本发明专利技术公开了一种心脏靶向载药外泌体及应用和治疗心脏疾病的药物；由用于治疗心脏疾病的药物导入到具有心脏组织靶向性的外泌体中获得，具有心脏组织靶向性的外泌体来源于小肠部位的细胞；心脏疾病治疗药物包含上述心脏靶向载药外泌体。本发明专利技术使用小肠部位的细胞分泌的外泌体不需要做任何修饰就可以在心脏富集，用小肠部位的细胞来源的外泌体，解决了外泌体产量的问题，具有很好的应用前景；而且用小肠部位的细胞来源的外泌体可以装载不同药物或活性分子，通过靶向心脏组织给药，提高心脏疾病的治疗效果，降低药物毒副反应。降低药物毒副反应。降低药物毒副反应。
【技术实现步骤摘要】
一种心脏靶向载药外泌体及应用和治疗心脏疾病的药物
[0001]本专利技术属于生物医学领域，涉及一种心脏靶向载药外泌体及应用和治疗心脏疾病的药物。
技术介绍
[0002]对于心血管疾病，一直以药物治疗和外科手术治疗为主，近年来随着分子生物学技术的不断发展，基因转移逐渐成为心血管疾病治疗的新途径，常被用于治疗重要蛋白质的过度表达和矫正基因的缺陷。如血管内皮生长因子(VEGF)和成纤维细胞生长因子(FGF)等基因转移，可以促进血管新生，改善缺血性心肌的供血和冠脉侧枝循环形成，为经皮冠状动脉腔内成形术和冠脉内支架植入后再狭窄的防治带来新的希望。
[0003]心脏病的基因治疗目前主要集中在两个方面，即血管新生疗法和冠脉再狭窄的防治。血管新生疗法又称为“分子搭桥术”，即应用基因治疗或其他治疗手段刺激心肌缺血区小血管生长和侧枝循环形成，在缺血的心肌区域架起新的桥梁。如应用血管内皮生长因子基因治疗梗塞性血管病已经获准应用于临床，并展示出良好的应用前景。但是长期大量应用血管生长因子可能对其他组织和血管产生不良影响，并且血管生长因子半衰期短，不能对患者的全身进行应用。
[0004]目前，通过向心肌内直接注射裸DNA或带有编码基因的腺病毒载体是早期基因治疗心血管疾病的常用方法，使得基因能进行一定的转移。
[0005]然而，需要通过胸廓切开术等损伤性的方式来实现，术后容易引发注射部位的炎症和纤维症。向心包灌注重组质粒，基因能够获得比直接注射更高的转移效率，但就目前的实际情况而言，此种活体外的基因转移只适用于移植的心脏。因此，对心脏疾病进行治疗的过程中，亟需解决在治疗中不能进行有效、安全和可控地进行靶向给药治疗的情况。
技术实现思路
[0006]本专利技术的目的是要解决现有技术中存在的不足，提供一种心脏靶向外泌体及应用和治疗心脏疾病的药物，通过靶向心脏组织给药，提高心脏疾病的治疗效果，降低药物毒副反应。
[0007]为达到上述目的，本专利技术是按照以下技术方案实施的：
[0008]本专利技术第一方面提供了一种心脏组织靶向外泌体，所述靶向外泌体来源于小肠部位的细胞。
[0009]术语“外泌体”是一种囊泡，其从细胞向细胞外分泌，或具有由存在于细胞内的脂质双分子层构成的膜结构。外泌体的直径约为30
‑
1000nm，外泌体在多泡体与细胞膜融合时从细胞中释放出来，或直接从细胞膜中释放出来。已知外泌体发挥运输细胞内的生物分子蛋白、生物活性脂质和RNA(miRNA)的作用，以实现其在介导凝固、细胞间通讯和细胞免疫方面的功能性作用。
[0010]上述外泌体的概念包括微泡。已知外泌体的标记蛋白有CD63、CD81、TSG101等，除
此之外，已知的还有细胞表面受体(如：EGFR)，信号传导相关分子、细胞粘附相关蛋白、MSC相关抗原、热休克蛋白、囊泡形成相关Alix等蛋白。
[0011]在一些实施方案中，外泌体直径为约30到约500、直径为约30到约300、直径为约30到约250、直径为约30到约220、直径为约40到约175、约50到约150、约30到约150或约30到约120nm。
[0012]进一步，所述细胞选自正常细胞或其衍生株、癌细胞。
[0013]进一步，所述细胞来源于人或非人类哺乳动物。
[0014]进一步，所述非人类哺乳动物包括非人灵长类动物、啮齿动物、牛、猪、羊、犬、兔、猫、马。
[0015]进一步，所述啮齿动物包括小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠。
[0016]进一步，所述灵长类动物包括猴、猩猩、狒狒、猿。
[0017]在本专利技术中，所述小肠部位的细胞是指来源于小肠的细胞或者干细胞诱导分化的小肠细胞。所述干细胞包括多能干细胞、胚胎干细胞。在本专利技术中，所述多能干细胞选自诱导多能干细胞。
[0018]诱导多能干细胞是通过诱导一种或多种干细胞特异性基因的表达而产生的非多能细胞(通常是成熟体细胞)的人工衍生干细胞。这样的干细胞特异性基因包括但不限于八聚体转录因子家族，即Oct
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3/4；Sox基因家族，即Sox1，Sox2，Sox3，Sox15和Sox 18；Klf基因家族，即Klf1，Klf2，Klf4和Klf5；Myc基因家族，即c
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myc和L
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myc；Nanog基因家族，即OCT4，NANOG和REX1。
[0019]进一步，所述小肠部位的细胞包括小肠细胞、小肠癌细胞、诱导多能干细胞诱导的小肠细胞。
[0020]进一步，小肠细胞包括小肠组织上皮细胞如FHs 74lnt、INT407、MODE
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K、PEC
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J2、CEIEC，小肠粘膜上皮细胞，小肠隐窝上皮细胞，小肠内皮细胞，小肠内分泌细胞如STC
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1，小肠平滑肌细胞，小肠成纤维细胞如RSIFC；小肠癌细胞包括HIC
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2细胞。
[0021]在本专利技术中，小肠部位的细胞也可以进行基因修饰或改造或诱导以使其对心脏组织具有靶向性，包括但不限于基因改造、基因修饰、基因过表达或删除、分子修饰等；小肠部位的细胞分泌的外泌体也可以进行表面修饰或改造以使其对心脏组织具有靶向性，包括但不限于表面蛋白修饰、表面蛋白改造、表面小分子修饰等。
[0022]本专利技术第二方面提供了一种本专利技术第一方面所述的靶向外泌体的制备方法，包括以下步骤：
[0023]培养细胞，获取细胞培养液；
[0024]离心，取上清液；
[0025]二次离心，取上清液；
[0026]再次离心，缓冲液重悬沉淀获得靶向外泌体。
[0027]进一步，步骤2)离心条件为2000g离心10min。
[0028]进一步，步骤3)离心条件为10000g离心30min。
[0029]进一步，步骤4)离心条件为100000g离心2h。
[0030]进一步，步骤4)所述的缓冲液为PBS。
[0031]进一步，所述细胞选自小肠部位的细胞。
[0032]本专利技术第三方面提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括本专利技术第一方面所述的靶向外泌体；和治疗剂/预防剂。
[0033]进一步，所述治疗剂或预防剂包括小分子化学药物、肽类或蛋白质药物、抗体、酶、细胞因子、激素、抗生素、疫苗和/或核酸类药物。所述治疗剂或预防剂可以是任何常规药物，只要其能起到治疗心脏疾病即可。
[0034]进一步，所述核酸类药物包括质粒DNA、mRNA、microRNA、小干扰RNA、shRNA、有义RNA、反义寡核苷酸、适配体。
[0035]进一步，所述肽类或蛋白质药物包括LDL受体。
[0036]进一步，所述细胞因子包括TPO、EPO、tPA、MyOD、血管内皮生长因子和碱性成纤维内皮细胞生长因子。
[0037]进一步，细胞因子包括血管内皮生长因子。
[0038]进一步，所述血管内皮生长因子选自VEGF。
[0039本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种心脏组织靶向外泌体，其特征在于，所述靶向外泌体来源于小肠部位的细胞；优选地，所述细胞选自正常细胞或其衍生株、癌细胞；优选地，所述细胞来源于人或非人类哺乳动物；优选地，所述非人类哺乳动物包括非人灵长类动物、啮齿动物、牛、猪、羊、犬、兔、猫、马；优选地，所述啮齿动物包括小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠。2.根据权利要求1所述的靶向外泌体，其特征在于，所述小肠部位的细胞包括小肠细胞、小肠癌细胞、诱导多能干细胞诱导的小肠细胞；优选地，小肠细胞包括小肠组织上皮细胞如FHs 74lnt、INT407、MODE
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K、PEC
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J2、CEIEC，小肠粘膜上皮细胞，小肠隐窝上皮细胞，小肠内皮细胞，小肠内分泌细胞如STC
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1，小肠平滑肌细胞，小肠成纤维细胞如RSIFC；小肠癌细胞包括HIC
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2细胞。3.权利要求1或2所述的靶向外泌体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)培养细胞，获取细胞培养液；2)离心，取上清液；3)二次离心，取上清液；4)再次离心，缓冲液重悬沉淀获得靶向外泌体；优选地，其特征在于，步骤2)离心条件为2000g离心10min；优选地，步骤3)离心条件为10000g离心30min；优选地，步骤4)离心条件为100000g离心2h；优选地，步骤4)所述的缓冲液为PBS；优选地，所述细胞选自小肠部位的细胞。4.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求1或2所述的靶向外泌体；和治疗剂/预防剂；优选地，所述治疗剂或预防剂包括小分子化学药物、肽类或蛋白质药物、抗体、酶、细胞因子、激素、抗生素、疫苗和/或核酸类药物；优选地，所述核酸类药物包括质粒DNA、mRNA、microRNA、小干扰RNA、shRNA、有义RNA、反义寡核苷酸、适配体；优选地，所...
【专利技术属性】
技术研发人员：姜海涛，
申请(专利权)人：姜海涛，
类型：发明
国别省市：
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