收集源自神经系统细胞的细胞外囊泡的方法技术方案

本发明专利技术解决了提供一种以提高的效率收集源自神经系统细胞的细胞外囊泡的方法的问题。该问题通过收集源自神经系统细胞的细胞外囊泡的方法来解决，所述方法包括将抗

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】收集源自神经系统细胞的细胞外囊泡的方法


[0001]本说明书公开了收集源自神经系统细胞的细胞外囊泡的方法、检测神经精神障碍的方法、收集源自神经系统细胞的成分的方法、收集细胞外囊泡的试剂和检测含有该试剂的细胞外囊泡的试剂盒。

技术介绍

[0002]专利文献1公开了阿尔茨海默病和其他神经退行性疾病的生物标志物以及诊断和预后方法。专利文献2公开了检测从生物样品分离的囊泡(例如，外泌体)中的生物标志物以用于阿尔茨海默病和其他神经退行性疾病的诊断和预后。专利文献3公开了用于定量外泌体亚群的方法以及神经退行性疾病(例如阿尔茨海默病)的诊断和预后方法。专利文献4公开了如何在神经疾病、免疫疾病、胎盘疾病、癌症、血液疾病、肾脏疾病、胃肠疾病、肝脏疾病和肌肉骨骼疾病的诊断和预后方法中使用外泌体和外泌体生物标志物。
[0003]参考文献清单
[0004]专利文献
[0005]专利文献1：WO2015/061634
[0006]专利文献2：WO2017/193115
[0007]专利文献3：WO2018/094120
[0008]专利文献4：WO2019/144056。

技术实现思路

[0009]技术问题
[0010]专利文献2～4公开了外泌体在神经退行性疾病的诊断和预后中的用途。然而，例如，专利文献2中记载的用于收集外泌体的NCAM或CD171不是神经系统细胞特有的蛋白质。为了有效地收集源自神经系统细胞的细胞外囊泡，需要使用对其他神经细胞具有高度特异性的蛋白质来收集源自神经系统细胞的细胞外囊泡。
[0011]本专利技术解决了如下问题：提供一种以提高的效率收集源自神经系统细胞的细胞外囊泡的方法。
[0012]问题的解决方案
[0013]由于勤奋研究的结果，本专利技术人发现，通过针对存在于细胞外囊泡中的APLP1进行免疫沉淀，可以有效地收集源自神经系统细胞的细胞外囊泡。
[0014]本专利技术包括，例如，以下方面作为实施方式。
[0015]项1、一种收集源自神经系统细胞的细胞外囊泡的方法，其包括将抗
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APLP1抗体和含有细胞外囊泡的样品混合以形成抗
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APLP1抗体和细胞外囊泡的复合物的步骤，以及收集抗
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APLP1抗体和细胞外囊泡的复合物的步骤。
[0016]项2、根据项1所述的收集细胞外囊泡的方法，其中，所述含有细胞外囊泡的样品包含从试样中粗纯化的细胞外囊泡。
[0017]项3、根据项1或2所述的收集细胞外囊泡的方法，其中，所述粗纯化通过尺寸排阻色谱法、超速离心法、亲和纯化法、聚合物沉淀法或其组合进行。
[0018]项4、一种检测神经精神障碍的方法，其包括从根据权利要求1至3中任一项所述的方法所收集的细胞外囊泡中获得作为神经精神障碍的生物标志物的多肽和/或多核苷酸的测量值的步骤，和将所述测量值与相应的参考值进行比较以确定所述测量值是在参考范围内或在参考范围之外的步骤。
[0019]项5、根据项4所述的检测神经精神障碍的方法，其中，所述神经精神障碍选自神经退行性障碍、脑脊髓外伤后神经功能障碍、脑肿瘤、感染相关性脑脊髓障碍、多发性硬化症、精神分裂症和躁郁症。
[0020]项6、根据项5所述的检测神经精神障碍的方法，其中，所述神经退行性疾病选自痴呆、帕金森病、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、进行性核上性麻痹、多系统萎缩症和三联体重复序列疾病。
[0021]项7、一种收集源自神经系统细胞的成分的方法，其包括从通过根据项1至3中任一项所述的方法收集的细胞外囊泡中收集选自糖、脂质、多肽和多核苷酸的至少一种生物分子的步骤。
[0022]项8
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1、收集细胞外囊泡的检测试剂，其包含抗
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APLP1抗体。
[0023]项8
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2、根据项8
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1所述的检测试剂，其中，所述细胞外囊泡源自神经系统细胞。
[0024]项8
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3、一种包含抗
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APLP1抗体的检测试剂，其中，所述检测试剂用于实施根据项1至3中任一项所述的收集细胞外囊泡的方法，实施根据项4至6中任一项所述的检测神经精神障碍的方法，或实施根据项7所述的收集源自神经系统细胞的成分的方法。
[0025]项9
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1、一种检测试剂盒，其包括用于收集细胞外囊泡的包含抗
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APLP1抗体的检测试剂。
[0026]项9
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2、根据项9
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1的检测试剂盒，其中，所述细胞外囊泡源自神经系统细胞。
[0027]项9
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3、一种检测试剂盒，其包含含有抗
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APLP1抗体的检测试剂，其中，所述检测试剂盒用于实施根据项1至3中任一项所述的收集细胞外囊泡的方法，实施根据项4中6中任一项所述的检测神经精神障碍的方法，或实施根据项7所述的收集源自神经系统细胞的成分的方法。
[0028]专利技术的有益效果
[0029]根据本专利技术，可以提供收集源自神经系统细胞的细胞外囊泡的改进的有效方法。
附图说明
[0030]图1显示了从血浆中收集的细胞外囊泡的Western印迹法结果。
[0031]图2显示了从iPS细胞分化的神经细胞的培养上清液中收集的细胞外囊泡的Western印迹法结果。
具体实施方式
[0032]1.收集细胞外囊泡的方法
[0033]本实施方式涉及收集源自神经系统细胞的细胞外囊泡的方法。收集细胞外囊泡的方法包括混合抗
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APLP1抗体和含有细胞外囊泡的样品的步骤和收集抗
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APLP1抗体和细胞
外囊泡的复合物的步骤。在收集细胞外囊泡的方法中，抗
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APLP1抗体和细胞外囊泡的复合物可以通过将抗
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APLP1抗体和含有细胞外囊泡的样品混合来形成。
[0034]细胞外囊泡是大小为数十至数千nm左右并被以从细胞中释放的磷脂为主要成分的膜所覆盖的颗粒。细胞外囊泡包括外泌体、微囊泡、凋亡小体等。生物分子通常存在于细胞外囊泡中。例如，外泌体或微泡包含选自多肽和多核苷酸(RNA诸如mRNA、miRNA和非编码RNA和DNA)中的至少一种生物分子。例如，凋亡小体包括选自由破碎的细胞核和细胞器组成的组中的至少一种。细胞外囊泡优选包含选自多肽和多核苷酸中的至少一种生物分子。更优选地，细胞外囊泡包含选自多肽和多核苷酸中的至少一种生物分子。本文中，多肽是指多个氨基酸通过肽键结合而成的化合物，并包括具有相对大的分子量的蛋白质和相对小的分子量的肽。
[0035]淀粉样蛋白β前体样蛋白1：APLP1是淀粉样蛋白前体蛋白基因家族的成员之一，APLP1蛋白在脑内表达，是类似于淀粉样蛋白βA4前体的切割蛋白质的被分泌酶裂解的膜结合糖蛋白。可作为转录激活因子的细胞内细胞质片段通过这种切割被释本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种收集源自神经系统细胞的细胞外囊泡的方法，其包括将抗
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APLP1抗体和含有细胞外囊泡的样品混合以形成抗
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APLP1抗体和细胞外囊泡的复合物的步骤，以及收集所述抗
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APLP1抗体和所述细胞外囊泡的所述复合物的步骤。2.根据权利要求1所述的收集细胞外囊泡的方法，其中，所述含有细胞外囊泡的样品包含从试样中粗纯化的所述细胞外囊泡。3.根据权利要求1或2所述的收集细胞外囊泡的方法，其中，所述粗纯化通过尺寸排阻色谱法、超速离心法、亲和纯化法、聚合物沉淀法或其组合进行。4.一种检测神经精神障碍的方法，其包括从根据权利要求1至3中任一项所述的方法所收集的细胞外囊泡中，获得作为神经精神障碍的生物标志物的多肽和/或多核苷酸的测量值的步骤，和将所述测量值与相应的参考值进行比较以确定所述测量值在参考范围内或在参考范围之外的步骤。5.根据权利要求4所述的检测神经精神障碍的方法，其中，所述神经精神障碍选自神经退行性疾病、脑脊髓外伤后神经功能...

【专利技术属性】
技术研发人员：工藤乔，柳田宽太，赤岭祥真，
申请(专利权)人：国立大学法人大阪大学，
类型：发明
国别省市：