一种用于T细胞培养基的氨基酸组合物制造技术

本发明专利技术公开了一种用于T细胞培养基的氨基酸组合物，所述氨基酸组合物包括：L

【技术实现步骤摘要】
一种用于T细胞培养基的氨基酸组合物


[0001]本专利技术涉及细胞培养
，具体为一种用于T细胞培养基的氨基酸组合物。

技术介绍

[0002]T细胞是淋巴细胞的主要组分之一，它具有多种生物学功能，如直接杀伤靶细胞、辅助其它淋巴细胞发挥功能、对特异性抗原和促有丝分裂原的应答反应以及产生细胞因子等，是身体抵御疾病感染、防止肿瘤形成的主要免疫细胞之一。在过继性T细胞疗法中，T细胞经过体外富集、活化、扩增，回输体内可用于治疗多种疾病，包括恶性肿瘤、感染、自身免疫病等。
[0003]T细胞来源于骨髓中的淋巴样祖细胞，在胸腺中分化、发育、成熟，成熟T细胞进入血液，转移至外周淋巴组织（如脾脏、淋巴结等），在接受刺激后，再分化为效应性或记忆性T细胞，参与适应性免疫。初始T细胞（naiveT细胞，Tn）是效应细胞和记忆T细胞亚群的前体。初始T细胞胞体小，细胞质少，表达CD45RA、CCR7等，初始T细胞不能介导效应免疫反应，在受抗原刺激后，初始T细胞增殖并开始分化，逐级分化为中央记忆T细胞（或称中枢记忆T细胞，Tcm）、效应记忆T细胞（Tem）、效应T细胞（Tef），在分化过程中，T细胞逐渐获得对细胞因子、组织归巢受体、抗凋亡分子的响应能力，逐渐获得效应功能，同时也逐渐丢失了淋巴结归巢受体、增殖能力、IL
‑
2产生、自我更新和存活的能力。
[0004]在过继性T细胞疗法中，回输给人体的Tn+Tcm细胞比例越多，则细胞越年轻化，所回输的细胞在人体中存活时间越长，治疗效果也越好。因此目前的临床研究中，Tn+Tcm比例是细胞质量的重要指标，已有证据表明Tn+Tcm比例与对肿瘤细胞的杀伤性有正相关性，所回输的年轻化细胞比例越高，对肿瘤细胞的杀伤比例越高。现有的商业化T细胞无血清培养基大多不考虑培养终点的T细胞群体中的年轻化细胞（Tn+Tcm）比例，培养基在促进T细胞快速扩增的同时，反而可能导致T细胞分化加剧，年轻化细胞比例减少，影响T细胞治疗效果。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种用于T细胞培养基的氨基酸组合物，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0006]为了解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：一种用于T细胞培养基的氨基酸组合物，所述氨基酸组合物包括：L
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半胱氨酸、L
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组氨酸、L
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异亮氨酸、L
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丙氨酸、L
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丝氨酸和L
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精氨酸；所述氨基酸组合物中L
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半胱氨酸的终浓度为1~3g/L，L
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组氨酸的终浓度为1~3g/L，L
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异亮氨酸的终浓度为2~6g/L，L
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丙氨酸的终浓度为1~3g/L，L
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丝氨酸的终浓度为2~6g/L，L
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精氨酸的终浓度为2~6g/L；所述氨基酸组合物以1：20~100的比例加入T细胞培养基中。
[0007]优选的，所述氨基酸组合物中L
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半胱氨酸的终浓度为2g/L，L
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组氨酸的终浓度为2g/L，L
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异亮氨酸的终浓度为4g/L，L
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丙氨酸的终浓度为2g/L，L
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丝氨酸的终浓度为4g/L，
L
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精氨酸的终浓度为4g/L。
[0008]优选的，所述氨基酸组合物以1：50的比例加入T细胞培养基中。
[0009]优选的，所述T细胞培养基包括：X
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Vivo
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15T细胞无血清培养基或者KBM581T细胞无血清培养基。
[0010]添加了本专利技术的用于T细胞培养基的氨基酸组合物的培养基获得的T细胞群体中年轻化细胞（Tn+Tcm）比例与所添加的氨基酸类型及浓度相关，如果添加其他类型的氨基酸组合，则无提高年轻化细胞比例的效果。
[0011]与现有技术相比，本专利技术的原理及其所达到的有益效果是：专利技术人发现，目前已知的26种氨基酸中，特定的6种氨基酸组合可以增加年轻化T细胞比例，而其他氨基酸组合则无此效果。因此，本专利技术提供了一种用于T细胞培养基的氨基酸组合物，可以显著提高年轻化细胞（Tn+Tcm）比例。
[0012]本专利技术的优点在于：1）在不影响细胞生长、扩增的情况下，提高年轻化T细胞（Tn+Tcm）比例30%以上；2）氨基酸为细胞培养常用营养物质，该组合化学成分明确，安全无害，简单方便，符合临床应用要求。
附图说明
[0013]附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：图1是本专利技术实施例1各组培养基细胞活率示意图；图2是本专利技术实施例1各组培养基细胞扩增倍数示意图；图3是本专利技术实施例1各组培养基的各类T细胞所占比例示意图；图4是本专利技术实施例2各组培养基细胞活率示意图；图5是本专利技术实施例2各组培养基细胞扩增倍数示意图；图6是本专利技术实施例2各组培养基的各类T细胞所占比例示意图。
具体实施方式
[0014]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0015]本专利技术的氨基酸组合物的配置过程如下：在PBS溶液中，按照需要的浓度加入L
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半胱氨酸、L
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组氨酸、L
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异亮氨酸、L
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丙氨酸、L
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丝氨酸和L
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精氨酸，最后用0.22
µ
m孔径的SFCA材质过滤器过滤。
[0016]PBS为细胞培养常用缓冲溶液，配制方法为：磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.27g，磷酸氢二钠(Na2HPO4) 1.42g，氯化钠(NaCl) 8g，氯化钾(KCl) 0.2g，溶于水，调节pH=7.4，定容1L体积。
[0017]将配制好的氨基酸组合物以1：20、1：50或1：100比例加入到商业化T细胞无血清培养基中，如X
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Vivo
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15T细胞无血清培养基、KBM581T细胞无血清培养基或其它本领域的专业人员认可的T细胞无血清培养基，再进行T细胞培养。例如，氨基酸组合物的添加比例为1：
50，即1L培养基中添加20mL氨基酸组合物。
[0018]T细胞培养至第9天，离心收集细胞，并进行对细胞表现标志物CCR7和CD45RA进行流式细胞仪检测，所得CCR7+CD45RA+代表Tn细胞，CCR7+CD45RA
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代表Tcm细胞，CCR7
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CD45RA
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代表Tem细胞，CCR7
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CD4本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于T细胞培养基的氨基酸组合物，其特征在于，所述氨基酸组合物包括： L
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半胱氨酸、L
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组氨酸、L
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异亮氨酸、L
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丙氨酸、L
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丝氨酸和L
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精氨酸；所述氨基酸组合物中L
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半胱氨酸的终浓度为1~3g/L，L
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组氨酸的终浓度为1~3g/L，L
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异亮氨酸的终浓度为2~6g/L，L
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丙氨酸的终浓度为1~3g/L，L
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丝氨酸的终浓度为2~6g/L，L
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精氨酸的终浓度为2~6g/L；所述氨基酸组合物以1：20~100的比例加入T细胞培养基中。2.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：马士棋，林家会，程成，陈旭，陈刚，
申请(专利权)人：依科赛生物科技太仓有限公司，
类型：发明
国别省市：