一种检测多种呼吸道病毒的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种检测多种呼吸道病毒的试剂盒，所述试剂盒包括引物对组，所述引物对组包括第一至第十六引物对中的至少两种，其中，第一至第十六引物对的序列如SEQ IDNO.1～33所示。本发明专利技术检测多种呼吸道病毒的方法中同一靶标设计了两种不同探针(靶标探针与捕获探针)，因此获得了双重的特异性，检测结果更准确，能够很好的避免假阳性和假阴性。本发明专利技术设计的捕获探针，灵敏性和特异性都极高，能实现绝大部分都与PCR中的靶标探针相结合，几乎不会与非靶标探针结合。会与非靶标探针结合。

【技术实现步骤摘要】
一种检测多种呼吸道病毒的试剂盒


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种检测多种呼吸道病毒的试剂盒。

技术介绍

[0002]呼吸道病毒是指一大类能侵犯呼吸道引起呼吸道局部病变或仅以呼吸道为入侵门户，主要引起呼吸道外组织器官病变的病毒。据统计，在儿童和成人中，90％以上的急性呼吸道感染都是由病毒引起的，其中以呼吸道病毒最常见。急性呼吸道感染是临床常见病之一，已成为严重威胁人类健康的一个公共卫生问题。常见的呼吸道病毒有流感病毒、呼吸道合胞病毒、人偏肺病毒、副流感病毒、腺病毒、鼻病毒、人冠状病毒、博卡病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒等。
[0003]流感病毒(Influenza virus)分为甲乙丙三型，猪和禽类可携带甲型流感病毒，乙、丙型流感病毒仅在人之间传播。甲型流感病毒容易发生变异，变异后能够感染人类，感染后症状表现为高热、咳嗽、流涕、肌痛等，多数伴有严重肺炎，严重者心、肾等多种脏器官衰竭导致死亡，病死率很高。乙型流感病毒可引起传染性极强的急性呼吸道传染病，呈爆发或小流行，通常有肌炎及胃肠道症状。呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus，简称RSV)是属于副黏液病毒科的一种RNA病毒，是引起小儿病毒性肺炎最常见的病原，可引起间质性肺炎及毛细支气管炎。人偏肺病毒(Human`metapneumovirus，简称HMPV)，目前认为人类是HMPV已知的唯一天然宿主，该病毒可导致各年龄段急性呼吸道感染，临床表现与同属副黏病毒科的人呼吸道合胞病毒所致疾病相似，重症患者多为婴幼儿、老年人及罹患基础心肺疾病者。HMPV病毒在全球范围内分布，并具有季节性分布，其发病率与冬季流感病毒相当。副流感病毒(Parainfluenza virus，简称PIV)的四种亚型各有不同的临床和流行病学特征。I型和II型的最典型的临床特征是造成儿童喉气管支气管炎，I型是这种儿童喉气管支气管炎的主要原因，而II型次之。I型和II型均能造成其它的上呼吸道和下呼吸道疾病。III型经常导致肺炎和细支气管炎。IV型则很难检出。副流感病毒的潜伏期一般在1～7天左右，感染后因免疫力低，易反复感染。人腺病毒(Human adenovirus，简称HAdV)为腺病毒科的哺乳动物腺病毒属的一种DNA病毒，人腺病毒在呼吸道病毒中的感染率仅次于呼吸道合胞病毒。腺病毒对呼吸道、胃肠道、尿道、膀胱、眼和肝脏等均可感染，人腺病毒约1/3的已知血清型通常与人类疾病有关。冠状病毒(Human coronavirus)是成人普通感冒的主要病原之一，在儿童可以引起上呼吸道感染，一般很少波及下呼吸道。冠状病毒还可引起婴儿，新生儿急性肠胃炎，主要症状为水样大便、发热、呕吐，每天10余次，严重者还可以出现血水样便。严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS
‑
CoV
‑
2)是目前已知的第7种可以感染人的冠状病毒，是引起新型冠状病毒肺炎(COVID
‑
19)主要病原体，其余6种分别是HCoV
‑
229E、HCoV
‑
OC43、HCoV
‑
NL63、HCoV
‑
HKU1、SARS
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CoV(引发重症急性呼吸综合征)和MERS
‑
CoV(引发中东呼吸综合征)。博卡病毒(Human bocavirus，简称HBoV)通常感染肠道和呼吸道，一些病毒可能会通过胎盘传播，导致胎儿先天感染。博卡病毒与其他呼吸道病毒的共感染率可达51％，且更多地区出现在那些只有低拷贝博卡病毒的患儿样品中。博卡病毒可以以低拷贝
数长期存在于呼吸道、血液以及尿液中达一个月之久，而共感染现象在这些长期感染博卡病毒的病人中十分普遍。
[0004]目前检测呼吸道病毒的方法主要为“金标准”培养法，此方法培养时间长，需要有经验的操作者；生物安全风险性高；实验操作繁琐，无法快速地出具检查报告。荧光定量PCR法通量低，一般一次只能检测一种病毒，试剂成本高，样本需求量大，且多重荧光检测时存在荧光干扰影响检测结果。对于上述几种病毒，目前还没有一套可以同时检测的多重PCR方法。
[0005]此外，生物芯片检测病原菌在目前市场得到了广泛的应用，尤其是以核酸探针为捕获探针来同时检测多重病原菌领域需求更大。大多生物芯片只能检测一种病原菌或以多块装载不同核酸探针的芯片联用才能达到多种病原菌同时检测的目的，这种方法效率较低同时较浪费资源。单一核酸探针在芯片上固定较为简单，浸泡孵育或者丝网印刷技术就能够解决，但多重核酸探针的固定则面临着诸多困难。一方面因为芯片微阵列中电极的尺寸较小，多重核酸探针的固定时易出现探针交叉污染造成检测结果的不确定性；芯片表面处理不当，核酸探针固定时数量不足会导致检测信号较低，造成假阴现象；另一方面，核酸探针溶液很难在较疏水的电极表面均匀铺展开，导致在打印时核酸探针在电极表面覆盖度较低，检测信号较低；核酸探针表面带有较多的负电荷，自身之间易出现聚集现象，不利于在芯片电极的固定。

技术实现思路

[0006]本专利技术所要解决的第一个技术问题是：
[0007]提供一种检测多种呼吸道病毒的引物对组。所述检测多种呼吸道病毒的引物对组，能够同时检测多种呼吸道病毒。
[0008]本专利技术所要解决的第二个技术问题是：
[0009]提供一种检测多种呼吸道病毒的信号探针。
[0010]本专利技术所要解决的第三个技术问题是：
[0011]提供一种检测多种呼吸道病毒的捕获探针。
[0012]本专利技术所要解决的第四个技术问题是：
[0013]提供一种引物对组或提供一种信号探针或提供一种捕获探针在制备检测多种呼吸道病毒产品中的应用。
[0014]本专利技术所要解决的第五个技术问题是：
[0015]提供一种检测多种呼吸道病毒的试剂盒。
[0016]本专利技术所要解决的第六个技术问题是：
[0017]提供一种生物芯片。所述芯片能够同时检测多种目标物，极大地提高了检测效率并降低了检测成本。
[0018]本专利技术所要解决的第七个技术问题是：
[0019]提供一种生物芯片的制备方法。
[0020]为了解决所述第一个技术问题，本专利技术采用的技术方案为：
[0021]一种检测多种呼吸道病毒的引物对组，所述引物对组包括以下至少两种的引物对：
[0022]第一引物对：所述第一引物对包括如SEQ ID NO.1所示的正向引物和如SEQ ID NO.2所示的反向引物；
[0023]第二引物对：所述第二引物对包括如SEQ ID NO.3所示的正向引物和如SEQ ID NO.4所示的反向引物；
[0024]第三引物对：所述第三引物对包括如SEQ ID NO.5所示的正向引物和如SEQ ID NO.6所示的反向引物；
[0025]第四引物对：所述第四引物对包括如SEQ ID NO.7所示的正向引物和如SEQ ID NO.8所示的反向引物；
[0026]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测多种呼吸道病毒的引物对组，其特征在于：所述引物对组包括以下引物对中的至少两种：第一引物对：所述第一引物对包括如SEQ ID NO.1所示的正向引物和如SEQ ID NO.2所示的反向引物；第二引物对：所述第二引物对包括如SEQ ID NO.3所示的正向引物和如SEQ ID NO.4所示的反向引物；第三引物对：所述第三引物对包括如SEQ ID NO.5所示的正向引物和如SEQ ID NO.6所示的反向引物；第四引物对：所述第四引物对包括如SEQ ID NO.7所示的正向引物和如SEQ ID NO.8所示的反向引物；第五引物对：所述第五引物对包括如SEQ ID NO.9所示的正向引物和如SEQ ID NO.10所示的反向引物；第六引物对：所述第六引物对包括如SEQ ID NO.11所示的正向引物和如SEQ ID NO.12所示的反向引物；第七引物对：所述第七引物对包括如SEQ ID NO.13所示的正向引物和如SEQ ID NO.14所示的反向引物；第八引物对：所述第八引物对包括如SEQ ID NO.15所示的正向引物和如SEQ ID NO.16所示的反向引物；第九引物对：所述第九引物对包括如SEQ ID NO.17所示的正向引物和如SEQ ID NO.18所示的反向引物；第十引物对：所述第十引物对包括如SEQ ID NO.19所示的正向引物和如SEQ ID NO.20所示的反向引物；第十一引物对：所述第十一引物对包括如SEQ ID NO.21所示的正向引物和如SEQ ID NO.22所示的反向引物；第十二引物对：所述第十二引物对包括如SEQ ID NO.23所示的正向引物和如SEQ ID NO.24所示的反向引物；第十三引物对：所述第十三引物对包括如SEQ ID NO.25所示的正向引物和如SEQ ID NO.26所示的第一反向引物或者如SEQ ID NO.27所示的第二反向引物；第十四引物对：所述第十四引物对包括如SEQ ID NO.28所示的正向引物和如SEQ ID NO.29所示的反向引物；第十五引物对：所述第十五引物对包括如SEQ ID NO.30所示的正向引物和如SEQ ID NO.31所示的反向引物；第十六引物对：所述第十六引物对包括如SEQ ID NO.32所示的正向引物和如SEQ ID NO.33所示的反向引物。2.根据权利要求1所述的引物对组，其特征在于：所述呼吸道病毒包括新型冠状病毒、流感病毒甲型、副流感病毒III型、冠状病毒HCoVOC43、副流感病毒IV型、冠状病毒、流感病毒乙型、人偏肺病毒、呼吸道合胞病毒A型、呼吸道合胞病毒B型、副流感病毒II型、冠状病毒HCoV
‑
229E、博卡病毒、冠状病毒HCoV
‑
NL63、人腺病毒和副流感病毒I型中的至少两种。3.一种检测多种呼吸道病毒的信号探针，其特征在于：所述信号探针包括以下信号探
针中的至少两种：IVA：5
’‑
Fc
‑
ATCAAAGCTCTCAAACGCTCACCGTGCCCAGTGAGCGA
‑3’
；IVB：5
’‑
Fc
‑
CAGTAATGGGCAGTATGGCCATCGGATCCTCAAYTCACTCT
‑3’
；HCOV
‑
HKU1：5
’‑
Fc
‑
GGCTGATACGACAATGAGTGAAATAGTTATGTGTGGCGG
‑3’
；HCOV
‑
OC43：5
’‑
Fc
‑
ACAGCGAGTCTTTTCCGCCTGGCACGGTACTCC
‑3’
；HCOV
‑
NL63：5
’‑
Fc
‑
GTGCTCCGAACTATTGCCAAGGCTCCTAAACGTACAGGT
‑3’
；HCOV
‑
229E：5
’‑
Fc
‑
CCAAGTCATTGACGCCCTGACGACCACGTTGTGGTTC
‑3’
；RSVA：5
’‑
Fc
‑
AACGATCTCTTGGGCTAGGAGCCATTGTGTCATGCTAT
‑3’
；RSVB：5
’‑
Fc
‑
ACTTATGGGACAACCTATGACATCAACGACAACAGGAAATCATG
‑3’
；PIV1：5
’‑
Fc
‑
ACTTATGGGACAACCTATGACATCAACGACAACAGGAAATCATG
‑3’
；PIV2：5
’‑
Fc
‑
ATAGGAGAACAAACATGGAATCAATCGCAAAAGCTGT
‑3’
；PIV3
‑
1：5
’‑
Fc
‑
CAGTTTCGTGTAATTGGATGTTCAAGACCTCCATACCCGA
‑3’
；PIV3
‑
2：5
’‑
Fc
‑
CAGTTTCGTGTAATTGGATGTTCAAGACCTCCATATCCGAG
‑3’
；PIV3
‑
3：5
’‑
Fc
‑
CAGTTTCGTGTAATTGGGTGTTCAAGACCTCCATATCCGA
‑3’
；PIV4：5
’‑
Fc
‑
ATATGCT...

【专利技术属性】
技术研发人员：张琦文，陈全友，陈丽伊，何筠，高亚平，伊戈尔，
申请(专利权)人：安序源生物科技深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：