一种呼吸道细菌联合检测装置及其制备方法制造方法及图纸

本发明专利技术涉及一种呼吸道细菌联合检测装置及其制备方法，属于医疗检测装置领域。样品垫、免疫胶体金玻璃纤维膜、免疫硝酸纤维素膜和吸收垫分别粘贴在塑料板，所述免疫硝酸纤维素膜的两端分别与吸收垫、免疫胶体金玻璃纤维膜搭接，所述免疫胶体金玻璃纤维膜的另一端与样品垫搭接；所述免疫硝酸纤维素膜上设置第一检测线T1、第二检测线T2、第三检测线T3、设置第四检测线T4、第五检测线T5、第六检测线T6和质控线C。本发明专利技术可实现呼吸道感染性疾病的灵敏、特异、全面快速检测。置操作简便，不需要专业人员操作，实用性强，检测成本低。检测成本低。检测成本低。

【技术实现步骤摘要】
一种呼吸道细菌联合检测装置及其制备方法


[0001]本专利技术涉及医疗检测装置领域，特别涉及一种肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯杆菌、MP、CP的IgM抗体联合检测装置及其制备方法，利用胶体金免疫层析技术以及捕获法原理定量检测全血、血清、血浆标本中人肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯杆菌、肺炎支原体、肺炎衣原体的IgM抗体的检测装置及其制备方法，可实现呼吸道感染性疾病的灵敏、特异、全面快速检测。

技术介绍

[0002]肺炎是指终末气道、肺泡和肺间质的炎症，可由病原微生物、理化因素、免疫损伤、过敏及药物所致；细菌性肺炎是最常见的肺炎，也是最常见的感染性疾病之一，患者常有发烧、咳嗽、呼吸困难等典型表现；细菌性肺炎如肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、肺炎克雷伯杆菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌肺炎和鲍曼不动杆菌等；非典型病原体所致肺炎如军团菌、支原体和衣原体等。
[0003]肺炎链球菌于1881年首次由巴斯德(Louis Pasteur)及G.M.Sternberg分别在法国及美国从患者痰液中分离出。为革兰染色阳性，菌体似矛头状，成双或成短链状排列的双球菌，有毒株菌体外有化学成分为多糖的荚膜。肺炎链球菌肺炎是由肺炎链球菌引起的肺部炎症。肺炎链球菌至今仍然是社区获得性肺炎(CAP)的主要致病原。近年来，随着抗菌药物的广泛应用，肺炎链球菌的耐药性发生了变化，从而使本病的起病方式、临床表现和影像学改变均变得不典型，治疗方案也发生变化。
[0004]流感嗜血杆菌是一种对人有致病性的细菌，一般寄居于正常人上呼吸道，当菌数呈异常生长时能够引起原发性化脓性感染和呼吸道继发感染；本菌通过呼吸道在人与人之间传播，也可通过孕妇产道感染；流感嗜血杆菌以冬季带菌率较高，全年均可发病，本病遍布世界各国；以病人和鼻咽带菌者为传染源；呼吸道分泌物通过空气、飞沫和密切接触、孕妇产道进行传播。流感杆菌由鼻咽部侵入血流，引起化脓性脑膜炎，也可由中耳炎和乳突炎等引起脑膜炎；人群普遍易感，婴幼儿、免疫力低下为主要好发人群，5岁以下儿童是该病的高危人群；流感嗜血杆菌较广泛地寄居于正常人的上呼吸道,该病主要由呼吸道分泌物通过空气飞沫和密切接触进行传播，在咽喉部获得感染,可导致咽喉无症状携带,并可持续数月,在感染者中少数人发生侵袭性疾病。
[0005]金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属(Staphylococcus)，有"嗜肉菌"的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染；金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到，因此，食品受其污染的机会很多；金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品；此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道；上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83％，所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。
[0006]肺炎克雷伯杆菌是一种致病性细菌，通常在中老年人群中发生，主要表现是急性
肺炎，症状是发热，伴有咳嗽和咳痰的症状。肺炎克雷伯杆菌是肠杆菌科克雷伯氏菌属中最为重要的一类菌(俗称肺炎杆菌)，其所致疾病占克雷伯氏菌属感染的95％以上。常存在于人体上呼吸道和肠道，当机体抵抗力降低时，便经呼吸道进入肺内而引起大叶或小叶融合性实变，是肠杆菌科克雷伯菌属中对人致病性较强的重要条件致病菌和医源性感染菌。在院内感染的败血症中，克雷白杆菌以及绿脓杆菌和沙雷菌等均为重要病原菌，病死率较高。
[0007]肺炎是一种常见的呼吸内科疾病。肺炎由于病原体不同分为很多类型。支原体肺炎和衣原体肺炎就是两种常见的肺炎。支原体肺炎和衣原体肺炎都会出类似的临床症状，但是它们是有区别的。支原体肺炎和衣原体肺炎就是两种常见的肺炎。虽然支原体肺炎和衣原体肺炎会出现一些相同的症状，但是它们是有区别的。支原体肺炎和衣原体肺炎在致病原因，临床症状，治疗方法等方面都有所不同。患了肺炎一定要进行及时的治疗。支原体肺炎和衣原体肺炎的致病原因是不一样的。支原体肺炎的主要病原为肺炎支原体。而衣原体肺炎由衣原体感染引起的。支原体肺炎和衣原体肺炎都是通过呼吸道分泌物进行传播的。支原体肺炎和衣原体肺炎的临床症状也是不一样的。支原体肺炎常见的症状包括发热、厌食、咳嗽、畏寒、头痛、咽痛、胸骨下疼痛等。多数患者咳嗽重，初期干咳，随后有痰。婴儿患者会出现喘鸣及呼吸困难。重症患者可能会出现胸腔积液、肺不张，纵隔积气、气胸、坏死性肺炎等并发症。而衣原体肺炎早期表现为上呼吸道感染症状。患者会出现发热、寒战、肌痛、干咳，非胸膜炎性胸痛，头痛、不适和乏力等症状。相对支原体肺炎来说，衣原体肺炎的症状较轻。
[0008]肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯杆菌、MP、CP临床治疗方案有所差异，因此需要进行鉴别诊断出究竟是哪种致病因素，然后针对性治疗；因此肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯杆菌、MP、CP的IgM抗体联合定性检测项目能够及时、便捷、精准、全面检测出感染了哪种病毒，给临床诊疗带来极大收益，也给各级医疗机构、疾控中心等场景提供一个有力的、全面的、精准的筛查和诊断工具。其次其检测样本为全血或者血清、血浆，取材方便安全；肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯杆菌、MP、CP的IgM抗体为现症感染指标，不存在假阳性问题，因此更加精准，对临床诊断价值非常大。
[0009]呼吸道细菌感染类型的确认，一般采用细菌培养等防范，耗时比较长。随着快速诊断技术的发展和应用，目前市场上检测呼吸道细菌感染的产品类型基本可以分为3大类：核酸诊断类(PCR法)、酶联免疫吸附法(ELISA法)和胶体金免疫层析法。PCR法准确度最高，是确诊的首选方法，但检测成本较高，检测时间较长；ELISA法是医院检验科和疾控系统实验室的经典方法；胶体金法速度最快、技术成熟稳、简便易行，适合于各级医疗机构、疾控中心等场合的普遍筛查和诊断。
[0010]胶体金免疫层析技术(gold immunochromatography assay，GICA)是一种将胶体金标记技术和蛋白质层析技术结合的以微孔滤膜为载体的固相膜免疫分析技术。胶体金免疫层析技术是一种常用的免疫层析检测方法，由于其操作简单、省时、制造成本较低、结果易判读等特点，非常适合于现场检测，广泛用于生物、医药、食品等领域。由于胶体金免疫层析技术是一步完成检测，因此检测过程的干扰因素较多，其灵敏度低是限制胶体金免疫层析应用范围的主要因素，传统的胶体金免疫层析技术的检测限高于ELISA等方法。
[0011]在胶体金免疫层析检测中，蛋白质固着于硝酸纤维素膜(NC膜)作为待测样本的捕
获试剂。由于检测结果完全取决于捕获试剂在膜上达到良好的吸附效果，因此蛋白质在膜上均一、良好的吸附对胶体金检测结果非常重要。如果NC膜上结合的蛋白量不足或者蛋白结合力不够强，就会出现相当多的问题本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种呼吸道细菌联合检测装置，其特征在于：样品垫、免疫胶体金玻璃纤维膜、免疫硝酸纤维素膜和吸收垫分别粘贴在塑料板，所述免疫硝酸纤维素膜的两端分别与吸收垫、免疫胶体金玻璃纤维膜搭接，所述免疫胶体金玻璃纤维膜的另一端与样品垫搭接；所述免疫硝酸纤维素膜上设置第一检测线T1、第二检测线T2、第三检测线T3、设置第四检测线T4、第五检测线T5、第六检测线T6和质控线C；所述的第一检测线T1上固相有肺炎链球菌抗原，第二检测线T2上固相有流感嗜血杆菌抗原，第三检测线T3上固相有金黄色葡萄球菌抗原，第四检测线T4上固相有肺炎克雷伯杆菌抗原，第五检测线T5上固相有肺炎支原体抗原，第六检测线T6上固相有肺炎衣原体抗原，质控线C上喷点羊抗鼠IgG多克隆抗体，所述免疫硝酸纤维素膜上设置的第一检测线T1、第二检测线T2、第三检测线T3、第四检测线T4、第五检测线T5和第六检测线T6分别设置在六条线上，并在每条线上分别设置质控线C。2.一种呼吸道细菌联合检测装置的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：(a)氧化锌
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壳聚糖
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胶体金制备1)N
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羧乙基壳聚糖的合成：将4.0g壳聚糖加入到含有2.80mL丙烯酸的200mL水中，在50℃下，持续搅拌2天，反应完成后，在反应混合液中加入1mol/L的NaOH溶液，调节溶液的pH值至10
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12，使其所有的羧酸全部转化为钠盐，将混合溶液倒入到丙酮中进行重沉淀，然后在水溶液中透析，除去未反应的丙烯酸，透析两天后，冷冻干燥得到N
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羧乙基壳聚糖；2)纳米氧化锌颗粒制备：称取1.3225gZnAc2·
2H2O溶解在20mL的蒸馏水中,缓慢滴加9mL 5mol/L的NaOH溶液，溶液先出现白色浑浊,继续滴加则浑浊完全消失，再加入11mL的蒸馏水，搅拌均匀，然后倒入低压反应釜中，将反应釜放入烘箱中，在170℃下加热12个小时，自然冷却至室温后,得到沉淀后，分别用水和乙醇清洗、离心两次，将沉淀放入烘箱内于60℃烘干备用；3)N
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羧乙基壳聚糖与纳米氧化锌混合溶液的制备：将5.00gN
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羧乙基壳聚糖加入到300mL去离子水中，在室温下剧烈搅拌0.5h，充分溶解得到水溶性壳聚糖溶液，将上述水溶性壳聚糖溶液和纳米氧化锌按一定的比例混合，将混合液剧烈搅拌3h，使其混合均匀；4)胶体金的制备：将装有95
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105ml纯化水的圆底烧瓶放入电热套指定位置加热，接通电热套电源，加热10
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12分钟后，待烧瓶中水即沸腾之时、开启转数控制开关，调至350
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400rpm，并用注射器缓慢加入1ml 1％氯化金溶液，之后快速加入1％柠檬酸三钠溶液1
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2ml，待溶液冷却到室温后，加水称重补足重量；5)氧化锌
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壳聚糖
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胶体金制备：以苯二甲醛作为交联剂，在常温下进行交联；交联结束，将所得的氧化锌
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壳聚糖
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胶体金洗涤，真空干燥20
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24h；(b)氧化锌
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壳聚糖
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胶体金交联记抗人IgM抗体，取1ml氧化锌
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壳聚糖
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...

【专利技术属性】
技术研发人员：王洪波，
申请(专利权)人：吉林迅准生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：