枯草芽孢杆菌、含有该菌的菌剂和植物病害防治剂及它们的应用制造技术

本发明专利技术涉及植物防治领域，公开了一种枯草芽孢杆菌、含有该菌的菌剂和植物病害防治剂及它们的应用。具体地，本发明专利技术提供了一株枯草芽孢杆菌，所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的保藏编号为CGMCC NO.17161。本发明专利技术提供的菌剂含有上述的枯草芽孢杆菌。本发明专利技术提供的植物病害防治剂含有上述的枯草芽孢杆菌和/或上述的菌剂。本发明专利技术的枯草芽孢杆菌对苦瓜病毒病具有显著的抑制作用，抗病毒效果佳，田间防效显著，能有效降低苦瓜病毒病的发生。生。

【技术实现步骤摘要】
枯草芽孢杆菌、含有该菌的菌剂和植物病害防治剂及它们的应用


[0001]本专利技术涉及植物防治领域，具体地，涉及一种枯草芽孢杆菌、含有该菌的菌剂和植物病害防治剂及它们的应用。

技术介绍

[0002]苦瓜病毒病是由黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus，简称CMV)和西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus，简称WMV)单独或复合侵染所致的一种病毒性病害。苦瓜病毒病是苦瓜的主要病害，分布广泛，以夏秋露地种植发病较重，一般病株率为5
‑
10％，一定程度上会影响苦瓜的产量和品质，病害重时发病率可达15％以上，严重影响苦瓜的生产。苦瓜病毒病发生时，一般全株受害，主要侵害植株叶片和生长点，以顶部幼嫩茎蔓症状最明显；早期感病株叶片变小、皱缩，节间缩短，全株明显矮化，不结瓜或结瓜少；中期至后期染病，中上部叶片皱缩，叶色浓淡不均，幼嫩蔓梢畸形，生长受阻，瓜小或扭曲；发病株率高的田块，产量锐减甚至失收。
[0003]近年来，由于农作物布局的改变以及蔬菜等经济作物的发展，导致病毒毒源作物和传播介体的数量增加，增加了病毒的侵染和危害，使其危害呈逐年上升的趋势，给苦瓜生产也造成巨大的损失，病毒病已成为目前苦瓜生产的重要限制因子。
[0004]长期以来，防治病毒病以化学防治和培育抗病毒品种为主。化学防治方面存在着许多的问题，大量施用化学农药，造成农药残留、食品安全、有害生物再猖獗和严重的生态环境污染问题；目前令人满意的抗植物病毒剂实用化品种还不多，尤其特效的治疗性药剂更少。选育抗病品种被认为是防治苦瓜病毒病的经济而有效的途径，但目前尚无优质高抗的品种可以大面积推广。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是为了克服现有技术存在的问题，提供一种枯草芽孢杆菌、含有该菌的菌剂和植物病害防治剂及它们的应用，该菌株的无菌发酵液及粗蛋白液对苦瓜病毒病均具有高效的抑制作用。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术第一方面提供一种枯草芽孢杆菌，所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的保藏编号为CGMCC NO.17161。
[0007]本专利技术第二方面提供一种菌剂，该菌剂含有上述的枯草芽孢杆菌。
[0008]优选地，所述菌剂含有所述枯草芽孢杆菌的活菌体、死菌体和发酵产物中的至少一种；优选为活菌体和/或发酵产物。
[0009]优选地，所述菌剂为液态菌剂和/或固态菌剂，优选为液态菌剂。
[0010]本专利技术第三方面提供一种植物病害防治剂，所述植物病害防治剂含有上述的枯草芽孢杆菌和/或上述的菌剂。
[0011]优选地，所述植物病害防治剂的制备方法包括：将所述枯草芽孢杆菌经发酵培养
得到发酵液，将所述发酵液经固液分离I后得到无菌发酵液。
[0012]优选地，所述植物病害防治剂的制备方法还包括：将所述无菌发酵液经沉淀、固液分离II后得到粗蛋白，将所述粗蛋白经透析除盐得到蛋白液。
[0013]优选地，所述发酵培养的条件至少满足：接种量为3
‑
6体积％、温度为28
‑
37℃、转速为150
‑
250rpm、时间为48
‑
90h；
[0014]所述固液分离I的过程包括：将所述发酵液离心获得上清液，将所述上清液过滤后得到所述无菌发酵液；
[0015]所述离心的条件至少满足：温度为0
‑
8℃、转速为8000
‑
12000rpm、时间为10
‑
20min；
[0016]所述过滤的孔径为0.1
‑
0.45μm。
[0017]优选地，所述沉淀的过程包括：将所述无菌发酵液与沉淀剂混合搅拌后静置；所述沉淀剂优选为硫酸铵；
[0018]所述静置的条件至少满足：温度为0
‑
8℃、时间为10
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15h；
[0019]所述固液分离II的条件至少满足：温度为0
‑
8℃、转速为6000
‑
10000rpm、时间为10
‑
20min；
[0020]所述透析除盐的截留分子量为8000
‑
14000。
[0021]本专利技术第四方面提供上述的枯草芽孢杆菌、上述的菌剂、上述的植物病害防治剂在防治苦瓜病毒病中的应用。
[0022]通过上述技术方案，本专利技术提供的枯草芽孢杆菌对苦瓜病毒病具有显著的抑制作用，是一种绿色、安全、环境友好型的生物防治媒介。利用系统花叶法和局部枯斑法测得该枯草芽孢杆菌的无菌发酵液对苦瓜病毒体外的抑制率达到93％以上；该枯草芽孢杆菌的无菌发酵液沉淀制得的粗蛋白液，同样对苦瓜病毒病具有抑制作用，抗病毒效果佳，田间防效显著，能有效降低苦瓜病毒病的发生。
[0023]生物保藏
[0024]本专利技术提供的菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，并于2019年01月11日被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)(保藏单位的缩写为CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.17161。
具体实施方式
[0025]在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
[0026]第一方面，本专利技术提供了一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，于2019年01月11日被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)(保藏单位的缩写为CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.17161。
[0027]本专利技术提供的枯草芽孢杆菌从湖南省长沙市某苦瓜病毒病发病田的健康苦瓜株
中分离得到。所述枯草芽孢杆菌的分离可以采用本领域常规的用于新菌株分离的方法，例如可以采用组织分离法。
[0028]组织分离法具体可以包括：取苦瓜病毒病发病田的健康苦瓜株的根际土壤以无菌水溶解并搅拌，然后静置至土壤颗粒充分下沉；取上清液用无菌水以10
‑2、10
‑3、10
‑4、10
‑5、10
‑6进行梯度稀释后，分别涂布于NA培养基中，在恒温培养箱倒置培养，观察菌落生长情况，及时挑取不同单菌落划线纯化2
‑
3次。
[0029]本专利技术提供的枯草芽孢杆菌经过发酵培养能够产生大量的枯草芽孢杆菌的活菌体和/或发酵产物。本专利技术对发酵培养方法没有特别的限制，只要通过该发酵培养方法可以使所述枯草芽孢杆菌大量增殖即可。例如，可以将枯草芽孢杆菌以接种量本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的保藏编号为CGMCC NO.17161。2.一种菌剂，其特征在于，该菌剂含有权利要求1所述的枯草芽孢杆菌。3.根据权利要求2所述的菌剂，其中，所述菌剂含有所述枯草芽孢杆菌的活菌体、死菌体和发酵产物中的至少一种；优选为活菌体和/或发酵产物。4.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂为液态菌剂和/或固态菌剂，优选为液态菌剂。5.一种植物病害防治剂，其特征在于，所述植物病害防治剂含有权利要求1所述的枯草芽孢杆菌和/或权利要求2至4中任意一项所述的菌剂。6.根据权利要求5所述的植物病害防治剂，其特征在于，所述植物病害防治剂的制备方法包括：将所述枯草芽孢杆菌经发酵培养得到发酵液，将所述发酵液经固液分离I后得到无菌发酵液。7.根据权利要求5所述的植物病害防治剂，其特征在于，所述植物病害防治剂的制备方法还包括：将所述无菌发酵液经沉淀、固液分离II后得到粗蛋白，将所述粗蛋白经透析除盐得到蛋白液。8.根据权利要求6或7所述的植物病害防治剂，其特征在于，所述发酵培养的条件至少满足：接种量为3
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6体积％、温度为28
‑
37℃、转速为150
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【专利技术属性】
技术研发人员：朱璞，周秦，郭子卿，罗坤，朱丽娜，徐诚，徐恒辉，
申请(专利权)人：金华市农业科学研究院浙江省农业机械研究院，
类型：发明
国别省市：