本发明专利技术涉及一种抗菌肽、含有其的冻干粉及应用。所述抗菌肽的氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示。所述抗菌肽对芽孢杆菌属、葡萄球菌属、肠杆菌属、假单胞菌属、链球菌属、肠球菌属、细球菌属、莫拉氏菌属、棒状杆菌属、克雷白氏菌属、沙雷氏菌属、变形菌属、摩氏摩根菌、嗜血杆菌属、黄单细胞菌属、不动杆菌属和丙酸杆菌属属中微生物具有抗菌活性。生物具有抗菌活性。
【技术实现步骤摘要】
一种抗菌肽、含有其的冻干粉及应用
[0001]本专利技术涉及一种抗菌肽。
技术介绍
[0002]随着青霉素的首次使用，人类历史上第一次获得了与病原菌感染对抗的胜利，但病原体多次与抗生素接触后，病原菌的随机突变基因经过优胜劣汰的自然选择，逐步产生了耐药性，近年来不断出现的“超级细菌”就是典型的例子。许多发达国家开始寻找替代抗生素的新型药物，已经成为当前研究的热点课题。
[0003]抗菌肽是一类广泛存在于动物、植物、昆虫及人体内，由基因编码并具有特定空间结构的小分子多肽，分子量在2000至7000左右，由20至60个氨基酸残基组成，具有抗菌种类多、低计量效果好。但天然抗菌肽具有一定的局限性，包括抗菌活性低、不稳定及溶血性较高等缺陷。
[0004]此外，抗菌肽冻干粉针剂需要克服长期储存稳定性不好的缺点，才能将抗菌肽转化为能够用于临床的新型治疗药物。
技术实现思路
[0005]本专利技术之一提供了一种抗菌肽，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
[0006]本专利技术之二提供了一种含有本专利技术之一所述的抗菌肽的组合物。
[0007]在一个具体实施方式中，所述组合物还包括赋形剂、稳定剂和pH调节剂。
[0008]在一个具体实施方式中，所述赋形剂选自甘露醇、麦芽糖醇、乳糖、葡聚糖、葡萄糖和山梨醇中的至少一种。
[0009]在一个具体实施方式中，所述稳定剂选自亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠和硫代硫酸钠中的至少一种。
[0010]在一个具体实施方式中，所述pH调节剂选自酸和/或碱，优选地，所述pH调节剂选自氢氧化钠和/或盐酸。
[0011]在一个具体实施方式中，所述组合物的pH值为5至7。
[0012]在一个具体实施方式中，所述抗菌肽1至10质量份，所述赋形剂50至100质量份，所述稳定剂0.05至0.07质量份。
[0013]在一个具体实施方式中，所述组合物的剂型为冻干粉。使用时，将所述冻干粉可以溶于合适量的生理盐水等合适的溶剂中。
[0014]本专利技术之三提供了根据本专利技术之一所述的抗菌肽或本专利技术之二中任意一项所述的组合物在用于制备抗芽孢杆菌属、葡萄球菌属、肠杆菌属、假单胞菌属、链球菌属、肠球菌属、细球菌属、莫拉氏菌属、棒状杆菌属、克雷白氏菌属、沙雷氏菌属、变形菌属、摩氏摩根菌、嗜血杆菌属、黄单细胞菌属、不动杆菌属和丙酸杆菌属中的至少一种的药物中的应用。
[0015]在一个具体实施方式中，所述应用为在用于制备抗金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏杆菌、枯草芽孢杆菌和铜绿假单胞菌中的至少一种的药物中的应用。
[0016]本专利技术的有益效果：
[0017]1)本专利技术的抗菌肽具有良好的抗菌活性。
[0018]2)本专利技术的抗菌肽冻干粉稳定性好，可以长期放置保存，延长了制品的保存期限并方便了运输。
具体实施方式
[0019]以下通过优选的实施案例的形式对本专利技术的上述内容作进一步的详细说明，但其不构成对本专利技术的限制。
[0020]如无特别说明，本专利技术的实施例中的试剂均可通过商业途径购买。
[0021]本专利技术的抗菌肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，由吉尔化学合成，其所合成的抗菌肽的含量为99.7％。
[0022]普通营养琼脂培养基和营养肉汤培养基均购买于北京索莱宝科技有限公司。
[0023]PBS为pH7.2的磷酸盐缓冲液购买于北京索莱宝科技有限公司。
[0024]10mM枸橼酸缓冲液配方：枸橼酸0.11g，枸橼酸钠2.79g，用无菌注射水定容至1000mL。
[0025]20mM枸橼酸缓冲液配方：0.22g，枸橼酸钠5.58g，用无菌注射水定容至1000mL。
[0026]枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501、金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003、大肠埃希氏菌CMCC(B)44102和铜绿假单胞菌CMCC(B)10104均购买于北京三药科技开发公司。
[0027]实施例1
[0028]抑菌活性检测
[0029]在96孔板的每个孔中加入100μL营养肉汤培养基，然后在第一列的第一行中加入浓度为512μg/mL的抗菌肽水溶液(即仅为抗菌肽和水的混合溶液)100μL，将该孔中的营养肉汤培养基和抗菌肽水溶液混合均匀，从第一列第一行吸取100μL加入第一列第二行，混合均匀后，再从第一列第二行取100μL加入下一行，以此重复，直至第一列第八行吸取100μL弃去；然后将金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003稀释至104至105CFU/mL，按每孔100μL菌液接种于96孔板，此时抗菌肽在第一列的第一行的终浓度为256μg/mL，在第一列的第八行终浓度为1μg/mL。将第二列、第三列依照第一列的方式配制作为第一列的重复列，第四、五、六列使用纯化水依照第一列方式配制为阴性对照；第七、八、九列依照第一列配制成终浓度为1μg/ml的氨苄西林作为阳性对照。将96孔板置于37℃条件培养过夜，使用酶标仪测量OD
620
的值。以抗菌肽浓度为横坐标，以OD
620
值为纵坐标做曲线，曲线拐点右侧第一个测量数据的点所对应的浓度即为最小抑菌浓度(MIC)。
[0030]对于枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501、大肠埃希氏菌CMCC(B)44102和铜绿假单胞菌CMCC(B)10104的最小抑菌浓度(MIC)测定同对金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003的活性测定。
[0031]抗菌肽对四种细菌的最小抑菌浓度(MIC)的结果见表1。
[0032]表1
[0033][0034]根据表1可知，抗菌肽在2μg/mL以上对于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有较好的抑菌作用。
[0035]实施例2
[0036]体外溶血率检测
[0037]抗菌肽对动物红细胞溶血率检测使用的血样为脱纤维绵羊血，购买于北京索莱宝科技有限公司。
[0038]抗菌肽的溶血活率检测方法为：将脱纤维绵羊血用PBS缓冲液(pH7.2，购买于北京索莱宝科技有限公司)洗涤后离心(1500r、15min)弃去上清液，余下为红细胞液体，将体积比为92:8的0.9wt％的氯化钠水溶液和弃去上清后的红细胞液混合，配制成8％的红细胞悬液，取100μL的8％红细胞悬液于96孔板各个孔中，然后向第一至三列中加入抗菌肽水溶液(由抗菌肽和纯化水配制溶液)，从而使第一列1至8行检测孔中的抗菌肽的终浓度分别为：2048μg/mL；1024μg/mL；512μg/mL；256μg/mL；128μg/mL；64μg/mL；32μg/mL；16μg/mL，第二列，第三列为第一列的重复列；阴性对照用PBS缓冲液，阳性对照为0.1％(v/v)Triton X
‑
100溶液。37℃下培养1h，1500rpm离心5分钟，将100μl上清液转移到新的96孔板中，使用酶标仪测量OD
414
值。根据OD
414
值计算出抗菌肽溶血率，结果见表2本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种抗菌肽，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。2.一种含有权利要求1所述的抗菌肽的组合物。3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括赋形剂、稳定剂和pH调节剂。4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述赋形剂选自甘露醇、麦芽糖醇、乳糖、葡聚糖、葡萄糖和山梨醇中的至少一种。5.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述稳定剂选自亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠和硫代硫酸钠中的至少一种。6.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述pH调节剂选自酸和/或碱，优选地，所述pH调节剂选自氢氧化钠和/或盐酸。7.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述组合物的pH值为5至7。8.根据权利要求3...
【专利技术属性】
技术研发人员：陶钐慧，姚志昂，李世军，李斌，李小芬，涂宇翰，杨文菁，殷赫阳，戚文淏，
申请(专利权)人：温州大学，
类型：发明
国别省市：
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