一种复合溶液中抗氧剂的分离检测方法技术

本发明专利技术涉及一种复合溶液中抗氧剂的分离检测方法，属于分析方法领域。所述方法包括采用高效液相色谱，使用亲水作用的色谱柱，通过适宜的流动相，可以较好地分离测定复合溶液中的至少两种抗氧剂。的至少两种抗氧剂。

【技术实现步骤摘要】
一种复合溶液中抗氧剂的分离检测方法


[0001]本专利技术涉及一种复合溶液中抗氧剂的分离检测方法，属于分析方法领域。

技术介绍

[0002]透明质酸是一种天然多糖，由下列重复单元连接而成：N
‑
乙酰
‑
D
‑
葡糖胺和D
‑
葡糖醛酸。它在整个人体(例如，皮肤中)中存在。透明质酸可用于皮肤注射美容、填充，以达到抗衰老，改善衰老现象的作用。
[0003]临床上用于人体皮肤的透明质酸注射制剂，通常是将透明质酸或透明质酸钠和氨基酸，谷胱甘肽或肌肽，维生素等多种营养、作用物质复合配制成凝胶溶液而应用。为了使产品达到较好的抗衰老作用和具有较好的稳定性，可在透明质酸或其钠盐的凝胶溶液中加入抗氧剂硫辛酸、烟酰胺、维生素C或维生素C磷酸酯钠和/或谷胱甘肽或肌肽，还可以包含其他成分如各种人体必需的氨基酸及无机盐等等。为了严格控制注射制剂的质量，需要精确检测复合溶液中的各种成分。然而，在含有多种抗氧剂及成分或进一步含有其他成分的情况下，多种成分彼此之间可能存在干扰，难以分离区分，相对单一成分的分离检测，分离检测复合溶液中的各种成分的含量，就变得更为困难。目前，现有技术中也未见公开针对含有多种抗氧剂成分的透明质酸或其钠盐的复合溶液的分离检测方法。因此，开发一种能够同时分离检测复合溶液中的多种成分的方法，是非常困难和有必要的。

技术实现思路

[0004]由此，本专利技术提供了一种采用高效液相色谱分离测定含有透明质酸或其盐的复合溶液中抗氧剂的方法。本专利技术的方法可以同时有效分离检测透明质酸或其钠盐的复合溶液中的多种抗氧剂，且分离度好，峰型好，能够解决现有技术中无法准确分离检测复合溶液中多种抗氧剂的问题，对产品的质量控制、评价和保证产品的安全性、有效性具有重要作用。
[0005]一种分离测定含有透明质酸或其盐的复合溶液中抗氧剂的方法，包括：采用高效液相色谱法，采用HILIC色谱柱为色谱柱进行分离，流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A为磷酸盐缓冲液与乙腈的混合溶液，流动相B为酸水溶液与乙腈的混合溶液，采用梯度洗脱。
[0006]在一些实施例中，所述复合溶液含有透明质酸或其盐和抗氧化剂。
[0007]所述抗氧剂可以包括硫辛酸、烟酰胺、维生素C、维生素C磷酸酯钠和谷胱甘肽中的至少两种。在一些实施方式中，所述抗氧剂包括硫辛酸、烟酰胺、维生素C、维生素C磷酸酯钠和谷胱甘肽中的三种。在一些实施方式中，所述抗氧剂包括硫辛酸、烟酰胺、维生素C、维生素C磷酸酯钠和谷胱甘肽中的四种。在一些实施方式中，所述抗氧剂包括硫辛酸、烟酰胺、维生素C磷酸酯钠和谷胱甘肽。在一些实施方式中，所述抗氧剂包括硫辛酸、烟酰胺、维生素C和谷胱甘肽。在一些实施方式中，所述抗氧剂包括硫辛酸、烟酰胺、维生素C、维生素C磷酸酯钠和谷胱甘肽。
[0008]所述复合溶液可以包括透明质酸或其盐(如钠盐或锌盐等)及所述抗氧剂；还可以
包括其他成分，如水，甘氨酸、脯氨酸或其他氨基酸，如苏氨酸，异亮氨酸，色氨酸，苯丙氨酸，组氨酸，酪氨酸，鸟氨酸，胱氨酸，蛋氨酸，赖氨酸，缬氨酸，丙氨酸，亮氨酸，谷氨酸，丝氨酸和/或精氨酸等氨基酸类成分，或磷酸二氢钠等其他组分。所述复合溶液的pH值可以为6
‑
9或者7
‑
8。
[0009]专利技术人经过研究发现，使用乙腈为流动相中的有机溶剂，相对于使用甲醇等溶剂，更有利于对复合溶液中的抗氧剂的分离测定。如果使用甲醇等溶剂，难以完全、高效地分离测定复合溶液中待检测的多种抗氧剂。
[0010]所述HILIC色谱柱可以为HILIC Amide色谱柱，如Welch Ultimate HILIC Amide(使用键合了氨基甲酰官能团的硅胶填料作为固定相)，4.6
×
250mm，5μm色谱柱或与其效能相当的色谱柱。采用本专利技术的色谱柱和洗脱程序，在其他条件的配合下，可以更好地准确分离。
[0011]专利技术人经过研究发现使用C18柱，即使根据现有技术将流动相等条件进行不同调整，仍然难以分离测定复合溶液中所述抗氧剂的各个待测组分；而使用亲水作用的HILIC色谱柱，可以较好地将复合溶液中所述抗氧剂中的各个组分分离测定。
[0012]所述流动相A中的磷酸盐缓冲液的pH可以在5.5
‑
6.5范围内，当磷酸盐缓冲液的pH在此范围之外，将无法使前述四种抗氧剂全部较好地分离测定。根据本专利技术的实施例，所述磷酸盐缓冲液的pH为5.7
‑
6.3，有利于分离测定。在一些实施方式中，所述磷酸盐缓冲液的pH为6.0，有利于分离测定。
[0013]以磷酸盐缓冲液的总体积计算，所述磷酸盐缓冲液中磷酸盐的浓度可以为5mmol/L
‑
15mmol/L。在一些实施方式中，以磷酸盐缓冲液的总体积计算，所述磷酸盐缓冲液中磷酸盐的浓度为8mmol/L，10mmol/L或12mmol/L，有利于分离测定各个组分。
[0014]在一些实施方式中，以磷酸盐缓冲液的总体积计算，所述磷酸盐缓冲液中磷酸盐的浓度为10mmol/L，pH为6.0，有利于较好地分离测定。
[0015]所述磷酸盐可以为磷酸二氢钾或其水合物，磷酸二氢钠或其水合物，或它们的任意组合。在一些实施方式中，所述磷酸盐为磷酸二氢钠或其水合物，有利于所述方法的控制和实施。
[0016]流动相A中，磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比可以为30:70
‑
40:60。在一些实施方式中，磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为35:65
‑
40:60，有利于较好地分离测定。在一些实施方式中，磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为40:60，有利于较好地分离测定。
[0017]所述酸水溶液的浓度可以为0.08％vol
‑
0.12％vol(体积分数，v/v)。在一些实施方式中，酸水溶液的浓度优选为0.1％vol。
[0018]所述酸水溶液可以为磷酸水溶液，甲酸水溶液，乙酸水溶液，或它们的任意组合。在一些实施方式中，所述酸水溶液为磷酸水溶液，有利于控制和分离检测。
[0019]流动相B中，酸水溶液与乙腈的体积比可以为1:99
‑
5:95。在一些实施方式中，酸水溶液与乙腈的体积比为3:97，有利于较好地分离测定。
[0020]所述方法还包括：检测波长可以为205nm
‑
215nm。在一些实施方式中，所述检测波长为210nm，有利于分离测定。
[0021]所述方法的柱温可以为20℃
‑
50℃或25℃
‑
45℃或30℃
‑
40℃。在一些实施方式中，所述方法的柱温为40℃，有利于分离测定。
[0022]所述方法的流速可以为0.8mL/min
‑
1.2mL/min，如0.8mL/min、0.85mL/min、0.90mL/min、1.0mL/min、1.1mL/min、1.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离测定含有透明质酸或其盐的复合溶液中抗氧剂的方法，包括：采用高效液相色谱法，采用HILIC色谱柱为色谱柱进行分离，流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A为磷酸盐缓冲液与乙腈的混合溶液，流动相B为酸水溶液与乙腈的混合溶液，采用梯度洗脱；其中，所述抗氧剂包括硫辛酸、烟酰胺、维生素C、维生素C磷酸酯钠和谷胱甘肽中的至少两种；所述流动相A中的磷酸盐缓冲液的pH在5.5
‑
6.5范围内。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述HILIC色谱柱为：Welch Ultimate HILIC Amide，4.6
×
250mm，5μm，或与其效能相当的色谱柱。3.根据权利要求1或2所述的方法，包括以下条件中的至少之一：a)流动相A中的磷酸盐缓冲液的pH为5.7
‑
6.3；b)流动相A中的磷酸盐为磷酸二氢钾或其水合物，磷酸二氢钠或其水合物，或它们的任意组合；c)以磷酸盐缓冲液的总体积计算，所述磷酸盐缓冲液中磷酸盐的浓度为5mmol/L
‑
15mmol/L；和d)流动相A中，磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为30:70
‑
40:60或35:65
‑
40:60。4.权利要求1
‑
3任一所述的方法，其中，以酸水溶液的总体积计算所述酸水溶液中的酸的浓度为0.08％vol
‑
0.12％vol；所述酸水溶液为磷酸水溶液，甲酸水溶液，乙酸水溶液，或它们的任意组合。5.根据权利要求1
‑
4任一所述的方法，其中，流动相B中，酸水溶液与乙腈的体积比为1:99
‑
5:95。6.根据权利要求1
‑
5任一所述的方法，其中，所述方法的检测波长为205nm
‑
215nm，所述方法的柱温为25℃
‑
45℃，所述方法的进样量为10μL
‑
25μL，并且所述方法的流速为0.8mL/min
‑
1.2mL/min。7.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙朋杰，张丽，范以兰，井绪文，周月广，陈霄宇，梁晓怡，胡继霞，
申请(专利权)人：瑞玞生物医学深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：