用于提供具有针对肿瘤微环境细胞的嵌合抗原受体(CAR)的个性化细胞的方法技术

本发明专利技术涉及用于提供包含嵌合抗原受体(CAR)的细胞的方法，所述细胞对于暴露于肿瘤微环境细胞上的一种或多种靶抗原具有特异性，所述方法的特征在于提供包含肿瘤微环境细胞和非肿瘤微环境细胞的细胞样品，并且重复以下的步骤：

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于提供具有针对肿瘤微环境细胞的嵌合抗原受体(CAR)的个性化细胞的方法


[0001]本专利技术涉及用于选择暴露于个体的肿瘤微环境细胞(TME)上而不是健康细胞上的抗原的方法，以便提供具有适当的嵌合抗原受体(CAR)的细胞，用于杀死/裂解肿瘤微环境细胞(TME)。

技术介绍

[0002]癌症是涉及不受调控的细胞生长的一组广泛的疾病。在癌症中，细胞不受控制地分裂且生长，形成恶性肿瘤，并侵入附近的身体部分。癌症也可能通过淋巴系统或血流扩散到更远的身体部分。
[0003]实体瘤或癌组织通常被肿瘤微环境细胞(TME)包围或包裹，所述肿瘤微环境细胞(TME)由血管、免疫细胞、成纤维细胞、周细胞、信号传导分子和细胞外基质(ECM)组成。TME的定义公开于“NCI Dictionary of Cancer Terms"，National Cancer Institute，2011
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02中。关于TME的最近综述，参见Am J Cancer Res. 2019；9(2): 228
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[0004]由于CAR T细胞是有希望的靶向肿瘤的免疫疗法，因此实体瘤的治疗受到TME的影响，所述TME可以例如充当物理屏障或是免疫抑制性的。解决这点的一种潜在方法是再次使用CAR T细胞。
[0005]出现的问题在于肿瘤和TME对于每一个患者并不相同，并且需要对于肿瘤和TME两者选择正确的患者特异性靶，并且相应地生成CAR T细胞(等等)。CAR T细胞的选择和生成必须以快速的方式进行，并且大多数情况下是患者特异性的。
[0006]在实践中，肿瘤细胞或TME细胞的一种单一靶可能是不够的，因为表面分子同样可以在非靶细胞上表达，从而产生安全性问题。此外，表面分子可能并非足够选择性的，即可能在TME细胞上表达，导致存活的细胞复发和/或导致不完全的TME破坏，和/或关闭抗原的表达水平和/或单一结合剂的亲和力可能太低而不允许有效的T细胞激活。
[0007]为了对于各个患者的肿瘤标记物表达执行个性化表型分析，需要在由患者和适应症指定的可接受时帧内开发CAR和CAR T细胞的组合。在临床实践中，最佳时帧是几周。
[0008]相应地，基于CAR细胞的用于癌症的任何免疫疗法的成功都依赖对于分别的肿瘤细胞特异性的快速和可靠的抗原选择。
[0009]此类方法公开于例如EP3315511A1中，其中根据患者的免疫情况，即由肿瘤细胞呈递的抗原，提供具有抗原结合区(“TCBM”)的CAR T细胞。
[0010]已发现一组不同的细胞表面抗原在TME细胞上表达，但在非恶性细胞上不表达或表达水平较低。这些抗原(也称为“标记物”)可以用于经由与标记物特异性结合的配体，鉴定和/或标记和/或破坏TME细胞的逃逸机制和/或使其无效。EP3315511A1并未提及用于治疗的最有希望的抗原结合区(“TCBM”)的鉴定。进一步地，EP3315511A1仅针对肿瘤细胞，并未提及TME的免疫情况。
[0011]在TME细胞已被CAR细胞识别后，并且TME细胞从而通过因此鉴定的CAR细胞被破坏
或至少减少其保护癌细胞的效率。
[0012]因此，本专利技术的目的是提供选择对于TME细胞特异性的抗原以便改造细胞的方法，所述抗原在健康组织上并不表达，所述细胞然后杀死/裂解癌细胞而不攻击非肿瘤细胞。

技术实现思路

[0013]本专利技术的第一个目的是用于提供包含嵌合抗原受体(CAR)的细胞的方法，所述细胞对于暴露于肿瘤微环境细胞上的一种或多种靶抗原具有特异性，所述方法的特征在于提供包含肿瘤微环境细胞和非肿瘤微环境细胞的细胞样品，并且重复以下的步骤：
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使细胞组织与包含荧光部分和抗原识别部分的缀合物接触，
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从细胞组织中去除未结合的缀合物，并且通过由第一缀合物的荧光部分发射的荧光辐射检测与缀合物结合的细胞，
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消除由缀合物的荧光部分发射的荧光，直到鉴定了提供有识别不同抗原的抗原识别部分的至少两种缀合物，允许组合地区别肿瘤微环境细胞和非肿瘤微环境细胞，并且提供具有所鉴定的至少两种抗原识别部分作为嵌合抗原受体(CAR)的细胞。
[0014]优选地，本专利技术的方法包括至少对于两个后续执行的步骤循环，用包含荧光部分和识别不同抗原的抗原识别部分的缀合物重复上文提到的步骤。
[0015]在第一个实施方案中，包含嵌合抗原受体(CAR)的细胞对于暴露于肿瘤微环境细胞上的选自α
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SMA、CD74、CXCL12和PDGFRβ的一种或多种靶抗原是特异性的。
[0016]在该实施方案的一个优选变型中，包含嵌合抗原受体(CAR)的细胞对于暴露于肿瘤微环境细胞和肿瘤基质细胞上的选自α
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SMA、CD74、CXCL12和PDGFRβ的一种或多种靶抗原是特异性的。
[0017]在第二个实施方案中，包含嵌合抗原受体(CAR)的细胞对于暴露于肿瘤微环境细胞上的选自CD47、CD51、CD58、CD90、CD206和CD239的一种或多种靶抗原是特异性的。
[0018]在该实施方案的优选变型中，包含嵌合抗原受体(CAR)的细胞对于暴露于肿瘤微环境细胞和PaCa (胰腺癌)细胞上的选自CD47、CD51、CD58、CD90、CD206和CD239的一种或多种靶抗原是特异性的。发现CD90和CD239的组合对于PaCa的肿瘤微环境细胞是特别特异性的。
[0019]在第三个实施方案中，对于暴露于肿瘤微环境细胞上的一种或多种靶抗原具有特异性的包含嵌合抗原受体(CAR)的细胞对于与肿瘤微环境细胞相关的肿瘤细胞是进一步特异性的。
附图说明
[0020]图1显示了嵌合抗原受体(CAR)的一般结构域。
[0021]图2显示了嵌合抗原受体的一般构建概念。
[0022]图3显示了提供有与逻辑的CAR
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T细胞的功能的示意图。
[0023]图4显示了提供有非逻辑的CAR
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T细胞的功能的示意图。
[0024]图5 a
ꢀ‑ꢀ
c显示了通过对于胰腺癌的超高内涵成像筛选的靶鉴定。
[0025]定义
在下文中，术语“肿瘤微环境细胞”、“TME细胞”和“靶细胞”同义地用于应该由通过本专利技术的方法提供的CAR细胞识别(并随后攻击)的细胞。
[0026]此类肿瘤微环境细胞(TME)在实体瘤周围生长或嵌入实体瘤，并且可能由血管、免疫细胞、成纤维细胞、周细胞、信号传导分子和细胞外基质(ECM)组成。科学定义可以在“NCI Dictionary of Cancer Terms". National Cancer Institute. 2011
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02中找到；关于最近综述，参见Am J Cancer Res. 2019；9(2): 228
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.用于提供包含嵌合抗原受体(CAR)的细胞的方法，所述细胞对于暴露于肿瘤微环境细胞上的一种或多种靶抗原具有特异性，所述方法的特征在于提供包含肿瘤微环境细胞和非肿瘤微环境细胞的细胞样品，并且重复以下的步骤：
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使细胞组织与包含荧光部分和抗原识别部分的缀合物接触，
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从细胞组织中去除未结合的缀合物，并且通过由第一缀合物的荧光部分发射的荧光辐射检测与缀合物结合的细胞，
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消除由缀合物的荧光部分发射的荧光，直到鉴定了提供有识别不同抗原的抗原识别部分的至少两种缀合物，允许组合地区别肿瘤微环境细胞和非肿瘤微环境细胞，和提供具有所鉴定的至少两种抗原识别部分作为嵌合抗原受体(CAR)的细胞。2.根据权利要求1的方法，其特征在于包含嵌合抗原受体(CAR)的细胞选自T细胞、NK细胞、或被改造为在通过其它细胞的结合触发时破坏其它细胞的细胞。3.根据权利要求1或2的方法，其特征在于所述至少两种抗原识别部分作为与
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、或
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或非
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型提供。4.根据权利要求1至3中任一项的方法，其特征在于所述至少两种抗原识别部分作为衔接子型提供。5.根据权利要求4的方法，其特征在于通过提供包含生物素作为嵌合抗原受体(CAR)的抗原识别部分的细胞，并且提供所鉴定的至少两种抗原识别部分与抗生物素部分的缀合物，并且使所述缀合物与所述细胞缀合，来提供具有所鉴定的至少两种抗原识别部分作为嵌合抗原受体(CAR)的细胞。6.根据权利要求4的方法，其特征在于通过提供包含生物素作为第一嵌合抗原受体(CAR)的抗原识别部分以及第二表位作为第二嵌合抗原受体(CAR)的抗原识别部分的细胞，并且提供所鉴定的至少两种抗原识别部分与抗生物素部分和第二部分的缀合物，使所述缀合物与所述细胞缀合，来提供具有所鉴定的至少两种抗原识别部分作为嵌合抗原受体(CAR)的细胞。7.根据权利要求1至6中任一项的方法，其特征在于提供有抗原识别部分的所述至少两种缀合物结合至少20%的肿瘤微环境细胞和小于5%的非肿瘤微环境细胞。8.根据权利要求1至7中任一项的方法，其特征在于提供有抗原识别部分...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：美天施生物科技有限两合公司，
类型：发明
国别省市：