一种大黄鱼鱼皮胶原蛋白及其制备方法和应用技术

本申请涉及医学生物技术领域，具体涉及一种大黄鱼鱼皮胶原蛋白及其制备方法和应用。区别于现有技术，本申请通过胃蛋白酶酶法水解胶原蛋白，可以有效的去除化学键内、键间的交联效应，能够最大限度的提取溶解胶原蛋白；通过对鱼皮胶原蛋白粗提物进行多次盐析处理和透析，可以有效纯化胶原蛋白产物，同时不损伤胶原蛋白的结构及生物活性；采用大黄鱼为原料，取材容易，安全无副作用，可以提供可替代哺乳动物来源的海产品优质胶原蛋白资源。采用本申请制备方法得到的大黄鱼鱼皮胶原蛋白纯度高、蛋白结构完整，且具有镇痛消炎、口腔创面修复作用。作用。作用。

【技术实现步骤摘要】
一种大黄鱼鱼皮胶原蛋白及其制备方法和应用


[0001]本申请涉及医学生物
，具体涉及一种大黄鱼鱼皮胶原蛋白及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]胶原蛋白又称胶原，是由三条肽链拧成螺旋形的纤维状蛋白质，是一种糖蛋白，含有大量的甘氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸及糖，广泛存在于动物的皮肤、骨、软骨及肌腱等组织中，是机体含量最多的一类蛋白质。现已发现的胶原种类为19种，其中Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原和Ⅲ型胶原是构成胶原纤维的主要成分，主要存在于动物的结缔组织中，起支持器官、保护机体的功能，是重要的结构蛋白质。
[0003]我国拥有极为丰富的水产资源，近几年水产品加工业尤其是淡水鱼的加工迅猛发展，但是也产生了大量加工剩余的废弃物，这些废弃物一方面造成了环境的污染，另一方面也照成了资源的浪费。随着胶原需求量的越来越大及食品安全等因素,传统的从牛、猪等哺乳类动物获取的胶原已经不能满足人们的需要,近年来,对水产动物胶原的研究越来越引起人们的关注，综合这些因素，水产动物类胶原蛋白的研究和开发将成为未来发展的必要选择。
[0004]现有技术中，胶原蛋白的提取技术，仍存在诸多不足之处，如原料使用量大而胶原提取率低，提取率高而胶原分子结构破坏严重，或者对实验设备条件(例如色谱柱体系)的要求较高，实验操作复杂，易对环境造成不同程度的污染等。因此，寻求一种简单、方便，同时不损伤胶原蛋白的结构及生物活性的提取方法具有极大的实际意义。

技术实现思路

[0005]鉴于上述问题，本申请提供了一种大黄鱼鱼皮胶原蛋白及其制备方法和应用，所获得产物纯度高、蛋白结构完整，且具有镇痛消炎、口腔创面修复作用。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用的主要技术方案包括：
[0007]第一方面，本专利技术提供了一种大黄鱼鱼皮胶原蛋白的制备方法，包括以下步骤：
[0008](1)鱼皮胶原蛋白的提取：
[0009]对大黄鱼鱼皮进行预处理后，加入含0.01～0.5重量％胃蛋白酶的0.4～0.7mol/L醋酸溶液中进行酶法提取，得到鱼皮胶原蛋白粗提物；
[0010](2)鱼皮胶原蛋白的纯化：
[0011]在所述鱼皮胶原蛋白粗提物中加入无机盐进行盐析，至溶液中无机盐最终浓度为0.01～2.5mol/L，静置12h后，离心收集沉淀，盐析次数为2～3次；盐析结束后，将得到的盐析物溶于浓度为0.005～0.5mol/L醋酸中，以浓度为0.005～0.5mol/L的醋酸溶液进行透析，再于蒸馏水中透析，冻干，得到大黄鱼鱼皮胶原蛋白。
[0012]进一步的，在步骤(1)中，所述预处理包括：
[0013]采用新鲜大黄鱼鱼皮为原料，去除鱼鳞、残肉和脂肪，清洗沥干，绞碎；
[0014]将绞碎的鱼皮和0.01～0.1mol/L氢氧化钠溶液按照料液比1:10～1:20g/mL混合，再加入质量分数为30％的过氧化氢溶液，于15℃～25℃下浸泡18～36h；
[0015]将浸泡后的鱼皮用体积浓度为10％的正丁醇清洗数次，再依次用自来水、蒸馏水清洗鱼皮至中性，沥干，得到预处理后的鱼皮，备用。
[0016]进一步的，在步骤(1)中，所述预处理后的大黄鱼鱼皮和所述醋酸溶液的料液比为1:20～1:60g/mL。
[0017]进一步的，在步骤(1)中，所述酶法提取分两步进行，具体包括：
[0018]在预处理后的鱼皮中，按照料液比1:20～1:60g/mL，加入含0.01～0.5重量％胃蛋白酶的0.4～0.7mol/L醋酸溶液中进行酶法提取；而后，用2～3层纱布过滤得到第一残渣和第一胶状液；将所述第一胶状液于4℃下9000～15000rpm离心20～30min，得到第二残渣和第一上清液；
[0019]将所述第一残渣和所述第二残渣合并，按照料液比1:20～1:60g/mL，加入含0.01～0.5重量％胃蛋白酶的0.4～0.7mol/L醋酸溶液中进行酶法提取；而后，用2～3层纱布过滤得到第二残渣和第二胶状液；将所述第二胶状液于4℃下9000～15000rpm离心20～30min，得到第三残渣和第二上清液；
[0020]将所述第一上清液和所述第二上清液合并，得到所述鱼皮胶原蛋白粗提物。
[0021]进一步的，在步骤(1)中，所述酶法提取的反应温度为1℃～4℃，反应pH值控制在1～3，反应时间为24h。
[0022]进一步的，在步骤(1)中，在酶法提取结束后，将温度升至80℃～95℃，进行灭酶处理。
[0023]进一步的，在步骤(2)中，所述无机盐为硫酸铵、氯化钠或磷酸氢二钠，所述盐析的温度为1℃～4℃。
[0024]进一步的，所述无机盐为氯化钠，其盐析浓度为0.9～2.5mol/L。
[0025]进一步的，所述无机盐为磷酸氢二钠，其盐析浓度为0.01～0.1mol/L。
[0026]进一步的，在步骤(2)中，所述盐析的次数为3次，具体包括：
[0027]在所述鱼皮胶原蛋白粗提物中加入无机盐至溶液中无机盐最终浓度为0.01～2.5mol/L，搅拌后静置12h以进行盐析，于4℃下9000～15000rpm离心20～30min，收集沉淀得到第一盐析物；
[0028]将所述第一盐析物溶于0.05mol/L Tris
‑
HCl溶液中，加入无机盐至溶液中无机盐最终浓度为0.01～2.5mol/L，搅拌后静置12h以进行盐析，于4℃下9000～15000rpm离心20～30min，收集沉淀得到第二盐析物；
[0029]将所述第二盐析物溶于0.05mol/L Tris
‑
HCl溶液中，加入无机盐至溶液中无机盐最终浓度为0.01～2.5mol/L，搅拌后静置12h以进行盐析，于4℃下9000～15000rpm离心20～30min，收集沉淀得到第三盐析物。
[0030]进一步的，在步骤(2)中，所述盐析的次数为3次，具体包括：
[0031]在所述鱼皮胶原蛋白粗提物中加入无机盐至溶液中无机盐最终浓度为第一浓度，搅拌后静置12h以进行盐析，于4℃下9000～15000rpm离心20～30min，收集沉淀得到第一盐析物；
[0032]将所述第一盐析物溶于0.05mol/L Tris
‑
HCl溶液中，加入无机盐至溶液中无机盐
最终浓度为第二浓度，搅拌后静置12h以进行盐析，于4℃下9000～15000rpm离心20～30min，收集沉淀得到第二盐析物；
[0033]将所述第二盐析物溶于0.05mol/L Tris
‑
HCl溶液中，加入无机盐至溶液中无机盐最终浓度为第三浓度，搅拌后静置12h以进行盐析，于4℃下9000～15000rpm离心20～30min，收集沉淀得到第三盐析物；
[0034]其中，所述第一浓度、所述第二浓度和所述第三浓度为0.01～2.5mol/L，且所述第三浓度>所述第二浓度>所述第一浓度。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大黄鱼鱼皮胶原蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)鱼皮胶原蛋白的提取：对大黄鱼鱼皮进行预处理后，加入含0.01～0.5重量％胃蛋白酶的0.4～0.7mol/L醋酸溶液中进行酶法提取，得到鱼皮胶原蛋白粗提物；(2)鱼皮胶原蛋白的纯化：在所述鱼皮胶原蛋白粗提物中加入无机盐进行盐析，至溶液中无机盐最终浓度为0.01～2.5mol/L，静置12h后，离心收集沉淀，盐析次数为2～3次；盐析结束后，将得到的盐析物溶于浓度为0.005～0.5mol/L醋酸中，以浓度为0.005～0.5mol/L的醋酸溶液进行透析，再于蒸馏水中透析，冻干，得到大黄鱼鱼皮胶原蛋白。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述预处理包括：采用新鲜大黄鱼鱼皮为原料，去除鱼鳞、残肉和脂肪，清洗沥干，绞碎；将绞碎的鱼皮和0.01～0.1mol/L氢氧化钠溶液按照料液比1:10～1:20g/mL混合，再加入质量分数为30％的过氧化氢溶液，于15℃～25℃下浸泡18～36h；将浸泡后的鱼皮用体积浓度为10％的正丁醇清洗数次，再依次用自来水、蒸馏水清洗鱼皮至中性，沥干，得到预处理后的鱼皮，备用。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述预处理后的大黄鱼鱼皮和所述醋酸溶液的料液比为1:20～1:60g/mL。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述酶法提取分两步进行，具体包括：在预处理后的鱼皮中，按照料液比1:20～1:60g/mL，加入含0.01～0.5重量％胃蛋白酶的0.4～0.7mol/L醋酸溶液中进行酶法提取；而后，用2～3层纱布过滤得到第一残渣和第一胶状液；将所述第一胶状液于4℃下9000～15000rpm离心20～30min，得到第二残渣和第一上清液；将所述第一残渣和所述第二残渣合并，按照料液比1:20～1:60g/mL，加入含0.01～0.5重量％胃蛋白酶的0.4～0.7mol/L醋酸溶液中进行酶法提取；而后，用2～3层纱布过滤得到第二残渣和第二胶状液；将所述第二胶状液于4℃下9000～15000rpm离心20～30min，得到第三残渣和第二上清液；将所述第一上清液和所述第二上清液合并，得到所述鱼皮胶原蛋白粗提物。5.根据权利要求1或4所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述酶法提取的反应温度为1℃～4℃，反应pH值控制在1～3，反应时间为24h。6.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄强，蔡丽萍，张建阳，陈万金，
申请(专利权)人：福建爱洁丽日化有限公司，
类型：发明
国别省市：