在于提供本专利技术第二方面的猪瘟病毒重组E2蛋白在制备预防或治疗猪瘟的疫苗应用。
[0036]本专利技术第三方面的核酸分子在制备预防或治疗猪瘟的疫苗应用。
[0037]本专利技术第四方面的生物材料在制备预防或治疗猪瘟的疫苗应用。
[0038]本专利技术第六个方面，在于提供一种猪瘟病毒E2亚单位疫苗，包括本专利技术第二方面的猪瘟病毒E2重组蛋白。
[0039]优选的，所述猪瘟病毒E2亚单位疫苗还包括药学上可接受的佐剂。
[0040]优选的，所述猪瘟病毒E2亚单位疫苗的制备方法为：将重组杆状病毒转染昆虫细胞，经培养表达本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.Fd片段作为鉴别标签在制备猪瘟病毒亚单位疫苗和/或核酸疫苗中的应用，所述Fd片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。2.一种猪瘟病毒E2重组蛋白，其特征在于，所述猪瘟病毒E2重组蛋白包括猪瘟病毒2.1亚型的E2ab片段、Fd片段和猪免疫球蛋白IgG的Fc片段，所述Fd片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；优选的，所述猪瘟病毒2.1亚型的E2ab片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；优选的，所述猪免疫球蛋白IgG的Fc片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。3.根据权利要求2所述的猪瘟病毒E2重组蛋白，其特征在于，所述猪瘟病毒E2重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示；优选地，所述猪瘟病毒E2重组蛋白还包括His标签。4.编码权利要求2或3所述的猪瘟病毒E2重组蛋白的核酸分子，所述核酸分子的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.8所示。5.与权利要求4所述的核酸分子相关的生物材料，其特征在于，所述生物材料为(1)～(3)中任一种；(1)表达盒，含有权利要求4所述的核酸分子；(2)重组载体，含有权利要求4所述的核酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘春根，赵玉林，王宁，张俊，黄攀，郭泽明，何梦韩，李中圣，伍建敏，罗律，
申请(专利权)人：广东海大畜牧兽医研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：