提高含有免疫球蛋白Fc片段的药物的安全性的方法技术

本发明专利技术属于肿瘤治疗和分子免疫学领域，涉及一种优化含有免疫球蛋白Fc片段的药物，增加其安全性和/或有效性的方法。具体地，本发明专利技术涉及一种降低或阻断由含有免疫球蛋白Fc片段的药物所介导的免疫细胞分泌的IL

【技术实现步骤摘要】
提高含有免疫球蛋白Fc片段的药物的安全性的方法


[0001]本专利技术属于肿瘤治疗和分子免疫学领域，涉及一种优化含有免 疫球蛋白Fc片段的药物(如抗体或Fc融合蛋白)，增加其安全性 和/或有效性的方法。具体地，本专利技术涉及一种降低或阻断由含有免 疫球蛋白Fc片段的药物(例如抗体或Fc融合蛋白)介导的免疫细 胞分泌的IL
‑
8和/或IL
‑
6的水平的方法。

技术介绍

[0002]Fc受体是表达在特定免疫细胞或体细胞表面，用于识别抗体Fc 区域介导免疫应答的免疫球蛋白家族蛋白。抗体Fab区域识别抗原 后，其抗体Fc区域与免疫细胞(如杀伤细胞)上的Fc受体结合， 激活效应细胞。
[0003]根据Fc受体识别抗体类型及表达细胞的不同，Fc受体主要分为 FcγR、FcαR和FcεR三种类型，FcγR又可分为FcγRI(亦称为CD64)、 FcγRII(亦称为CD32)、FcγRIII(亦称为CD16)和FcRn(亦称 为Neonatal Fc receptor)四种亚型。其中FcγRI、FcγRII、FcγRIII 与ADCC效应密切相关。FcγRIII是介导ADCC的最主要分子，在 不同细胞类型中具有高度同源的FcγRIIIa和FcγRIIIb两种亚型，在 FcγRIIIa人群中存在单核干多态性(SNP)位点引起的高亲和力 FcγRIIIa亚型，分别称为FcγRIIIa_V158和低亲和力FcγRIIIa_F158 两个亚型。FcγRI对IgG的Fc区域具有较高的亲和力，参与ADCC 过程；FcγRII有FcγRIIa，FcγRIIb和FcγRIIc(亦分别称为CD32a， CD32b，CD32c)三个亚型，其中FcγRIIa具有ADCC活性；FcγRIIa 在人群中存在由于单核苷酸突变导致的两种亚型，分别称为 FcγRIIa_H131和FcγRIIa_R131(Hogarth PM,Pietersz GA.2012, Nature Review Drug Discovery,11(4):311
‑
331)。
[0004]IgG家族包含四个成员，IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，它们重链 恒定区的可结晶片段(fragment crystallizable，Fc)区域存在氨基酸 的差异，导致它们与FcγRs的亲和力各不相同。IgG1是人体内最多 的亚型，也是单抗药物中用的最多的亚型，IgG1能够结合各种FcγRs。 IgG2与FcγRs的亲和力最弱，但是IgG2仍能够通过与FcγRIIa的结 合。IgG3与FcγRs的结合能力最强。IgG4分子与FcγRI之外的FcγRs 结合较弱。IgG4抗体亚型不稳定，易发生铰链区断裂进而导致 Fab
‑
arm交换，形成半分子以及双特异的功能单价的抗体(AalberseR.C.et al.Clin.Exp.Allergy.2009；39(4):469
‑
77.)；IgG4抗体重链铰 链区引入S228P突变能够稳定IgG4分子，阻止半分子的形成(ShirleyJ Peters et al.J Biol Chem.2012 13；287(29):24525
‑
33.)。
[0005]ADCR(antibody
‑
dependent cytokine release)是指抗体依赖的 细胞因子释放，抗体的Fab段结合肿瘤细胞的抗原表位，其Fc段与 效应细胞表面Fc受体(Fc Receptor,FcR)交叉结合，通过crosslinking 激活效应细胞，导致活化的效应细胞大量分泌细胞因子，如IL(白 细胞介素)
‑
1、IL
‑
6、IL
‑
8、IL
‑
10、MCP(单核细胞趋化蛋白)
‑
1 等分泌释放，其中IL
‑
6是主要的炎症介质。这些细胞因子会减弱免 疫治疗的疗效，同时增加免疫相关不良反应，严重可能导致多器官 衰竭和死亡。
[0006]白细胞介素8(interleutin
‑
8，IL
‑
8)是一种趋化性细胞因子 (Chemotactic cytokines)，属于CXC
‑
α亚家族(又称CXCL
‑
8)。 在正常人体内，主要是由单核细胞、免疫细胞、上皮细胞等分泌， 参与炎症和体内的免疫防御反应；其受体(CXCR)是由59和67kDa 两个亚单位组成的二聚体糖蛋白，属于G蛋白偶联受体超家族，共 有两个亚型，分别为CXCR1和CXCR2。IL
‑
8在正常细胞和肿瘤细 胞的增殖中有重要作用，尤其是对肿瘤的发生和发展具有重要的促 进作用。研究表明IL
‑
8可以促进肿瘤的发生；肿瘤细胞本身也可分 泌IL
‑
8，促进肿瘤的生长和转移(Lo MC et al.Cancer letters,2013, 335(1):81
‑
92.)。因此，IL
‑
8已成为肿瘤微环境之中不可缺少的一种 重要的炎症因子。
[0007]IL
‑
8作为一种促炎因子与肿瘤的发生发展密切相关。在甲基胂 酸(methylarsonate)诱导非肾癌细胞的恶变过程中，IL
‑
8基因的表 达增加，IL
‑
8基因沉默则可显著抑制小鼠体内移植瘤的生长，此外 IL
‑
8水平的降低可抑制与肿瘤的生长、转移相关的基质金属蛋白酶
‑
9 (Matrix metalloproteinase
‑
9)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、 促凋亡蛋白Bcl
‑
2、血管内皮生长因子(VEGF)的表达 (Escudero
‑
Lourdes C et al.Toxicology and applied pharmacology, 2012,258(1):10
‑
18.)。Inoue等人的研究发现IL
‑
8可诱导非肿瘤性膀 胱细胞系(233JP)的恶变及侵袭性的增加，而在IL
‑
8敲除鼠中233JP 细胞发生恶性转化的几率明显减少(Inoue K et al.Cancer Res,2000, 60(8):2290
‑
2299.)。此外，在前列腺癌中，IL
‑
8可以促进患者去势 抵抗性前列腺癌(CRPC)的发生(Chen K et al.Cancer research,2015, 75(10):1992
‑
2004.)，并且与肿瘤治疗的抗药性有关(Araki S et al. Cancer Res,2007,67(14):6854
‑
6862.)；IL
‑
8或其受体的基因沉默可 诱导肿瘤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种降低由含有免疫球蛋白Fc片段的药物介导的免疫细胞分泌的IL
‑
8和/或IL
‑
6的水平的方法，包括下述步骤：按照EU编号系统，所述的免疫球蛋白Fc片段包含如下突变：L234A和L235A；L234A和G237A；L235A和G237A；或者L234A、L235A和G237A。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述含有免疫球蛋白Fc片段的药物包含抗体和/或Fc融合蛋白；可选地，所述含有免疫球蛋白Fc片段的药物还包含一种或多种药学上可接受的辅料。3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述抗体为免疫检查点抑制剂。4.根据权利要求1至3中任一权利要求所述的方法，其中，所述抗体为双特异性抗体或多特异性抗体。5.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的方法，其中，所述抗体靶向：PD
‑
1和CTLA4、PD
‑
1和CD73、PD
‑
1和LAG3、CTLA4和CD73、CTLA4和LAG3、或者CD73和LAG3。6.根据权利要求4至5中任一权利要求所述的方法，其中，所述双特异性抗体靶向PD
‑
1和CTLA4，其包括：靶向PD
‑
1的第一蛋白功能区，和靶向CTLA4的第二蛋白功能区；其中：所述第一蛋白功能区为免疫球蛋白，所述第二蛋白功能区为单链抗体；其中，所述的免疫球蛋白，其重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:32
‑
34所示的HCDR1
‑
HCDR3，其轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:35
‑
37所示的LCDR1
‑
LCDR3；和所述的单链抗体，其重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:38
‑
40所示的HCDR1
‑
HCDR3，其轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:41
‑
43所示的LCDR1
‑
LCDR3；或者，所述第一蛋白功能区为单链抗体，所述第二蛋白功能区为免疫球蛋白；其中，所述的免疫球蛋白，其重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:38
‑
40所示的HCDR1
‑
HCDR3，其轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:41
‑
43所示的LCDR1
‑
LCDR3；和所述的单链抗体，其重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:32
‑
34所示的HCDR1
‑
HCDR3，其轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NOs:35
‑
37所示的LCDR1
‑
LCDR3；所述免疫球蛋白为人IgG；并且所述单链抗体为两条，每条单链抗体的一端分别连接在免疫球蛋白的两条重链的C末端。7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:6；并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:64；以及，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:18和
SEQ ID NO:30；并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:31；或者，所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:30；并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:31；以及，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:6；并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:64。8.根据权利要求6或7所述的方法，其中，所述双特异性抗体选自如下的(1)
‑
(18)中的任一项：(1)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示；(2)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示；(3)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:31所示；(4)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示；(5)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示；(6)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:
31所示；(7)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:64所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示；(8)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:64所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示；(9)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:64所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:31所示；(10)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；(11)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；(12)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:64所示；(13)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；(14)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示；和，所述单链抗体的重链可变区的氨
基酸序列如SEQ ID NO:6所示，并且所述单链抗体的轻链可变...

【专利技术属性】
技术研发人员：张鹏，李百勇，夏瑜，王忠民，
申请(专利权)人：中山康方生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：