一种法国梧桐花粉过敏原磷酸丙糖异构酶及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种新的法国梧桐花粉的过敏原磷酸丙糖异构酶及其作为药物用于过敏性疾病的预防、诊断、治疗的用途。包括：（a）包含序列2所示的氨基酸序列的蛋白质；（b）包含序列2所示的氨基酸序列中任何氨基酸被取代、修饰、缺失或添加而成的氨基酸序列，及其所构成的具有过敏原活性、低过敏原活性的蛋白质；（c）包含与序列2所示的氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列，及其所构成的具有过敏原活性的蛋白质，或与序列2所示的氨基酸序列具有免疫交叉反应性的过敏原。本发明专利技术所公开的过敏原是首次在法国梧桐花粉中发现，可用于制备梧桐花粉过敏原检测试剂盒，或个体化脱敏疫苗的开发和应用。发和应用。发和应用。

【技术实现步骤摘要】
一种法国梧桐花粉过敏原磷酸丙糖异构酶及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物学、免疫学和生物信息学领域，特别涉及一种法国梧桐花粉过敏原磷酸丙糖异构酶及其应用。

技术介绍

[0002]过敏性疾病，又称变态反应性疾病，是一种常见的慢性炎症性疾病。据统计，全世界有30%~40%的人群被过敏问题困扰，过敏性疾病成为全球第六大疾病。其中以IgE介导的过敏性疾病最为常见，包括哮喘、鼻炎、严重过敏反应、药物过敏、食物过敏、湿疹、荨麻疹和血管性水肿等。花粉是最重要的空气过敏原之一，花粉症是指由花粉变应原引起的IgE介导的累及呼吸道、皮肤等系统的过敏性疾病，发病率逐年升高，特别是在工业地区。
[0003]法国梧桐被作为城市观赏树木在西欧、北美等地广泛种植，在中国的许多城市如上海、南京、武汉等也作为行道树随处可见。其传粉期短而密集，近年来，花粉浓度显著增加，致敏率在世界各地从2%
‑
56%不等，被认为是引起花粉症的重要原因之一。在过去的10年里，人们对法国梧桐花粉进行了广泛的研究，特别是在西欧城市，并从提取物中鉴定出四种过敏原，分别是Pla a 1, Pla a 2, Pla a 3和Pla a profilin，但其中仍有新过敏原存在。
[0004]目前，过敏原的诊断和免疫治疗仍然主要基于过敏原的粗提物，这些粗提物都是成分复杂的混合物。因此，鉴定和分离IgE介导的过敏原是一项必要的任务，以提高对这种日益增加的临床疾病的诊断和治疗。新致敏组分的发现无疑丰富了梧桐花粉过敏原的组分信息，有利于梧桐花粉过敏的诊断和治疗的精准化和个体化，随着科学技术的发展和对梧桐花粉过敏原组份的不断深入研究，成分清晰且作用机理明确的新型过敏原疫苗有望成为替代花粉粗提物的治疗方案，从而高效地预防和治疗梧桐过敏性疾病。

技术实现思路

[0005]专利技术目的：针对现有技术中存在的不足，本专利技术所要解决的技术问题是提供了一种法国梧桐花粉的新过敏原蛋白磷酸丙糖异构酶。
[0006]本专利技术还要解决的技术问题包括提供了法国梧桐花粉磷酸丙糖异构酶的纯化制备、核酸或基因序列的克隆，其编码所述的法国梧桐花粉的过敏原磷酸丙糖异构酶、及其致敏性的研究应用。
[0007]本专利技术还要解决的技术问题是提供了表达盒、重组载体、重组蛋白、重组细胞或重组菌。
[0008]本专利技术还要解决的技术问题是通了法国梧桐花粉的过敏原、所述的核酸或基因、所述的表达盒、重组载体、重组蛋白、重组细胞或重组菌株在用于制备诊断梧桐花粉过敏性疾病的试剂盒或预防或治疗梧桐花粉过敏性疾病的药物中的应用。
[0009]本专利技术最后要解决的技术问题是提供了一种用于预防或治疗梧桐花粉过敏症的药物或疫苗或用于过敏原诊断的试剂盒。
[0010]技术方案：为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种法国梧桐花粉的过敏原蛋白磷酸丙糖异构酶，所述过敏原磷酸丙糖异构酶包含：（a）如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；或（b）在（a）中的氨基酸序列经过取代、修饰、缺失或添加一个或几个氨基酸且具具有过敏原活性、低过敏原活性的蛋白质；或（c）与（a）中的氨基酸序列具有90%以上的同一性的氨基酸序列所组成的具有过敏原活性的蛋白质；或（d）与（a）的蛋白质具有免疫交叉反应性的过敏原蛋白。
[0011]本
技术实现思路
还包括组成如所述过敏原蛋白磷酸丙糖异构酶的氨基酸，所述氨基酸包含：（2a）如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；（2b）与（2a）所示的氨基酸序列至少有90%的同源性；（2c）与（2a）所示的氨基酸序列的互补序列，以及该互补序列杂交组成的活性过敏原蛋白。
[0012]本
技术实现思路
还包括编码所述的过敏原蛋白磷酸丙糖异构酶或所述的氨基酸的核酸或基因，所述核酸或基因包含：（3a）如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；（3b）与（3a）中的核苷酸序列至少有90%的同源性；（3c）与（3a）核苷酸序列互补的单链DNA或者RNA序列。
[0013]本
技术实现思路
还包括表达盒、重组载体、重组蛋白、重组细胞或重组菌，其包含所述的核酸或基因。
[0014]本
技术实现思路
还包括所述的法国梧桐花粉的过敏原磷酸丙糖异构酶、所述的核酸或基因、所述的表达盒、重组载体、重组蛋白或重组细胞在用于制备诊断梧桐花粉过敏性疾病的试剂盒或预防或治疗梧桐花粉过敏性疾病的药物中的应用。
[0015]本
技术实现思路
还包括所述的法国梧桐花粉的过敏原磷酸丙糖异构酶、所述的氨基酸、所述的核酸或基因、所述的表达盒、重组载体、重组蛋白、重组细胞或重组菌在制备检测患者血清中的磷酸丙糖异构酶特异性IgE含量的药物或试剂中的应用。
[0016]本
技术实现思路
还包括任何涉及以下（d）~（f）中的用于预防、诊断、治疗过敏性疾病的制剂：（d）以所述的过敏原蛋白磷酸丙糖异构酶、所述的氨基酸或所述的核苷酸作为有效成分的预防或治疗剂；（e）源自所述的过敏原蛋白磷酸丙糖异构酶的具有免疫调控性的T
‑
细胞反应性多肽片段、B
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细胞反应性多肽片段、多肽片段与载体蛋白融合构建的蛋白或多核苷酸的至少一种作为有效成分的预防或治疗剂；（f）源自所述的过敏原蛋白的特异性治疗抗体，所述抗体包括多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体或人源化改性抗体中的一种。
[0017]本
技术实现思路
还包括一种用于预防或治疗过敏性疾病的药物，所述药物为单方或复方制剂，其包括所述的过敏原蛋白磷酸丙糖异构酶、所述的氨基酸或所述的核酸或基因。
[0018]其中，所述药物为过敏原疫苗。所述过敏原疫苗包括DNA疫苗、重组活菌疫苗和重
组蛋白疫苗。
[0019]本
技术实现思路
还包括一种用于过敏原诊断的试剂盒，所述试剂盒包括所述的过敏原蛋白磷酸丙糖异构酶、所述的氨基酸或所述的核酸或基因。
[0020]其中，所述试剂盒还包括吸附或连接所述的过敏原的固相载体。
[0021]有益效果：本专利技术通过对梧桐花粉中的过敏原组分进行挖掘，最终通过传统的色谱分离纯化与串联质谱鉴定技术结合的方法从梧桐花粉过敏原中鉴定到一种新的具有血清特异性IgE结合活性的组分，其为法国梧桐花粉的过敏原磷酸丙糖异构酶的基因序列及其氨基酸序列。通过对该过敏原磷酸丙糖异构酶进行研究发现，其可以通过制备过敏原疫苗或相关药物用于过敏性疾病的脱敏治疗和预防。因此以上专利技术对临床诊断和治疗梧桐花粉过敏患者均具有重要价值。
附图说明
[0022]图1A是在HiTrap Q HP阴离子交换柱上对梧桐花粉提取物的洗脱图谱，用箭头标记的部分被合并起来用于进一步纯化的，黑色框中是含有梧桐花粉磷酸丙糖异构酶的部分。
[0023]图1B是合并后在Superdex G75 increase色谱柱上的洗脱图，其中5
‑
6部分（黑框标出）是含有梧桐花粉磷酸丙糖异构酶的部分。
[0024]图1C是合并后的组分在1ml HiTrap SP HP柱上纯化的图谱，黑色框标记的部分为纯化得到的梧桐花粉磷酸丙糖异构酶蛋白。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种法国梧桐花粉的过敏原蛋白磷酸丙糖异构酶，其特征在于：所述过敏原磷酸丙糖异构酶包含：（a）如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；或（b）在（a）中的氨基酸序列经过取代、修饰、缺失或添加一个或几个氨基酸且具具有过敏原活性、低过敏原活性的蛋白质；或（c）与（a）中的氨基酸序列具有90%以上的同一性的氨基酸序列所组成的具有过敏原活性的蛋白质；或（d）与（a）的蛋白质具有免疫交叉反应性的过敏原蛋白。2.组成如权利要求1所述过敏原蛋白磷酸丙糖异构酶的氨基酸，其特征在于：所述氨基酸包含（2a）如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；（2b）与（2a）所示的氨基酸序列至少有90%的同源性；（2c）与（2a）所示的氨基酸序列的互补序列，以及该互补序列杂交组成的活性过敏原蛋白。3.编码权利要求1所述的过敏原蛋白磷酸丙糖异构酶或权利要求2所述的氨基酸的核酸或基因，其特征在于，所述核酸或基因包含：（3a）如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；（3b）与（3a）中的核苷酸序列至少有90%的同源性；（3c）与（3a）核苷酸序列互补的单链DNA或者RNA序列。4.表达盒、重组载体、重组蛋白、重组细胞或重组菌，其特征在于，其包含权利要求3所述的核酸或基因。5.权利要求1所述的法国梧桐花粉的过敏原磷酸丙糖异构酶、权利要求2所述的氨基酸、权利要求3所述的核酸或基因、权利要求4所述的表达盒、重组载体、重组蛋白、重组细胞或重组菌在用于制备诊断梧桐花粉过敏性...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏继福，许志强，焦永欣，宋乐彬，
申请(专利权)人：江苏省人民医院南京医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：