一种卵母细胞和胚胎玻璃化冷冻载体制造技术

本实用新型专利技术提供了一种卵母细胞和胚胎玻璃化冷冻载体，属于动物胚胎工程技术领域。本实用新型专利技术所述卵母细胞和动物胚胎玻璃化冷冻载体包括冷冻管本体，所述冷冻管本体的一端为U型斜口，在所述冷冻管本体的U型斜口端的内壁上贴附有吸水材料。在将含有卵母细胞和/或胚胎的冷冻液转移至吸水材料上后，可自动吸取多余冷冻液，控制最终冷冻液体积在0.5μl左右，大大提高了冷冻效率。采用本实用新型专利技术的冷冻载体对动物卵母细胞和/或胚胎进行玻璃化冷冻，胚胎的复苏率可达到99％以上。胚胎的复苏率可达到99％以上。胚胎的复苏率可达到99％以上。

【技术实现步骤摘要】
一种卵母细胞和胚胎玻璃化冷冻载体


[0001]本技术属于动物胚胎工程
，具体涉及一种卵母细胞和胚胎玻璃化冷冻载体。

技术介绍

[0002]卵母细胞和胚胎的玻璃化冷冻是将卵母细胞和胚胎通过系列脱水后，放置在一个载体上直接投入零下196℃的液氮环境中快速降温，使细胞内外液体均达到玻璃化状态。卵母细胞和胚胎冷冻是保存动物遗传资源的重要方法之一。玻璃化冷冻是采用较高浓度及极其黏稠的冷冻保护剂处理卵母细胞和胚胎，使胚胎在冷冻的过程中，从生理温度急速降温到
‑
196℃，胚胎细胞内外液体瞬间冻结成玻璃化固体状态。与程序冷冻法相比，玻璃化方法冷冻过程中，胚胎细胞内的液体不会形成冰晶，从而避免了冰晶对卵母细胞和胚胎细胞的物理化学损伤，获得了较好的冷冻效果。玻璃化冷冻胚胎复苏率通常达到95％以上，若冷冻囊胚，效果则更好，复苏率可达到99％以上，显著的高于程序冷冻方法，优势也较明显，所以越来越多的中心逐步开始使用玻璃化冷冻方法，也成为现阶段胚胎冷冻的主要方法。同样，玻璃化冷冻技术已成为冷冻保存卵母细胞的金标准。
[0003]现有技术中心公开了多种胚胎玻璃化冷冻载体，如开放式拉长细管(OPS)和 Cryotop。但是利用OPS和Cryotop进行玻璃化冷冻的胚胎解冻后的存活率和受胎率不理想。这是由于，最终冷冻液体积的大小会影响胚胎冷冻/解冻过程的降温和升温的速度，从而决定最终的冷冻效果。例如，OPS的最终冷冻液体积是 2～5μl，冷冻体积较大。Cryotop的最终冷冻液体积可控制在1μl左右，但是需要人工吸取多余的液体，这需要操作人员多年的培训和工作经验才能完成这一复杂的步骤，因而操作效果因人而异，不稳定。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本技术的目的在于提供一种卵母细胞和胚胎玻璃化冷冻载体，能够控制最终冷冻液体积在0.3～0.8μl，大大提高了冷冻效率。
[0005]本技术提供了一种卵母细胞和胚胎玻璃化冷冻载体，包括冷冻管本体，所述冷冻管本体的一端为U型斜口，其特征在于，在所述冷冻管本体的U型斜口端的内壁上贴附有吸水材料。
[0006]优选的，所述吸水材料包括滤纸。
[0007]优选的，所述吸水材料的形状包括长方形；所述吸水材料的长度为18～20 mm，所述吸水材料的宽度为5～6mm。
[0008]优选的，所述吸水材料的外沿和U型斜口的外沿平齐。
[0009]优选的，所述U型斜口的斜角的角度为60
°
。
[0010]优选的，所述U型斜口的长度为0.5～1cm
[0011]优选的，所述冷冻管本体由精液冷冻管一端斜切制备得到；所述精液冷冻管的规格为0.25mL。
[0012]优选的，所述吸水材料自U型斜口插入冷冻管本体内，自然贴附于冷冻管本体的内壁上，不通过粘附剂粘附。
[0013]本技术提供了一种卵母细胞和胚胎玻璃化冷冻载体，包括冷冻管本体，所述冷冻管本体的一端为U型斜口，在所述冷冻管本体的U型斜口端的内壁上贴附有吸水材料。在将含有卵母细胞和/或胚胎的冷冻液转移至吸水材料上后，可自动吸取多余的冷冻液，从而能够控制最终冷冻液体积在0.5μl左右，大大提高了冷冻效率和冷冻胚胎复苏率，命名这种载体为“Paper Straw”或叫“纸管”。采用本技术的冷冻载体对动物卵母细胞和/或胚胎进行玻璃化冷冻，胚胎的复苏率在99％以上。此外，采用本技术的载体对动物卵母细胞和/或胚胎进行玻璃化冷冻，操作简单，技术人员不需要培训便可应用，为玻璃化冷冻技术商业化提供了技术保障，大大扩大了此项技术在家畜育种中的广泛应用。
附图说明
[0014]图1为精液冷冻管的结构示意图，其中1
‑
精液冷冻管本体、11
‑
棉塞；
[0015]图2为对精液冷冻管进行斜切的示意图，其中1
‑
精液冷冻管本体、11
‑
棉塞、 3
‑
手术刀、4
‑
U型斜口长度、5
‑‑
U型斜口；
[0016]图3为吸水材料自U型斜口插入冷冻管本体内的示意图，其中，1
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精液冷冻管本体、11
‑
棉塞、2
‑
吸水材料、5
‑‑
U型斜口；
[0017]图4为卵母细胞和动物胚胎玻璃化冷冻载体的吸水材料上加入含有卵母细胞和/或胚胎的冷冻液的示意图，其中，1
‑
精液冷冻管本体、11
‑
棉塞、2
‑
吸水材料、5
‑‑
U型斜口、6
‑
含有卵母细胞和/或胚胎的冷冻液。
具体实施方式
[0018]本技术提供了一种卵母细胞和胚胎玻璃化冷冻载体，包括冷冻管本体，所述冷冻管本体的一端为U型斜口，其特征在于，在所述冷冻管本体的U型斜口端的内壁上贴附有吸水材料。
[0019]本技术的卵母细胞和胚胎玻璃化冷冻载体适用于人和动物。
[0020]在本技术中，所述吸水材料优选的包括滤纸，滤纸经济便宜，本技术的卵母细胞和胚胎玻璃化冷冻载体能够达到和Cryotop相当的冷冻效果，但是更经济实惠、成本更低，Cryotop的售价是20美元，而本技术的胚胎玻璃化冷冻载体成本约合0.5美元。在本技术中，所述吸水材料的形状优选的包括长方形；所述吸水材料的长度优选为18～20mm，所述吸水材料的宽度优选为5～6mm。在本技术中，所述吸水材料的外沿和U型斜口的外沿平齐。
[0021]在本技术中，所述U型斜口的斜角的角度优选为60
°
；所述U型斜口的长度为0.5～1cm。
[0022]在本技术中，所述卵母细胞和胚胎玻璃化冷冻载体的制备方法优选的包括以下步骤：对精液冷冻管一端斜切，形成含有U型斜口的冷冻管本体；在所述冷冻管本体的U型斜口端的内壁上贴附吸水材料。
[0023]在本技术中，所述斜切优选的采用手术刀进行；所述斜切所述精液冷冻管的规格优选为0.25mL或0.5mL，所述精液冷冻管的结构示意图参见图1，斜切的示意图参见图
2。
[0024]在本技术中，所述吸水材料自U型斜口插入冷冻管本体内，自然贴附于冷冻管本体的内壁上，不通过粘附剂粘附。在本技术中，所述吸水材料自U型斜口插入冷冻管本体内的示意图参见图3。
[0025]本技术所述卵母细胞和胚胎玻璃化冷冻载体的使用方法优选的包括以下步骤：
[0026]将含有卵母细胞和/或胚胎的冷冻液转移至上述方案所述玻璃化冷冻载体的吸水材料上，并将其前端直接投入液氮里进行冷冻。然后把冷冻载体放入普通液氮罐里保存。示意图参见图4。
[0027]本技术的卵母细胞和胚胎玻璃化冷冻载体在使用前优选的经过灭菌处理；所述灭菌的方式优选为气体灭菌，更优选为臭氧灭菌。
[0028]在本技术中，所述转移的时间优选本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种卵母细胞和胚胎玻璃化冷冻载体，包括冷冻管本体，所述冷冻管本体的一端为U型斜口，其特征在于，在所述冷冻管本体的U型斜口端的内壁上贴附有吸水材料。2.根据权利要求1所述的卵母细胞和胚胎玻璃化冷冻载体，其特征在于，所述吸水材料包括滤纸。3.根据权利要求1或2所述的卵母细胞和胚胎玻璃化冷冻载体，其特征在于，所述吸水材料的形状包括长方形；所述吸水材料的长度为18～20mm，所述吸水材料的宽度为5～6mm。4.根据权利要求3所述的卵母细胞和胚胎玻璃化冷冻载体，其特征在于，所述吸水材料的外沿和U型斜口的外沿平齐。5.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：何牧仁，
申请(专利权)人：草原和牛投资有限公司，
类型：新型
国别省市：