基于液相色谱串联质谱的血液药物浓度检测方法技术

本发明专利技术提供了一种基于液相色谱串联质谱的血液药物浓度检测方法，包括：获取含待检药物的测血液样本；其中，所述药物为他克莫司、西罗莫司或依维莫司中的任一种；分别对液相色谱和质谱进行液相色谱串联质谱参数的设置及优化；将所述血液样本溶液进样至液相色谱仪串联质谱仪中，随流动相流动并进行检测分析，获得血液样本中的药物浓度曲线；采用标准曲线法，根据血液样本中的药物司峰面积/内标峰面积比值，计算出血液中药物浓度。本发明专利技术检测前处理方法相对简单，一天可以同时处理多批样本；在1

【技术实现步骤摘要】
基于液相色谱串联质谱的血液药物浓度检测方法


[0001]本专利技术涉及生物检测
，尤其涉及一种采用液相色谱串联质谱对血液中药物浓度的检测方法。

技术介绍

[0002]治疗药物监测（Therapeutic Drug Monitoring, TDM）是在药物动力学原理的指导下，应用现代先进的分析技术，测定血液中或其他体液中药物浓度，用于设计或调整给药方案，同时也有助于解释为什么某种药物在常用量时不能产生疗效或发生意外中毒，从而把经验式临床用药提高到科学性较高的水平，以提高药物的疗效和减少不良反应的发生。TDM既是保证治疗充分的重要手段，又是避免过度药物暴露、减少药物相关不良反应的重要措施。液相色谱串联质谱（LC
‑
MS/MS）方法具有特异性强、准确度高、快速测定的特点，常被用来进行药物浓度测定。
[0003]然而，血液中的含有他克莫司、西罗莫司或依维莫司超过一定浓度值时，人体可能会产生相应的疾病以及所带来的危害如下：（1）他克莫司的最主要副作用可能会很严重，包括头痛，心肌损伤，视力模糊，肝脏和肾脏问题，癫痫发作以及糖尿病等。如果注射和口服这种药物引起副作用，应该减少使用剂量。服用他克莫司病人报告出现一种以上副作用的人大约占99.8%。使用免疫抑制药预防移植排斥反应和恶性肿瘤是可能的。但孕妇，哺乳女性和婴儿不要使用他克莫司。这种药物的其他禁忌症候还包括严重肝脏或肾脏疾病，感染，癌症和心脏疾病等。此外要注意的是，葡萄汁可以增加这种药物效力。
[0004]（2）西罗莫司最常见的不良反应（在>10% 的患者身上出现）为血小板减少、贫血、发热、高血压、低钾血症、低磷酸盐血症、尿道感染、高胆固醇血症、高血糖、高甘油三酯血症、腹痛、淋巴囊肿、外周水肿、关节痛、痤疮、腹泻、疼痛、便秘、恶心、头痛、血肌酐水平升高以及血乳酸脱氢酶（LDH）水平升高。总的来说，与服用西罗莫司有关的不良事件是剂量/浓度依赖性的。不良反应的发生率可能随西罗莫司血药谷浓度的升高而升高。
[0005]（3）依维莫司最常见不良反应发生率≥30%的是口炎、感染、虚弱、疲乏、咳嗽和腹泻，其中最严重的是口腔黏膜的反应，最常用的处理方法是口腔洗涤，用无水酒精或者过氧化氢物漱口。当口腔炎出现三级以上或者同时合并口腔黏膜肿胀、发热时请暂停使用，尽快到医院进行就诊处理，使用期间可能会发生血清肌酐、血糖和脂质升高，还可能发生血红蛋白、嗜中性和血小板的降低，因此治疗前和以后定期监察应该进行肾功、血糖、脂质和血液学检查。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供了一种基于液相色谱串联质谱的血液药物浓度检测方法，以解决至少一个上述技术问题。
[0007]为解决上述问题，作为本专利技术的一个方面，提供了一种基于液相色谱串联质谱的
血液药物浓度检测方法，包括：获取含待检药物的测血液样本；其中，所述药物为他克莫司、西罗莫司或依维莫司中的任一种；分别对液相色谱和质谱进行液相色谱串联质谱参数的设置及优化；将所述血液样本溶液进样至液相色谱仪串联质谱仪中，随流动相流动并进行检测分析，获得血液样本中的药物浓度曲线；采用标准曲线法，根据血液样本中的药物司峰面积/内标峰面积比值，计算出血液中药物浓度。
[0008]优选地，所述待检测血液样本由以下步骤制得：将装有全血样本的采集管上下颠倒，量取血液，并制作空白全血；取同浓度的药物标准品储备液和药物质控品储备液分别加入所述空白全血中，混匀，制备得到药物司标准品和质控品工作液；量取所述他克莫司标准品和质控品工作液加入离心管底部，再往离心管中加入超纯水，经涡旋、超声后，加入药物内标工作液，再次涡旋、离心处理后取上清液并加入萃取剂，继续涡旋、离心处理，再取上层液体，使用氮气吹干后，加入复溶液，继续涡旋、冷冻离心处理后，将上清液移转至进样瓶中，获得待检药物的血液样本；其中，所述药物内标工作液为他克莫司_13C_D4内标工作液、西罗莫司_D3内标工作液或依维莫司_D3内标工作液中的任一种。
[0009]优选地，所述药物标准品和质控品工作液制备步骤中还包括如下步骤：将药物与甲醇混匀，配置成两份同浓度的储备液，一份作为药物标准品储备液，一份作为药物质控品储备液；分别量取所述药物标准品储备液、药物质控品储备液与空白全血混匀，制得所述药物标准品和质控品工作液。
[0010]优选地，所述药物标准品和质控品工作液制备步骤中，所述药物标准品储备液、所述药物质控品储备液的体积数分别与所述空白全血的体积数之比为1:19。
[0011]优选地，所述药物内标工作液采用如下步骤制得：移取药物4内标准品，加入甲醇，混匀，配制成药物内标准品储备液；移取所述药物内标准品储备液，加入甲醇沉淀剂Ⅱ及0.1M浓度的硫酸锌混合溶液沉淀剂Ⅰ，混匀，配制成所述药物4内标工作液，备用。
[0012]优选地，所述药物内标工作液涡旋、离心处理过程中，加入的萃取剂为正己烷与乙酸乙酯混合溶液。
[0013]优选地，所述液相色谱串联质谱参数设置和优化步骤中，质谱条件为：正离子模式工作，CAD为2
‑
5，CUR为15
‑
25，GS1为40
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55，GS2为40
‑
55，IS为4000
‑
6000，TEM为300
‑
500
°
C；及液相色谱条件为：色谱柱：Phenomenex Kinetex
®
XB
‑
C18柱，5μm，150mm * 4.6 mm，柱温：60
°
C。
[0014]优选地，所述液相色谱串联质谱检测分析步骤中，在液相色谱仪中进行流动的流动相采用如下步骤制得：配制流动相A：2 mM乙酸铵水溶液含0.1%甲酸；
配制流动相B：2 mM乙酸铵的甲醇溶液中含0.1%甲酸;将所述流动相A和流动相B混合，制得流动相。
[0015]优选地，移取体积比3:7的所述流动相A和流动相B，混匀，获得所述复溶液，置于常温保存15天备用。
[0016]优选地，采用标准曲线法时，还需要制作药物对应的标准曲线，其步骤如下：将药物加入甲醇中，配制7个不同浓度：1ng/mL，2 ng/mL，4ng/mL，10ng/mL，20ng/mL，40ng/mL，80ng/mL的标准曲线，制备三份；随后分三个批次进样到液相色谱
‑
质谱中，绘制出他克莫司、西罗莫司或依维莫司等药物各自对应的标准曲线。
[0017]由于采用了上述技术方案，本专利技术具有以下优点：（1）检测前处理方法相对简单，一天可以同时处理多批样本；（2）仪器上机时间短，分析一针样本只需6.5分钟，一天可以分析上百个样本；（3）可以满足大量样本的同时检测，时效性更短；（4）对于他克莫司、依维莫司和西罗莫司等药物，在1
‑
80 ng/mL，检测范围比较广，满足所有血液中他克莫司样本的检测。
附图说明
[0018]图1为本专利技术提供的血液中药物浓本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于液相色谱串联质谱的血液药物浓度检测方法，其特征在于，包括：获取含待检药物的血液样本，所述药物为他克莫司、西罗莫司、或依维莫司中的任一种；对液相色谱和质谱进行液相色谱串联质谱参数的设置及优化；将所述血液样本溶液进样至液相色谱仪串联质谱仪中，随流动相流动并进行检测分析，获得所述血液样本中的药物浓度曲线；采用标准曲线法，根据血液样本中的药物峰面积/内标峰面积比值，计算出血液中药物浓度。2.根据权利要求1所述的基于液相色谱串联质谱的血液药物浓度检测方法，其特征在于，所述血液样本由以下步骤制得：将装有全血样本的采集管上下颠倒，量取血液，并制作空白全血；取同浓度的药物标准品储备液和药物质控品储备液分别加入所述空白全血中，混匀，制备得到药物标准品和质控品工作液；量取所述药物标准品和质控品工作液加入离心管底部，再往离心管中加入超纯水，经涡旋、超声后，加入药物内标工作液，再次涡旋、离心处理后取上清液并加入萃取剂，继续涡旋、离心处理，再取上层液体，使用氮气吹干后，加入复溶液，继续涡旋、冷冻离心处理后，将上清液移转至进样瓶中，获得待检药物的血液样本；其中，所述药物内标工作液为他克莫司_13C_D4内标工作液、西罗莫司_D3内标工作液、或依维莫司_D3内标工作液中的任一种。3.根据权利要求2所述的基于液相色谱串联质谱的血液药物浓度检测方法，其特征在于，制备得到药物标准品和质控品工作液包括：将所述药物与甲醇混匀，配置成两份同浓度的储备液，一份作为药物标准品储备液，一份作为药物质控品储备液；分别量取所述药物标准品储备液、药物质控品储备液与空白全血混匀，制得所述药物标准品和质控品工作液。4.根据权利要求3所述的基于液相色谱串联质谱的血液药物浓度检测方法，其特征在于，药物标准品储备液的体积数与空白全血的体积数之比、药物质控品储备液的体积数与空...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑仲征，杜可明，袁志阳，王宁娟，李玉侠，
申请(专利权)人：深圳荻硕贝肯精准医学有限公司，
类型：发明
国别省市：