耳蜗内毛细胞启动子及其用途制造技术

本公开提供了含有内毛细胞特异性启动子的多核苷酸，以及含有所述多核苷酸的载体，其可用于促进转基因在内毛细胞中的特异性表达。本文所述的多核苷酸可以可操作地连接至转基因，诸如编码治疗性蛋白质的转基因，以便促进所述转基因的内毛细胞特异性表达。本文所述的多核苷酸可以可操作地连接至治疗性转基因，并且用于治疗患有听力损失或有发展听力损失风险的受试者。险的受试者。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】耳蜗内毛细胞启动子及其用途
[0001]序列表
[0002]本申请含有已以ASCII格式以电子方式提交且特此以引用的方式整体并入的序列表。2020年11月3日创建的ASCII拷贝名为51471
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005WO2_Sequence_Listing_11.02.20_ST25且大小为7,108字节。

技术介绍

[0003]听力损失是重大的公共卫生问题，估计将影响近15％的学龄儿童和三分之一65岁的人。听力损失最常见的类型是感觉神经性听力损失，这是一类由内耳细胞(诸如耳蜗内毛细胞)或从内耳伸出到脑部的神经通路的缺陷引起的听力损失。感觉神经性听力损失通常是获得性的，并且其原因多种多样，包括声创伤、疾病或感染、头部创伤、耳毒性药物和衰老。感觉神经性听力损失也有遗传原因，诸如参与内耳发育和功能的基因的突变。已经鉴定出超过90种此类基因的突变，包括以常染色体隐性、常染色体显性和X连锁模式遗传的突变。
[0004]近年来，治疗听力损失的努力越来越多地集中在作为可能解决方案的基因疗法上；然而，仍存在很少特异性地靶向毛细胞的方法，而毛细胞通常与听力损失有关。需要靶向毛细胞以治疗感觉神经性听力损失的新疗法。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供了用于促进目标基因，诸如促进或改善毛细胞功能、再生或存活的基因在特定细胞类型中的表达的组合物和方法。本文所述的组合物和方法涉及刺激转基因在内耳的耳蜗毛细胞(例如，内耳细胞(IHC))中的转录的多核苷酸。本文所述的多核苷酸可以可操作地连接至转基因，并且可施用于患者以治疗或预防听力损失(例如，感觉神经性听力损失)。
[0006]在一些实施方案中，本专利技术提供了一种核酸载体，所述核酸载体包含与SEQ ID NO:1
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3中的任一个具有至少85％序列同一性(例如，85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性)的多核苷酸。在一些实施方案中，所述多核苷酸与SEQ ID NO:1具有至少85％序列同一性(例如，85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性)。在一些实施方案中，所述多核苷酸与SEQ ID NO:2具有至少85％序列同一性(例如，85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性)。在一些实施方案中，所述多核苷酸与SEQ ID NO:3具有至少85％序列同一性(例如，85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性)。
[0007]在一些实施方案中，所述多核苷酸可操作地连接至转基因。在一些实施方案中，所述转基因是异源序列。在一些实施方案中，所述转基因含有编码蛋白质(例如，治疗性蛋白质、报告蛋白或其他目标蛋白质)、短干扰RNA(siRNA)、反义寡核苷酸(ASO)、核酸酶(例如，
CRISPR相关蛋白9(Cas9)、转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)、锌指核酸酶(ZFN)或引导RNA(gRNA)的多核苷酸序列)，或者是微小RNA。在一些实施方案中，所述蛋白质是治疗性蛋白质。在一些实施方案中，所述多核苷酸能够指导哺乳动物IHC中来自所述多核苷酸序列的蛋白质、siRNA、ASO、核酸酶(例如，Cas9、TALEN、ZFN或gRNA)或微小RNA的IHC特异性表达。在一些实施方案中，所述哺乳动物IHC是人IHC。
[0008]在一些实施方案中，所述治疗性蛋白质是：肌动蛋白γ1(ACTG1)、成束蛋白肌动蛋白集束蛋白2(FSCN2)、根蛋白(RDX)、POU 4类同源框3(POU4F3)、Trio和F
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肌动蛋白结合蛋白(TRIOBP)、Taperin(TPRN)、含Xin肌动蛋白结合重复序列的2(XIRP2)、Atonal BHLH转录因子(ATOH1)、非生长因子依赖性1转录阻遏蛋白(GFI1)、胆碱能受体烟酸α9亚基(CHRNA9)、胆碱能受体烟酸α10亚基(CHRNA10)、钙和整联蛋白结合家族成员3(CIB3)、钙粘蛋白相关23(CDH23)、原钙粘附蛋白相关15(PCDH15)、Kinocilin(KNCN)、Pejvakin(DFNB59)、耳畸蛋白(Otoferlin)(OTOF)、MKRN2相反链(MKRN2OS)、Lim同源框3(LHX3)、跨膜通道样1(TMC1)、肌球蛋白XV(MYO15)、肌球蛋白7A(MYO7A)、肌球蛋白VI(MYO6)、肌球蛋白IIIA(MYO3A)、肌球蛋白IIIB(MYO3B)、含谷氧还蛋白和富半胱氨酸结构域的1(GRXCR1)、蛋白酪氨酸磷酸酶受体Q型(PTPRQ)、晚期角质化包膜蛋白6A(LCE6A)、脂氧合酶同源结构域1(LOXHD1)、ADP
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核糖基转移酶1(ART1)、ATP酶质膜Ca2+转运2(ATP2B2)、钙和整联蛋白结合家族成员2(CIB2)、钙电压门控通道辅助亚基α2δ4(CACNA2D4)、钙结合蛋白2(CABP2)、表皮生长因子受体途径底物8(EPS8)、EPS8样2(EPS8L2)、Espin(ESPN)、Espin样(ESPNL)、外周蛋白2(PRPH2)、硬纤毛蛋白(STRC)、溶质载体家族8成员A2(SLC8A2)、含CCHC型锌指的12(ZCCHC12)、含富亮氨酸的跨膜和O
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甲基转移酶结构域的2(LRTOMT2)、含富亮氨酸的跨膜和O
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甲基转移酶结构域的1(LRTOMT1)、USH1蛋白网络组分和谐素(USH1C)、含细胞外富亮氨酸的重复序列和纤连蛋白III型结构域的1(ELFN1)、三十四肽重复序列结构域24(TTC24)、肌营养不良蛋白(DYTN)、Kielin富半胱氨酸BMP调控因子(KCP)、卷曲螺旋富谷氨酸蛋白2(Coiled
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Coil Glutamate Rich Protein 2，CCER2)、富亮氨酸的重复序列和跨膜结构域2(Leucine Rich Repeats And Transmembrane Domains 2，LRTM2)、钾电压门控通道亚家族A成员10(KCNA10)、Clarin 1(CLRN1)、Clarin 2(CLRN2)、SKI家族转录辅阻遏蛋白1(SKOR1)、含Tctex1结构域的1(TCTEX1D1)、Fc受体样B(FCRLB)、溶质载体家族17成员8(SLC17A8)、含谷氧还蛋白和富半胱氨酸结构域的2(GRXCR2)、脑源性神经营养因子(BDNF)、丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin)家族E成员3(SERPINE3)、无义螺旋
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环
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螺旋1(Nescient Helix
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Loop Helix 1，NHLH1)、热激70KDa蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种核酸载体，所述核酸载体包含与SEQ ID NO:1
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3中的任一个具有至少85％序列同一性的多核苷酸。2.如权利要求1所述的核酸载体，其中所述多核苷酸与SEQ ID NO:1具有至少85％序列同一性。3.如权利要求1所述的核酸载体，其中所述多核苷酸与SEQ ID NO:2具有至少85％序列同一性。4.如权利要求1所述的核酸载体，其中所述多核苷酸与SEQ ID NO:3具有至少85％序列同一性。5.如权利要求1
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4中任一项所述的核酸载体，其中所述多核苷酸可操作地连接至转基因。6.如权利要求5所述的核酸载体，其中所述转基因是异源转基因。7.如权利要求5或6所述的核酸载体，其中所述转基因编码治疗性蛋白质、短干扰RNA(siRNA)、反义寡核苷酸(ASO)、核酸酶，或者是微小RNA。8.如权利要求5
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7中任一项所述的核酸载体，其中所述多核苷酸能够指导所述转基因在哺乳动物IHC中的耳蜗内毛细胞(IHC)特异性表达。9.如权利要求8所述的核酸载体，其中所述哺乳动物IHC是人IHC。10.如权利要求7
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9中任一项所述的核酸载体，其中所述治疗性蛋白质选自由以下组成的组：肌动蛋白γ1(ACTG1)、成束蛋白肌动蛋白集束蛋白2(FSCN2)、根蛋白(RDX)、POU 4类同源框3(POU4F3)、Trio和F
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肌动蛋白结合蛋白(TRIOBP)、Taperin(TPRN)、含Xin肌动蛋白结合重复序列的2(XIRP2)、Atonal BHLH转录因子(ATOH1)、非生长因子依赖性1转录阻遏蛋白(GFI1)、胆碱能受体烟酸α9亚基(CHRNA9)、胆碱能受体烟酸α10亚基(CHRNA10)、钙和整联蛋白结合家族成员3(CIB3)、钙粘蛋白相关23(CDH23)、原钙粘附蛋白相关15(PCDH15)、Kinocilin(KNCN)、Pejvakin(DFNB59)、耳畸蛋白(OTOF)、MKRN2相反链(MKRN2OS)、Lim同源框3(LHX3)、跨膜通道样1(TMC1)、肌球蛋白XV(MYO15)、肌球蛋白7A(MYO7A)、肌球蛋白VI(MYO6)、肌球蛋白IIIA(MYO3A)、肌球蛋白IIIB(MYO3B)、含谷氧还蛋白和富半胱氨酸结构域的1(GRXCR1)、蛋白酪氨酸磷酸酶受体Q型(PTPRQ)、晚期角质化包膜蛋白6A(LCE6A)、脂氧合酶同源结构域1(LOXHD1)、ADP
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核糖基转移酶1(ART1)、ATP酶质膜Ca2+转运2(ATP2B2)、钙和整联蛋白结合家族成员2(CIB2)、钙电压门控通道辅助亚基α2δ4(CACNA2D4)、钙结合蛋白2(CABP2)、表皮生长因子受体途径底物8(EPS8)、EPS8样2(EPS8L2)、Espin(ESPN)、Espin样(ESPNL)、外周蛋白2(PRPH2)、硬纤毛蛋白(STRC)、溶质载体家族8成员A2(SLC8A2)、含CCHC型锌指的12(ZCCHC12)、含富亮氨酸的跨膜和O
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甲基转移酶结构域的2(LRTOMT2)、含富亮氨酸的跨膜和O
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甲基转移酶结构域的1(LRTOMT1)、USH1蛋白网络组分和谐素(USH1C)、含细胞外富亮氨酸的重复序列和纤连蛋白III型结构域的1(ELFN1)、三十四肽重复序列结构域24(TTC24)、肌营养不良蛋白(DYTN)、Kielin富半胱氨酸BMP调控因子(KCP)、卷曲螺旋富谷氨酸蛋白2(CCER2)、富亮氨酸的重复序列和跨膜结构域2(LRTM2)、钾电压门控通道亚家族A成员10(KCNA10)、Clarin 1(CLRN1)、Clarin2(CLRN2)、SKI家族转录辅阻遏蛋白1(SKOR1)、含Tctex1结构域的1(TCTEX1D1)、Fc受体样B(FCRLB)、溶质载体家族17成员8(SLC17A8)、含谷氧还蛋白和富半胱氨酸结构域的2(GRXCR2)、脑源性神经营养因子(BDNF)、丝氨酸蛋白酶抑制剂家族E成员3(SERPINE3)、无义螺旋
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环
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螺旋1(NHLH1)、热激70KDa蛋白4(HSP70)、热激
90kDa蛋白1，α(HSP90)、转录激活因子6(ATF6)、真核翻译起始因子2α激酶3(PERK)、肌醇需求蛋白1(IRE1)、Whirlin(WHRN)、癌调蛋白(OCM)、LIM同源框1(Isl1)、神经营养蛋白3(NTF3)、含跨膜和三十四肽重复序列的4(TMTC4)和结合免疫球蛋白蛋白质(BIP)。11.如权利要求1
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10中任一项所述的核酸载体，其中所述核酸载体选自由以下组成的组：病毒载体、质粒、粘粒或人工染色体。12.如权利要求11所述的核酸载体，其中所述核酸载体是选自由腺相关病毒(AAV)、腺病毒和慢病毒组成的组的病毒载体。13.如权利要求12所述的核酸载体，其中所述病毒载体是AAV载体。14.如权利要求13所述的核酸载体，其中所述AAV载体具有AAV1、AAV2、AAV2quad(Y
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F)、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、rh10、rh39、rh43、rh74、Anc80、Anc80L65、DJ/8、DJ/9、7m8、PHP.B、PHP.eb或PHP.S衣壳。15.一种组合物，所述组合物包含如权利要求1
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14中任一项所述的核酸载体。16.如权利要求15所述的组合物，所述组合物还包含药学上可接受的赋形剂。17.一种多核苷酸，所述多核苷酸与SEQ ID NO:1具有至少85％序列同一性。18.如权利要求17所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸可操作地连接至异源转基因。19.如权利要求18所述的多核苷酸，其中所述转基因编码治疗性蛋白质、siRNA、ASO、核酸酶，或者是微小RNA。20.如权利要求19所述的多核苷酸，其中所述治疗性蛋白质选自由以下组成的组：ACTG1、FSCN2、RDX、POU4F3、TRIOBP、TPRN、XIRP2、ATOH1、GFI1、CHRNA9、CHRNA10、CIB3、CDH23、PCDH15、KNCN、DFNB59、OTOF、MKRN2OS、LHX3、T...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：分贝治疗公司，
类型：发明
国别省市：