双特异性因子VIII模拟抗体制造技术

本发明专利技术涉及能够结合凝血因子IX(FIX)和/或其活化形式因子IXa(FIXa)以及因子X(FX)和/或其活化形式因子Xa(FXa)并促进FIXa对FX的激活的双特异性抗体，以及用于治疗罹患诸如具有或不具有抑制物的A型血友病等凝血病的受试者的方法和组合物。的方法和组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】双特异性因子VIII模拟抗体
[0001]序列表的援引并入
[0002]本申请与电子形式的序列表一起提交。该序列表的全部内容通过引用并入本文。
[0003]背景
[0004]在凝血病患者中，诸如在患有A型和B型血友病的人中，凝血级联的各个步骤由于例如功能性凝血因子的缺乏或存在不足而成为功能障碍的。凝血级联的一部分的这种功能障碍导致不充分的血液凝固以及潜在危及生命的出血，或对内部器官如关节的损伤。
[0005]凝血因子VIII(FVIII)缺乏症，常被称为A型血友病，是影响全世界约420,000人的先天性出血性病症，其中约有105,000人目前得到诊断。
[0006]A型血友病患者可以接受凝血因子替代疗法，如外源性FVIII。常规治疗由替代疗法组成，其作为出血发作的预防或按需治疗而提供。直到最近，对严重A型血友病患者的预防性治疗包括最多每周三次静脉内注射血浆来源的FVIII或重组FVIII或其长效变体。
[0007]然而，这类患者具有生成针对此类外源因子的中和抗体(所谓的抑制物)的风险，从而使得先前有效的疗法变得无效。具有抑制物的A型血友病患者是部分先天性、部分获得性的凝血病的非限制性实例。已经生成FVIII抑制物的患者不能用常规替代疗法治疗。外源性凝血因子只可以静脉内施用，这对于患者是相当不便和不适的。
[0008]由FVIII活性降低或缺乏引起的FXa形成不足和凝血酶生成减少是A型血友病患者的出血素质的根本原因。
[0009]FX向其酶活性形式FXa的蛋白水解转化可以通过包含FIXa及其辅因子激活的FVIII(FVIIIa)的内在FX激活复合物来实现。辅因子结合使FIXa的酶活性增加约五个数量级，并且据信通过Scheiflinger等人(2008)J Thromb Haemost，6：315
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322所概述的多种机制发生。值得注意的是，已发现FVIIIa使FIXa的构象得到稳定，FIXa具有增加的对FX的蛋白水解活性(Kolkman JA，Mertens K(2000)Biochemistry，39：7398
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7405，T，Brandstetter H(2009)Biol Chem，390：391
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400)。基于这一观察结果并意识到抗体是能够模拟多种蛋白质
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蛋白质相互作用的通用结合蛋白质，Scheiflinger等人对激动性抗FIX(a)抗体进行了筛选，这些抗体的特征在于在磷脂表面和钙的存在下，但是在不存在天然辅因子FVIIIa的情况下，增强FIXa对FX的激活的能力，并且从对5280个杂交瘤上清液的筛选中发现有88个产生表现出不同程度的FIXa激动活性的抗体，参见EP1220923 B1和EP1660536 B1。最近，一种新药emicizumab也被称为ACE910，已被批准用于皮下预防性治疗具有或不具有针对常规替代疗法因子的抑制物的A型血友病。Emicizumab是由Chugai Pharmaceuticals/Roche Pharmaceuticals开发的用于治疗A型血友病的人源化双特异性抗FIX(a)/抗FX(a)单克隆抗体。Emicizumab被设计为模拟FVIII辅因子功能(参见Sampei等人：(2013)PLoS One，8，e57479和WO2012/067176)。推测每毫升血浆采用30
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50μg emicizumab的治疗对应于每分升血浆至少10至15IU的等效因子VIII活性(Shima等人，N Engl J Med 2016；374：2044
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53)。然而，一些患者已经产生了针对emicizumab的抑制物(抗药物抗体)，从而使采用该化合物的治疗无效。
[0010]除了以emicizumab为例生成抑制物外，其他抗体性质对于针对患者实现有效的基于抗体的治疗也至关重要。特别是，已经证明了具有高非特异性结合倾向的抗体如何可能导致临床安全性问题。在一些报道中，高水平的非特异性结合导致抗体的循环半衰期缩短数倍，并导致针对患者的给药方案无效且繁琐(参见Dobson等人，Nature，volume 6，art.no.：38644(2016)和Avery等人，MAbs 2018，Vol.10，No.2，244
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255)。
[0011]WO2018/141863和WO2019/065795还公开了抗FIX(a)抗FX(a)双特异性抗体及其作为促凝剂用于治疗血友病的用途。
[0012]血友病群体中，特别是在患有凝血病的受试者中，仍存在许多尚未得到满足的医疗需求。本专利技术涉及能够替代FVIII并因此可用于治疗凝血病如A型血友病的改进的化合物。

技术实现思路

[0013]本专利技术涉及化合物，其在患有凝血病的患者，特别是缺乏功能性FVIII的患者，如A型血友病患者，包括具有抑制物的A型血友病患者中，充当凝血因子VIII(FVIII)的替代物。
[0014]本专利技术的一个方面涉及能够增强FXa的生成并因此使缺乏功能性FVIII的患者部分或完全恢复凝血的化合物。
[0015]在一个方面，所述化合物是抗体或其抗原结合片段。在一个这样的方面，所述化合物是多特异性抗体或其抗原结合片段，如双特异性抗体或其抗原结合片段。
[0016]在一个具体方面，本专利技术涉及在缺乏功能性FVIII的患者如A型血友病患者中充当FVIII的替代物的抗体或其抗原结合片段。
[0017]在一个这样的方面，所述抗体或其抗原结合片段能够结合FIX(a)并增加FIXa对FX的酶活性，任选地还能够结合FX。
[0018]在一个方面，本专利技术涉及能够结合FIX(a)和FX(a)的抗体或其抗原结合片段，包括双特异性抗体或其抗原结合片段，其增加FIXa对FX的酶活性。
[0019]在一个方面，本专利技术涉及能够结合FIX(a)和FX(a)的抗体或其抗原结合片段，其与本领域公开的抗体相比具有改善的性质。在一个这样的方面，与包括emicizumab在内的本领域的双特异性抗体相比，所述抗体或其抗原结合片段具有改善的促凝血性质和/或降低的非特异性结合例如DNA和/或胰岛素的倾向，和/或降低的自缔合倾向。
[0020]本专利技术的另一方面涉及作为双特异性抗体的一部分的单独组分(中间体)抗体或其抗原结合片段，如特定的抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段或特定的抗FX(a)抗体或其抗原结合片段。
[0021]本专利技术的另一方面涉及本文公开的抗体或其抗原结合片段，其用于预防和/或治疗凝血病、伴随凝血病的疾病或由凝血病引起的疾病。在一个方面，该凝血病是血友病，如具有或不具有抑制物的A型血友病。
[0022]本专利技术的又一方面涉及包含本文公开的抗体或其抗原结合片段的药物组合物，其被配制用于递送所述抗体以供预防和/或治疗凝血病，如具有或不具有抑制物的A型血友病，以及具有其内容物的注射装置。
[0023]本专利技术的另一方面涉及试剂盒，其包含(i)本文公开的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.能够与FIX(SEQ ID NO:89)和/或其活化形式(FIXa)结合并且能够与FX(SEQ ID NO:90)和/或其活化形式(FXa)结合的双特异性抗体或其抗原结合片段，其中所述双特异性抗体包含包含重链和轻链的抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段，以及包含重链和轻链的抗FX(a)抗体或其抗原结合片段，其中a)所述抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段的重链包含分别由SEQ ID NO:26、27和28表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段的轻链包含分别由SEQ ID NO:30、31和32表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FX(a)抗体或其抗原结合片段的重链包含分别由SEQ ID NO:18、19和20表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FX(a)抗体或其抗原结合片段的轻链包含分别由SEQ ID NO:22、23和24表示的CDR1
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3序列；或者b)所述抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段的重链包含分别由SEQ ID NO:26、27和28表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段的轻链包含分别由SEQ ID NO:30、31和32表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FX(a)抗体或其抗原结合片段的重链包含分别由SEQ ID NO:2、3和4表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FX(a)抗体或其抗原结合片段的轻链包含分别由SEQ ID NO:6、7和8表示的CDR1
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3序列；或者c)所述抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段的重链包含分别由SEQ ID NO:34、35和36表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段的轻链包含分别由SEQ ID NO:38、39和40表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FX(a)抗体或其抗原结合片段的轻链包含分别由SEQ ID NO:22、23和24表示的CDR1
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3序列；或者d)所述抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段的重链包含分别由SEQ ID NO:34、35和36表示的CDR1
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3序列；或者e)所述抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段的重链包含分别由SEQ ID NO:42、43和44表示
的CDR1
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3序列，并且所述抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段的轻链包含分别由SEQ ID NO:46、47和48表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FX(a)抗体或其抗原结合片段的重链包含分别由SEQ ID NO:18、19和20表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FX(a)抗体或其抗原结合片段的轻链包含分别由SEQ ID NO:22、23和24表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FX(a)抗体或其抗原结合片段的重链包含分别由SEQ ID NO:2、3和4表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FX(a)抗体或其抗原结合片段的轻链包含分别由SEQ ID NO:6、7和8表示的CDR1
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3序列；或者g)所述抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段的重链包含分别由SEQ ID NO:50、51和52表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段的轻链包含分别由SEQ ID NO:54、55和56表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FX(a)抗体或其抗原结合片段的重链包含分别由SEQ ID NO:18、19和20表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FX(a)抗体或其抗原结合片段的轻链包含分别由SEQ ID NO:22、23和24表示的CDR1
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3序列；或者h)所述抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段的重链包含分别由SEQ ID NO:50、51和52表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段的轻链包含分别由SEQ ID NO:54、55和56表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FX(a)抗体或其抗原结合片段的重链包含分别由SEQ ID NO:2、3和4表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FX(a)抗体或其抗原结合片段的轻链包含分别由SEQ ID NO:6、7和8表示的CDR1
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3序列；或者i)所述抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段的重链包含分别由SEQ ID NO:58、59和60表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段的轻链包含分别由SEQ ID NO:62、63和64表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FX(a)抗体或其抗原结合片段的重链包含分别由SEQ ID NO:18、19和20表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FX(a)抗体或其抗原结合片段的轻链包含分别由SEQ ID NO:22、23和24表示的CDR1
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3序列；或者
j)所述抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段的重链包含分别由SEQ ID NO:58、59和60表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段的轻链包含分别由SEQ ID NO:62、63和64表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FX(a)抗体或其抗原结合片段的重链包含分别由SEQ ID NO:2、3和4表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FX(a)抗体或其抗原结合片段的轻链包含分别由SEQ ID NO:6、7和8表示的CDR1
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3序列；或者k)所述抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段的重链包含分别由SEQ ID NO:66、67和68表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段的轻链包含分别由SEQ ID NO:70、71和72表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FX(a)抗体或其抗原结合片段的重链包含分别由SEQ ID NO:18、19和20表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FX(a)抗体或其抗原结合片段的轻链包含分别由SEQ ID NO:22、23和24表示的CDR1
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3序列；或者l)所述抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段的重链包含分别由SEQ ID NO:66、67和68表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段的轻链包含分别由SEQ ID NO:70、71和72表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FX(a)抗体或其抗原结合片段的重链包含分别由SEQ ID NO:2、3和4表示的CDR1
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3序列，并且所述抗FX(a)抗体或其抗原结合片段的轻链包含分别由SEQ ID NO:6、7和8表示的CDR1
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3序列；或者m)所述抗FIX(a)抗体或其抗原结合片段的重链包含分别由SEQ ID ...

【专利技术属性】
技术研发人员：K，
申请(专利权)人：诺和诺德股份有限公司，
类型：发明
国别省市：