新型白介素-15(IL-15)融合蛋白及其用途制造技术

本公开内容提供了用于治疗癌症和其他紊乱的新型且改进的IL

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新型白介素
‑
15(IL
‑
15)融合蛋白及其用途
[0001]背景
[0002]虽然癌症传统上通过化学疗法、放射疗法、靶向疗法和手术进行治疗，但癌症治疗的第五支柱免疫疗法在过去10年中出现，并彻底改变了对癌症的战争。免疫治疗药物的基准(benchmark)由T细胞检查点(CTLA
‑
4和PD
‑
1/PD
‑
L1)抑制剂的开发建立。已经展示出，这些疗法有效地扩大和重新活化肿瘤特异性T细胞的库(pool)，导致患有某些癌症的患者的高达50％的客观响应率。
[0003]最近，细胞因子的四α
‑
螺旋束家族的成员白介素
‑
15(IL
‑
15)已经成为用于治疗癌症的候选免疫调节剂。IL
‑
15与其特异性受体IL
‑
15Rα结合，IL
‑
15Rα在抗原呈递树突细胞、单核细胞和巨噬细胞上表达，并反式活化响应细胞(包括T细胞和自然杀伤(NK)细胞)上的由IL
‑
15Rβ和共有细胞因子受体γ链(γ
c
)组成的异源二聚体受体复合物，以启动信号传导。IL
‑
15显示出广泛的活性，并诱导T细胞、B细胞和自然杀伤(NK)细胞的分化和增殖。IL
‑
15还增强CD8
+
T细胞的溶细胞活性，并诱导持久的经历抗原的(antigen
‑
experienced)CD8r/>+
CD44
hi
记忆T细胞。IL
‑
15刺激B细胞分化和免疫球蛋白合成，并诱导树突细胞成熟。IL
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15不刺激免疫抑制性的调节性T细胞(Treg)。因此，假设提高IL
‑
15活性可以增强固有免疫和适应性免疫并对抗肿瘤，使IL
‑
15成为用于抗癌疗法的有前途的剂(Steel等人,Trends in Pharmacological Sciences,33(1):35
‑
41,2012)。
[0004]在对转移性恶性黑素瘤患者静脉内输注重组人类IL
‑
15的首次人类I期临床试验中，据报道，IL
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15可以安全地施用至转移性恶性肿瘤患者，并且IL
‑
15的施用显著改变了血液中淋巴细胞亚群的体内稳态，NK细胞和γδ细胞受影响最大，其次是CD8记忆T细胞(Conlon等人,J Clin Oncol.,33(1),74
‑
82)。
[0005]尽管使用IL
‑
15作为癌症免疫治疗剂来增强免疫应答取得了这些新进展，但IL
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15作为治疗剂的有效使用仍然存在缺陷。例如，IL
‑
15具有短的半衰期(<40分钟)，导致1)生物可利用度低，妨碍其体内抗肿瘤作用，和2)需要施用高剂量以实现有治疗意义的暴露(therapeutic relevant exposure)，这导致毒性。此外，据了解，IL
‑
15在标准哺乳动物细胞系统中的表达水平差。
[0006]对于提供高度有效且安全的用于治疗癌症的新型治疗剂仍存在迫切需求。
[0007]专利技术的公开内容
[0008]在一方面，本专利技术提供了用于治疗癌症的新型且改进的IL
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15融合蛋白。在各种实施方案中，本专利技术的融合蛋白具有两个功能结构域：IL
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15/IL
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15受体α(IL
‑
15Rα)组分(本文中也称为“IL
‑
15/IL
‑
15Rα复合物”)和异源蛋白，其中每一个可以采取不同的形式。在各种实施方案中，融合蛋白被配置成使得IL
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15融合到异源蛋白的C末端或异源蛋白的N末端，并且与IL
‑
15Rα结构域共表达和非共价复合(参见图1B和图1C，其中异源蛋白是Fc结构域，以及图30A和图30B，其中异源蛋白是抗体)。
[0009]在各种实施方案中，本专利技术的IL
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15融合蛋白包含IL
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15/IL
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15Rα复合物，其中IL
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15结构域包含如SEQ ID NO:2中列出的成熟的人类IL
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15多肽(本文中也称为huIL
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15或IL
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15野生型(wt))的序列。在各种实施方案中，IL
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15结构域将是IL
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15变体(或突变体)，该IL
‑
Fc结构域或它们的任何组合。在各种实施方案中，Fc结构域包含导致Fc结构域具有改变的补体结合特性或Fc受体结合特性的氨基酸变化。产生具有改变的补体结合特性或Fc受体结合特性的Fc结构域的氨基酸变化是本领域已知的。在各种实施方案中，用于制备二聚体IL
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15/IL
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15Rα复合物
‑
Fc融合蛋白的Fc结构域序列是SEQ ID NO:6中列出的人类IgG1
‑
Fc结构域序列。SEQ ID NO:6包含消除(ablate)FcγR和C1q结合的氨基酸取代。在各种实施方案中，用于制备单价IL
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15/IL
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15Rα复合物
‑
Fc融合蛋白的异源二聚体Fc结构域序列是SEQ ID NO:7中列出的Knob
‑
Fc结构域序列。SEQ ID NO:7包含消除FcγR和C1q结合的氨基酸取代。在各种实施方案中，用于制备单价IL
‑
15/IL
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15Rα复合物
‑
Fc融合蛋白的异源二聚体Fc结构域序列是SEQ ID NO:8中列出的Hole
‑
Fc结构域序列。SEQ ID NO:8包含消除FcγR和C1q结合的氨基酸取代。
[0015]在各种实施方案中，本专利技术的IL
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15融合蛋白包含IL
‑
15/IL
‑
15Rα复合物，并且异源蛋白是用于半衰期延长的全长非结合抗体，或者是用于靶向、多功能和半衰期延长的特异性抗体或片段。
[0016]在各种实施方案中，本专利技术的IL
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15融合蛋白包含IL
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15/IL
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15Rα复合物，并且异源蛋白是呈全长IgG或抗体片段形式的抗体(单特异性或双特异性)，并提供与IL
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15/IL
‑
15RαSushi复合物的加性或协同作用。
[0017]在各种实施方案中，本专利技术的IL
‑
15融合蛋白包含IL
‑
15/I本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的白介素
‑
15(IL
‑
15)融合蛋白复合物，包含：(1)IL
‑
15多肽(或其变体)，所述IL
‑
15多肽(或其变体)与异源蛋白连接；和(2)IL
‑
15受体α(“IL
‑
15Rα”)结构域，所述IL
‑
15受体α(“IL
‑
15Rα”)结构域与所述IL
‑
15多肽非共价连接以形成IL
‑
15/IL
‑
15Rα
‑
异源蛋白融合蛋白，其中IL
‑
15变体多肽选自具有SEQ ID NO:56
‑
63和66
‑
81中列出的氨基酸序列的多肽的组。2.根据权利要求1所述的IL
‑
15/IL
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15Rα
‑
异源蛋白融合蛋白，其中所述IL
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15多肽连接到所述异源蛋白的C末端。3.根据权利要求1所述的IL
‑
15/IL
‑
15Rα
‑
异源蛋白融合蛋白，其中所述IL
‑
15多肽连接到所述异源蛋白的N末端。4.一种分离的IL
‑
15/IL
‑
15Rα
‑
异源蛋白融合蛋白，包含：(1)IL
‑
15Rα结构域，所述IL
‑
15Rα结构域与异源蛋白连接；和(2)IL
‑
15多肽(或其变体)，所述IL
‑
15多肽(或其变体)与所述IL
‑
15Rα结构域非共价连接。5.根据权利要求4所述的IL
‑
15/IL
‑
15Rα
‑
异源蛋白融合蛋白，其中所述IL
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15Rα结构域连接到所述异源蛋白的C末端。6.根据权利要求4所述的IL
‑
15/IL
‑
15Rα
‑
异源蛋白融合蛋白，其中所述IL
‑
15Rα结构域连接到所述异源蛋白的N末端。7.根据权利要求1至6中任一项所述的IL
‑
15/IL
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15Rα
‑
异源蛋白融合蛋白，其中所述IL
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15Rα结构域包含SEQ ID NO:4中列出的氨基酸序列或其任何功能片段。8.根据权利要求1至7中任一项所述的IL
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15/IL
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15Rα
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异源蛋白融合蛋白，其中所述IL
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15Rα结构域是IL
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15受体αSushi(“IL
‑
15RαSushi”)结构域，其中所述IL
‑
15RαSushi结构域包含与SEQ ID NO:5中列出的序列至少90％同源的氨基酸序列。9.根据权利要求8所述的IL
‑
15/IL
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15Rα
‑
异源蛋白融合蛋白，其中所述IL
‑
15RαSushi结构域包含与SEQ ID NO:5中列出的序列至少90％同源的氨基酸序列。10.根据权利要求1至9中任一项所述的IL
‑
15/IL
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15Rα
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异源蛋白融合蛋白，其中所述异源蛋白是Fc结构域，并且其中每个IL
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15多肽通过肽接头共价附接到Fc结构域。11.根据权利要求10所述的IL
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15/IL
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15Rα
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Fc融合蛋白复合物，其中所述肽接头选自SEQ ID NO:9
‑
12、SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:153
‑
154中列出的序列的组。12.根据权利要求1至11中任一项所述的IL
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15/IL
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15Rα
‑
异源蛋白融合蛋白，其中所述异源蛋白选自由以下组成的组：能够与肿瘤相关抗原(TAA)或组织特异性抗原或靶、细胞表面分子或细胞外基质蛋白、蛋白酶和任何翻译后修饰残基结合的抗体、抗体片段、配体或其变体、受体或其变体。13.根据权利要求12所述的构建体，其中所述抗体或抗体片段选自由以下组成的组：PD
‑
1拮抗性抗体；PD
‑
L1拮抗性抗体；CTLA
‑
4拮抗性抗体；CD20拮抗性抗体；Her
‑
2/neu拮抗性抗体；EGFR拮抗性抗体；FAP拮抗性抗体；针对整联蛋白α4β7的抗炎抗体；TNFα拮抗性抗体；和激动性CD40抗体。14.根据权利要求13所述的构建体，其中所述抗体是拮抗性成纤维细胞活化蛋白(FAP)抗体或抗体片段。15.根据权利要求14所述的构建体，其中所述抗体是包含SEQ ID NO:109和110中列出的重链和轻链氨基酸序列的人源化抗FAP抗体。
16.根据权利要求13所述的构建体，其中D1结构域是针对免疫检查点调节剂的抗体或抗体片段。17.根据权利要求16所述的构建体，其中所述抗体是拮抗性程序性死亡
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1(PD
‑
1)抗体或抗体片段。18.根据权利要求17所述的构建体，其中所述抗体是选自包含以下的抗体的拮抗性PD
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1抗体：SEQ ID NO:111和112中列出的重链和轻链氨基酸序列；SEQ ID NO:113和114中列出的重链和轻链氨基酸序列；SEQ ID NO:115和116中列出的重链和轻链氨基酸序列；SEQ ID NO:117和118中列出的重链和轻链氨基酸序列；以及SEQ ID NO:119和120中列出的重链和轻链氨基酸序列。19.根据权利要求1至11中任一项所述的IL
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15/IL
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15Rα
‑
异源蛋白融合蛋白，其中所述异源蛋白选自由提供半衰期延长的全长无效抗体或抗体片段组成的组。20.根据权利要求1至11中任一项所述的IL
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15/IL
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15Rα
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异源蛋白融合蛋白，其中所述异源蛋白选自由以下组成的组：提供与IL
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15/IL
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15Rα复合物的加性或协同作用的全长IgG或双特异性双抗体。21.一种分离的IL
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15融合蛋白复合物，包含：(1)两个IL
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15多肽(或其变体)，所述两个IL
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15多肽(或其变体)与两个异源蛋白连接；和(2)两个IL
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15Rα结构域，所述两个IL
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15Rα结构域与每个IL
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15多肽非共价连接以形成二聚体IL
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15/IL
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15Rα
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异源蛋白融合蛋白复合物，其中IL
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15变体多肽选自具有SEQ ID NO:56
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63和66
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81中列出的氨基酸序列的多肽的组。22.根据权利要求21所述的IL
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15/IL
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15Rα
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异源蛋白融合蛋白复合物，其中所述两个IL
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15多肽连接到所述两个异源蛋白的C末端。23.根据权利要求21所述的IL
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15/IL
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15Rα
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异源蛋白融合蛋白复合物，其中所述两个IL
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15多肽连接到所述两个异源蛋白的N末端。24.根据权利要求21至23中任一项所述的IL
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15/IL
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15Rα
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异源蛋白融合蛋白复合物，其中所述IL
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15Rα结构域包含SEQ ID NO:4中列出的氨基酸序列或其任何功能片段。25.根据权利要求21至23中任一项所述的IL
‑
15/IL
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15R...

【专利技术属性】
技术研发人员：李跃升，芮凌云，徐静，
申请(专利权)人：科优基因公司，
类型：发明
国别省市：