PTGES表达抑制剂在制备提升肿瘤细胞对化疗药物的敏感性的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种PTGES表达抑制剂在制备提升肿瘤细胞对化疗药物的敏感性的药物中的应用。本发明专利技术发现通过敲除或抑制PTGES的表达，能够减弱骨肉瘤对于化疗药物，特别是洛铂的耐药性，提示合成PTGES的抑制剂或敲除试剂与洛铂联合应用，在治疗骨肉瘤时能够克服骨肉瘤对化疗药物的耐药性，其在临床应用具有重要指导意义并有广阔前景。意义并有广阔前景。

【技术实现步骤摘要】
PTGES表达抑制剂在制备提升肿瘤细胞对化疗药物的敏感性的药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种PTGES表达抑制剂在制备提升肿瘤细胞对化疗药物的敏感性的药物中的应用。

技术介绍

[0002]骨肉瘤是最常见的原发恶性骨肿瘤，好发于青少年，预后不良。目前骨肉瘤的治疗方法是积极的手术切除与新辅助化疗相结合。铂类化疗药物是骨肉瘤临床常用的药物，包括顺铂、奥沙利铂和洛铂。洛铂是第三代铂类抗肿瘤药物之一，副作用少，抗肿瘤活性好。然而，经过几个疗程的治疗后，复发和转移仍然是患者面临的难题。大多数死于骨肉瘤的患者表现出明显的化学耐药性。
[0003]脂质代谢在许多细胞活动的信号转导中起着关键作用，并作为癌细胞行为中新出现的关键效应而备受关注。癌细胞利用脂质代谢获得能量和信号分子，从而增殖、转移并对各种治疗作出反应。此外，在临床前动物模型中，阻断癌症相关脂肪细胞脂解和游离脂肪酸摄取对肿瘤抑制具有有益作用。关于化疗耐药性，越来越多的证据表明，肿瘤的缺氧环境可触发脂质代谢并产生高水平的 ATP，这是化疗耐药性的关键因素。然而，骨肉瘤中与脂质代谢相关的个性化治疗指南仍有待探索。
[0004]PTGES是花生四烯酸代谢途径中合成PGE2的关键酶，可催化PGH2转化为PGE2，在炎症组织和肿瘤中的表达显著上调，已被证明对非小细胞肺癌细胞的致瘤性、迁移和转移至关重要。在Gprc5a基因敲除小鼠模型中，PTGES与免疫抑制和肺肿瘤发生相关。目前认为，PTGES/PGE2信号对细胞干性至关重要，包括ABCG2和EMT相关标记的表达，并可诱导巨噬细胞和MDSC中PD
‑
L1 的表达，抑制肿瘤免疫。然而，PTGES在肿瘤化疗耐药中的作用尚不清楚。因此，探索PTGES在骨肉瘤铂类药物化疗中的作用并开发针对骨肉瘤化疗增敏的药物对骨肉瘤患者的治疗意义重大。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中的上述不足，本专利技术提供一种PTGES表达抑制剂在制备提升肿瘤细胞对化疗药物的敏感性的药物中的应用，通过抑制或敲除PTGES基因，可提高骨肉瘤患者对洛铂的响应率，降低耐药性的产生。
[0006]为实现上述目的，本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0007]以PTGES作为靶点在制备提升肿瘤细胞对化疗药物的敏感性的药物中的应用。
[0008]此外，还提供了PTGES表达抑制剂在制备提升肿瘤细胞对化疗药物的敏感性的药物中的应用。
[0009]进一步地，该药物通过抑制PTGES的表达来改善肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。
[0010]进一步地，肿瘤包括骨肉瘤。
[0011]进一步地，化疗药物为铂类化疗药物。
[0012]进一步地，化疗药物为洛铂。
[0013]进一步地，PTGES表达抑制剂包括shRNA、siRNA、小分子化合物或单抗。
[0014]一种联合化疗药物，包括PTGES表达抑制剂以及铂类化疗药物。
[0015]本专利技术的有益效果：
[0016]本专利技术发现通过敲除或抑制PTGES的表达，能够减弱骨肉瘤对于化疗药物，特别是洛铂的耐药性，提示合成PTGES的抑制剂或敲除试剂与洛铂联合应用，在治疗骨肉瘤时能够克服骨肉瘤对化疗药物的耐药性，其在临床应用具有重要指导意义并有广阔前景。
附图说明
[0017]图1为IHC染色检测PTGES在洛铂敏感和耐药骨肉瘤组织中的表达；比例尺：100μm(放大倍数，200倍)，比例尺：50μm(放大倍数，400倍)；小提琴图显示差异具有显著性。
[0018]图2为慢病毒敲减PTGES后骨肉瘤细胞中PTGES mRNA和蛋白的表达水平；***P＜0.001；
[0019]图3为转染shPTGES的骨肉瘤细胞经洛铂处理后，活化的半胱氨酸蛋白酶 9、半胱氨酸蛋白酶3和PARP的表达水平；*P＜0.05，**P＜0.01；
[0020]图4为流式细胞术检测洛铂处理48小时不同处理组骨肉瘤细胞的凋亡率； *P＜0.05，***P＜0.001；
[0021]图5为TUNEL染色检测敲减PTGES的骨肉瘤细胞经洛铂处理后的凋亡情况；比例尺：100μm；
[0022]图6为克隆形成试验检测转染shPTGES和洛铂处理的骨肉瘤细胞的增殖能力；***P＜0.001；
[0023]图7为CCK8实验检测转染shPTGES后经洛铂处理的骨肉瘤细胞的活力。
具体实施方式
[0024]下面对本专利技术的具体实施方式进行描述，以便于本
的技术人员理解本专利技术，但应该清楚，本专利技术不限于具体实施方式的范围，对本
的普通技术人员来讲，只要各种变化在所附的权利要求限定和确定的本专利技术的精神和范围内，这些变化是显而易见的，一切利用本专利技术构思的专利技术创造均在保护之列。
[0025]实施例1 PTGES与骨肉瘤的耐药性
[0026]对唐都医院骨科2019年至2022年骨肉瘤后进行手术的患者肿瘤样本进行免疫组织化学染色，具体过程如下：
[0027]肿瘤组织在室温下用10％福尔马林溶液固定过夜，梯度乙醇(70％、80％、 95％和100％)脱水，石蜡包埋后将组织切成2
‑
3μm的切片。石蜡切片60℃恒温过夜，脱蜡至水：二甲苯2
×
15min，100％乙醇2
×
5min，95％乙醇2
×
5min， 70％乙醇2
×
5min，ddH2O 2
×
5min。微波法抗原修复，静置冷却至室温；将切片完全浸没于3％的过氧化氢溶液中，室温孵育15min；PBS洗涤切片，2
×
5 min；甩干切片，向组织上滴加足量封闭液(含5％山羊血清的PBS)，轻轻摇晃使其完全覆盖组织，并置于湿盒中室温孵育15min；向组织上滴加50μL稀释好的PTGES一抗抗体(Cayman，1:50)，使其完全覆盖组织，并置于湿盒中 4℃孵育过夜；PBS洗涤切片，3
×
5min；向组织滴加50μL兔鼠通用即用型二抗，湿盒中37℃孵育1h；PBS洗涤切
片，3
×
5min；向组织滴加50μL新鲜配置的DAB显色底物液，室温孵育5
‑
10min；当显色信噪比达到最佳时，将切片拿至水龙头下用流水缓缓冲洗1min；苏木素衬染，盐酸酒精分化，脱水并封片，通风橱内干燥后镜检。
[0028]染色结果在正置显微镜(Olympus BX51)下独立评估，每例标本选取5个互补视野，根据每个视野中阳性细胞区域面积及阳性细胞染色强度进行评分。评分标准：a.阳性面积评分：阳性细胞数≤5％，计0分；6％
‑
20％，计1分；21％
‑
50％，计2分；51％
‑
70％，计3分；≥71％计4分；b.染色强度评分：黄色，1分；棕黄色，2分；棕褐色，3分。综合评分＝阳性面积评分
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.PTGES表达抑制剂在制备提升肿瘤细胞对化疗药物的敏感性的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括骨肉瘤。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述化疗药物为铂类化疗药物。4.根据权利要求3所述的应用...

【专利技术属性】
技术研发人员：马琼，孙瑾，王欢，李晨宇，吴永虹，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军军医大学，
类型：发明
国别省市：