一种鸭α干扰素与鸭白介素2融合蛋白及其编码基因和应用制造技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，具体公开一种鸭α干扰素与鸭白介素2融合蛋白及其编码基因和应用。所述鸭α干扰素与鸭白介素2融合蛋白具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。本发明专利技术提供的融合蛋白兼具鸭α干扰素与鸭白介素2的双重生物学活性，且该融合蛋白的抗病毒活性较高。同时，该融合蛋白在特定的表达系统中表达后还达到了显著的促淋巴细胞增殖活性。达后还达到了显著的促淋巴细胞增殖活性。达后还达到了显著的促淋巴细胞增殖活性。

【技术实现步骤摘要】
一种鸭
α
干扰素与鸭白介素2融合蛋白及其编码基因和应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，尤其涉及一种鸭α干扰素与鸭白介素2融合蛋白及其编码基因和应用。

技术介绍

[0002]干扰素是一种具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等多种生理活性的细胞因子。我国对重组人干扰素的研究已经取得重大进展，但是，由于禽类与人的干扰素同源性较低，用于人类干扰素的研究不适合禽类，所以禽类干扰素的研究相对滞后。近年来鸭养殖业一直在稳步增长，但由于养殖环境与技术相对落后，导致鸭病毒性传染病如鸭瘟、鸭呼肠孤病毒、鸭坦布苏病毒、鸭病毒性肝炎等威胁着鸭养殖业的发展。基因工程重组鸭干扰素作为一种广谱的抗病毒药物，在临床上应用广泛，对鸭病毒性肝炎、鸭瘟和黄病毒等病毒性疾病有较好的治疗效果。
[0003]白介素2(IL
‑
2)能促进T细胞和B淋巴细胞活化增殖并参与体液免疫和细胞免疫应答，是一种调控人体免疫系统稳态的极为重要的多功能细胞因子。研究表明鸭IL
‑
2在H9N2感染后发挥了调控细胞免疫和体液免疫的作用。同时，鸭IL
‑
2还可以作为免疫佐剂配合疫苗使用，可以提高疫苗的免疫效果，降低副反应，同时还具有免疫增强、免疫治疗等功能。
[0004]由于养殖环境与技术相对落后，目前的鸭病毒性传染病如鸭瘟、鸭呼肠孤病毒、鸭坦布苏病毒、鸭病毒性肝炎等严重威胁着鸭养殖业的发展，有研究表明将防御素与干扰素联合使用可实现细菌性疾病与病毒性疾病等主要流行疾病的预防与治疗。但α干扰素与其他细胞因子联合使用，需分别表达两种细胞因子进行联合用药，成本过高。现有技术中还未实现能稳定和高表达鸭α干扰素(DuIFN
‑
α)与鸭白介素2(DuIL
‑
2)融合蛋白的技术。因此，研究高表达量、高活性的鸭α干扰素与鸭白介素2的融合蛋白，对于预防和治疗鸭感染性疾病具有重要意义。

技术实现思路

[0005]针对现有基因工程技术制备鸭α干扰素与鸭白介素2融合蛋白存在的上述问题，本专利技术提供一种鸭α干扰素与鸭白介素2融合蛋白及其编码基因和应用，本专利技术提供的鸭α干扰素与鸭白介素2融合蛋白具有较高的抗病毒和抑菌活性，在特定的表达系统中具有极高的表达量和稳定性，且对淋巴细胞的增殖具有促进作用。
[0006]为达到上述专利技术目的，本专利技术实施例采用了如下的技术方案：
[0007]一种鸭α干扰素与鸭白介素2融合蛋白，具有如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列。其中，SEQIDNO:1所示的氨基酸序列为通过GGGGSGGGGSGGGGS蛋白序列将鸭α干扰素(DuIFN
‑
α)与鸭白介素2(DuIL
‑
2)两个功能不同的蛋白序列连接得到。
[0008]相对于现有技术，本专利技术提供的融合蛋白是通过三个重复的G4S将鸭α干扰素(DuIFN
‑
α)与鸭白介素2(DuIL
‑
2)两个功能不同的蛋白连接。该融合蛋白兼具鸭α干扰素与鸭白介素2的双重生物学活性，且该融合蛋白的抗病毒活性和抑菌活性较高。同时，该融合
蛋白在特定的表达系统中表达后还达到了显著的促淋巴细胞增殖活性。
[0009]本专利技术还提供了所述鸭α干扰素与鸭白介素2融合蛋白在作为鸭抗病毒药物中的应用。
[0010]本专利技术还提供了所述鸭α干扰素与鸭白介素2融合蛋白在作为鸭抑菌药物中的应用。
[0011]本专利技术还提供了编码所述鸭α干扰素与鸭白介素2融合蛋白的融合基因，所述融合基因通过连接序列将鸭α干扰素与鸭白介素2的基因序列连接得到；所述融合基因的碱基序列如SEQIDNO:2。
[0012]利用上述连接序列可实现鸭α干扰素与鸭白介素2的串联表达，在特定的表达系统中使融合蛋白形成包涵体形式，该包涵体形式的融合蛋白经变性后通过1步亲和层析即可实现融合蛋白的高度纯化，显著降低融合蛋白的生产和纯化成本。
[0013]本专利技术还提供了一种重组表达载体，该重组表达载体包含所述融合基因及其表达调控原件。
[0014]本专利技术还提供了所述重组表达载体的制备方法，包括以下步骤：
[0015]a、通过SOE
‑
PCR方法将DuIFN
‑
α基因和DuIL
‑
2基因连接，得到所述融合基因；
[0016]b、将所述融合基因与Blunt载体连接，得到Blunt
‑
DuIFNα
‑
IL2重组质粒；
[0017]c、通过酶切连接的方法将所述Blunt
‑
DuIFNα
‑
IL2重组质粒中的所述融合基因连接到pET32a质粒中，得到pET32a
‑
DuIFNα
‑
IL2重组表达载体。
[0018]将本专利技术中编码所述鸭α干扰素与鸭白介素2融合蛋白的基因通过上述方式连接至pET32a质粒中，可以实现在大肠杆菌BL21中准确和高效表达，提升上述融合蛋白的表达量。
[0019]优选的，步骤a中，所述SOE
‑
PCR方法中，用于扩增DuIFN
‑
α基因的上下游引物分别为SEQIDNO:3和SEQIDNO:4；用于扩增DuIL
‑
2基因的上下游引物分别为SEQIDNO:5和SEQIDNO:6；其中，引物SEQIDNO:4和引物SEQIDNO:5分别包含部分连接序列，用于融合DuIFN
‑
α基因和DuIL
‑
2基因。
[0020]优选的，步骤c中，所述酶切连接的方法中所用的限制性内切酶为EcoR I和Hind III。
[0021]本专利技术还提供了一种宿主细胞，包含所述重组表达载体并表达所述鸭α干扰素与鸭白介素2融合蛋白的工程菌。
[0022]优选的，所述工程菌为大肠杆菌BL21。
[0023]工程菌选择BL21，更加利于形成正确的鸭α干扰素与鸭白介素2融合蛋白空间构象，保证鸭α干扰素与鸭白介素2融合蛋白的高活性，使其无论是抗病毒活性还是抑菌活性，尤其对水泡性口炎病毒(VSV)的抗病毒活性，较其他表达系统都得到了提高。
附图说明
[0024]图1是本专利技术实施例中扩增DuIL
‑
2基因和DuIFN
‑
α基因的PCR产物的凝胶电泳图，M：2000maker，1：DuIL
‑
2，2：DuIFN
‑
α；
[0025]图2是本专利技术实施例中DuIFNα
‑
IL2融合基因的PCR扩增产物的凝胶电泳图，M：Maker，1：DuIFNα
‑
IL2；
[0026]图3是本专利技术实施例中Blunt
‑
DuIFNα
‑
IL2重组质粒转化DH5α感受态后的菌体PCR扩增产物的凝胶电泳图，M：Maker，1和4：阴性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鸭α干扰素与鸭白介素2融合蛋白，其特征在于：具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。2.权利要求1所述的鸭α干扰素与鸭白介素2融合蛋白在作为鸭抗病毒药物中的应用。3.权利要求1所述的鸭α干扰素与鸭白介素2融合蛋白在作为鸭抑菌药物中的应用。4.编码权利要求1所述的鸭α干扰素与鸭白介素2融合蛋白的融合基因，其特征在于：通过连接序列将鸭α干扰素与鸭白介素2的基因序列连接得到；所述融合基因的碱基序列如SEQ ID NO:2。5.一种重组表达载体，其特征在于：包含权利要求4所述的融合基因及其表达调控原件。6.权利要求5所述的重组表达载体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：a、通过SOE
‑
PCR方法将DuIFN
‑
α基因和DuIL
‑
2基因连接，得到所述融合基因；b、将所述融合基因与Blunt载体连接，得到Blunt
‑
DuIFNα
‑
IL2重组质粒；c、通过酶切连接的方法将所述Blunt
‑
DuIFNα
‑
IL2重组质粒中的...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷白时，庞敬红，袁万哲，赵款，梁飞，李秀丽，杨欢，
申请(专利权)人：河北伯瑞动物药业有限公司河北农业大学，
类型：发明
国别省市：