精子唾液酸酶1/3检测试剂盒及其制备方法、检测精子唾液酸酶1/3表达水平的方法技术

本申请提供精子唾液酸酶1/3检测试剂盒及其制备方法、检测精子唾液酸酶1/3表达水平的方法，属于检测技术领域。精子唾液酸酶1/3检测试剂盒包括：固定液、通透液、缓冲液、封闭液、清洗液、抗体液和荧光探针液。抗体液包括生物素化抗体NEU1或生物素化抗体NEU3。本申请的精子唾液酸酶1/3检测试剂盒能够建立免疫流式间接标记法，其具有特异性强及较高的灵敏度，能对精液中精子唾液酸酶NEU1或NEU3的表达水平进行检测。同时，本申请的精子唾液酸酶1/3检测试剂盒检测准确性高，且具有快速和单次检测量大的特点。的特点。的特点。

【技术实现步骤摘要】
精子唾液酸酶1/3检测试剂盒及其制备方法、检测精子唾液酸酶1/3表达水平的方法


[0001]本申请涉及检测
，具体而言，涉及一种精子唾液酸酶1/3检测试剂盒及其制备方法、检测精子唾液酸酶1/3表达水平的方法。

技术介绍

[0002]随着社会的不断发展，不育夫妇越来越多，全球不育夫妇占已婚夫妇10％
‑
15％。据统计，男性生殖能力异常的比例不低于50％。传统的精液常规分析一直是用于判断男性生育力的最基本临床指标。多年来，临床上对绝大部分的男性不育患者的真正不育原因仍然不清楚。尤其是临床上大约有三分之一不育患者，男性的常规精液分析结果均正常和接近正常。临床上把这类患者划为不明原因不育症。常规精液分析只测定精子的数量，存活力，活动率和形态。这些指标只能反映最基本的精液质量，不能反映所有的精子功能。

技术实现思路

[0003]本申请提供了一种精子唾液酸酶1/3检测试剂盒及其制备方法、检测精子唾液酸酶1/3表达水平的方法，其能够快速检测精液中精子唾液酸酶NEU1或NEU3的表达水平。
[0004]本申请的实施例是这样实现的：
[0005]在第一方面，本申请示例提供了一种精子唾液酸酶1/3检测试剂盒，其包括：固定液、通透液、缓冲液、封闭液、清洗液、抗体液和荧光探针液。
[0006]抗体液包括生物素化抗体NEU1或生物素化抗体NEU3。
[0007]在上述技术方案中，本申请的精子唾液酸酶1/3检测试剂盒能够建立免疫流式间接标记法，其具有特异性强及较高的灵敏度，能对精液中精子唾液酸酶NEU1或NEU3的表达水平进行检测。同时，本申请的精子唾液酸酶1/3检测试剂盒检测准确性高，且具有快速和单次检测量大的特点。
[0008]结合第一方面，在本申请的第一方面的第一种可能的示例中，上述抗体液中生物素化抗体NEU1或生物素化抗体NEU3浓度为5～10mg/L。
[0009]结合第一方面，在本申请的第一方面的第二种可能的示例中，上述荧光探针液包括R
‑
藻红蛋白标记链霉亲和素。
[0010]可选地，荧光探针液中R
‑
藻红蛋白标记链霉亲和素的浓度为4～8mg。
[0011]在上述示例中，本申请的精子唾液酸酶1/3检测试剂盒采用生物素化抗体与R
‑
藻红蛋白标记链霉亲和素结合，利用级联放大的反应原理，增强了反应灵敏度，降低非特异性干扰。
[0012]结合第一方面，在本申请的第一方面的第三种可能的示例中，满足以下条件a～f中的至少一项：
[0013]a、固定液包括磷酸二氢钠、磷酸氢钠、多聚甲醛和水。
[0014]b、缓冲液包括磷酸二氢钠、磷酸氢钠、氯化钠和水。
[0015]c、通透液包括聚乙二醇辛基苯基醚、磷酸二氢钠、磷酸氢钠、氯化钠和水。
[0016]d、封闭液包括牛血清白蛋白、磷酸二氢钠、磷酸氢钠、氯化钠和水。
[0017]e、清洗液包括吐温20、磷酸二氢钠、磷酸氢钠、氯化钠和水。
[0018]f、抗体液包括牛血清白蛋白、水以及生物素化抗体NEU1或生物素化抗体NEU3；
[0019]g、荧光探针液包括牛血清白蛋白、R
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藻红蛋白标记链霉亲和素和水。
[0020]第二方面，本申请示例提供了上述精子唾液酸酶1/3检测试剂盒的制备方法，其包括：分别制备固定液、通透液、缓冲液、封闭液、清洗液、抗体液和荧光探针液，然后将固定液、通透液、缓冲液、封闭液、清洗液、抗体液和荧光探针液分装后组装成精子唾液酸酶1/3检测试剂盒。
[0021]在上述技术方案中，本申请的精子唾液酸酶1/3检测试剂盒的制备方法简便，且制得的固定液、通透液、缓冲液、封闭液、清洗液、抗体液和荧光探针液均分装后再组装，在使用时可以根据不同的步骤选取不同的试剂。
[0022]第三方面，本申请示例提供了利用上述的精子唾液酸酶1/3检测试剂盒检测精子唾液酸酶1/3表达水平的方法，其包括：取精液样品，采用清洗液对精液样品进行第一次洗涤处理制得第一样品液，采用固定液对第一样品液进行固定处理制得第二样品液，采用通透液对第一样品进行通透处理制得第三样品液，采用清洗液对第三样品液进行第二次洗涤处理制得第四样品液，采用封闭液对第四样品液进行封闭处理制得第五样品液，在第五样品液中加入抗体液并经第一次孵育处理制得第六样品液，采用清洗液对第六样品液进行第三次洗涤处理制得第七样品液，在第七样品液中加入荧光探针液并经第二次孵育处理制得第八样品液，采用清洗液对第八样品液进行第四次洗涤处理制得第九样品液，采用流式细胞仪检测第九样品液中精子唾液酸酶NEU1或NEU3的表达水平。
[0023]在上述技术方案中，本申请检测精子唾液酸酶1/3表达水平的方法比较简便且快速，准确性高。
[0024]结合第三方面，在本申请的第三方面的第一种可能的示例中，上述封闭处理包括在第四样品液中加入封闭液，静止30～40min，然后离心去除上清液。
[0025]结合第三方面，在本申请的第三方面的第二种可能的示例中，上述第一次孵育处理包括在第五样品液中加入抗体液，在18～30℃下孵育2～2.5h，然后离心去除上清液。
[0026]结合第三方面，在本申请的第三方面的第三种可能的示例中，上述第二次孵育处理包括在第七样品液中加入荧光探针液，在18～30℃下孵育1～1.5h，然后离心去除上清液。
[0027]结合第三方面，在本申请的第三方面的第四种可能的示例中，在上机检测前，在第九样品液中加入缓冲液。
附图说明
[0028]为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本申请的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0029]图1为本申请对照组1的第一流式检测散点图；
[0030]图2为本申请对照组1的第二流式检测散点图；
[0031]图3为本申请对照组1的流式检测直方图；
[0032]图4为本申请对照组2的第一流式检测散点图；
[0033]图5为本申请对照组2的第二流式检测散点图；
[0034]图6为本申请对照组2的流式检测直方图；
[0035]图7为本申请实施例1的第一流式检测散点图；
[0036]图8为本申请实施例1的第二流式检测散点图；
[0037]图9为本申请实施例1的流式检测直方图；
[0038]图10为本申请实施例2的第一流式检测散点图；
[0039]图11为本申请实施例2的第二流式检测散点图；
[0040]图12为本申请实施例2的流式检测直方图；
[0041]图13为本申请对比例1的第一流式检测散点图；
[0042]图14为本申请对比例1的第二流式检测散点图；
[0043]图15为本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种精子唾液酸酶1/3检测试剂盒，其特征在于，所述精子唾液酸酶1/3检测试剂盒包括：固定液、通透液、缓冲液、封闭液、清洗液、抗体液和荧光探针液；所述抗体液包括生物素化抗体NEU1或生物素化抗体NEU3。2.根据权利要求1所述的精子唾液酸酶1/3检测试剂盒，其特征在于，所述抗体液中生物素化抗体NEU1或生物素化抗体NEU3浓度为5～10mg/L。3.根据权利要求1所述的精子唾液酸酶1/3检测试剂盒，其特征在于，所述荧光探针液包括R
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藻红蛋白标记链霉亲和素；可选地，所述荧光探针液中R
‑
藻红蛋白标记链霉亲和素的浓度为4～8mg/L。4.根据权利要求1所述的精子唾液酸酶1/3检测试剂盒的制备方法，其特征在于，满足以下条件a～f中的至少一项：a、所述固定液包括磷酸二氢钠、磷酸氢钠、多聚甲醛和水；b、所述缓冲液包括磷酸二氢钠、磷酸氢钠、氯化钠和水；c、所述通透液包括聚乙二醇辛基苯基醚、磷酸二氢钠、磷酸氢钠、氯化钠和水；d、所述封闭液包括牛血清白蛋白、磷酸二氢钠、磷酸氢钠、氯化钠和水；e、所述清洗液包括吐温20、磷酸二氢钠、磷酸氢钠、氯化钠和水；f、所述抗体液包括牛血清白蛋白、水以及生物素化抗体NEU1或生物素化抗体NEU3；g、所述荧光探针液包括牛血清白蛋白、R
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藻红蛋白标记链霉亲和素和水。5.一种权利要求1～4任一项所述的精子唾液酸酶1/3检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述精子唾液酸酶1/3检测试剂盒的制备方法包括：分别制备所述固定液、所述通透液、所述缓冲液、所述封闭液、所述清洗液、所述抗体液和所述荧光探针液，然后将所述固定液、所述通透液、所述缓冲液、所述封闭液、所述清洗液、所述抗体液和所述荧光探针液分装后组装成所述精子...

【专利技术属性】
技术研发人员：马芳，
申请(专利权)人：成都思瑞多医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：