用于去抑制RE1沉默转录因子靶基因的组合物和方法技术

本发明专利技术涉及用于去抑制RE1沉默转录因子(REST)靶基因的化合物、组合物和方法。具体而言，公开了具有序列TEDLEPPEPPLPKEN(SEQIDNO：1)和EDLEPPEPPLPK(SEQIDNO：15)或由D

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于去抑制RE1沉默转录因子靶基因的组合物和方法
[0001]相关申请的交叉引用及优先权要求
[0002]本申请要求2019年11月22日提交的美国临时专利申请No.62/939,149和2020年10月1日提交的美国临时专利申请No.63/086,248的优先权，它们公开的内容通过引用并入本文。


[0003]本专利技术提供了用于去抑制RE1沉默转录因子(REST)靶基因的方法、化合物和组合物。具体而言，本专利技术公开了一种具有序列TEDLEPPEPPLPKEN(SEQ ID NO：1)和EDLEPPEPPLPK(SEQ ID NO：15)的肽，或由D
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氨基酸nekplppeppeldet(SEQ ID NO：16)和kplppeppelde(SEQ ID NO：17)组成的反向序列(反向倒置，retro inverted，RI)的肽，用于抑制REST活性。这些肽可用于治疗、预防或改善诸如创伤性脑损伤、癫痫、痴呆、亨廷顿病(HD)、慢性疼痛、脑癌(包括多形性胶质母细胞瘤)、胰腺癌；糖尿病和周围神经损伤等病变。

技术介绍

[0004]阻遏因子1(RE1)沉默转录因子(REST)是数百种神经元基因的阻遏因子1。其靶点代表终末分化神经元细胞表型所需的基因，包括编码电压和配体依赖性离子通道的基因、其受体、生长因子和轴突导向蛋白(Bruce AW等人,Proc Natl Acad Sci U S A 101,10458
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10463(2004)；Conaco C等人,Proc Natl Acad Sci U S A 103,2422
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2427(2006)；Mortazavi A等人,Genome Res 16,1208
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1221(2006)；和Otto SJ等人,J Neurosci 27,6729
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6739(2007)；所有这些都通过引用并入本文)。因此，在神经发生过程中，REST逐渐下调，以使成熟神经元表型得以确立(Ballas等人，2005，上文(supra))。这一事件的重要性通过功能获得研究得到证实，这些研究表明，REST的持续存在会阻碍终末神经元分化(Mandel G等人，Proc Natl Acad Sci U S A 108，16789
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16794(2011)和Gao Z等人，J Neurosci 31，9772
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9786(2011)；两者均通过引用并入本文)。
[0005]对REST的转录或转录后调节知之甚少(Ballas N等人2005，上文；Ballas N等人,Neuron 31,353
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365(2001)；和Kojima T等人,Brain Res Mol Brain Res 90,174
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186(2001)；所有这些都通过引用并入本文)。然而，REST上的两个磷酸化位点(丝氨酸861和864)通过与C端结构域小磷酸酶
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1(CTDSP1)的相互作用调节神经元分化2。当CTDSP1从丝氨酸861和864中去除磷酸盐时，REST蛋白被稳定，神经元分化受到抑制2‑4。

技术实现思路

[0006]本文公开了用于开发对CTDSP1具有高亲和力的肽的方法、化合物和组合物。
[0007]本文公开了用于结合C端结构域小磷酸酶1(CTDSP1)的方法、化合物和组合物。
[0008]本文公开了结合CTDSP1以抑制REST活性的REST类磷酸肽TEDLEPPEPPLPKEN(SEQ ID NO：1)、EDLEPPEPPLPK(SEQ ID NO：15)、nekplppeppeldet(SEQ ID NO：16)和kplppeppelde(SEQ ID NO：17)。小写字母代表D
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氨基酸，其抗降解，因此增加了肽半衰期，
而不影响结合亲和力5。
[0009]本文公开了九十八(98)种REST类磷酸肽变体(RPPv)(SEQ ID NO：18至117)，其在不同程度上抑制REST上的CTDSP1活性(图25)。
[0010]本文公开了细胞内转运肽，例如细胞穿透肽(CPP)和/或内涵体释放序列(SEQ ID NO：118至137和140至159)，其N端或C端可融合至RPP(SEQ ID NO：1和15至17)或RPPv(SEQ ID NO：18至117)以改善细胞内转运。还公开了可插入RPP或RPPv与表7中所列肽之一之间以进一步改善细胞内转运的接头(SEQ ID NO：138、139、160和161)。
[0011]本文公开的了N端或C端融合到细胞内转运肽(SEQ ID NO：118至137和140至159)并环化以进一步提高结合亲和力和稳定性(增加肽半衰期)的RPP(SEQ ID NO：1和15至17)或RPPv(SEQ ID NO：18至117)。环化融合蛋白的示例为SEQ ID NO：2、5、12、13和14。
[0012]本文公开了N端或C端融合到细胞内转运肽(SEQ ID NO：118至137和140至159)的RPP(SEQ ID NO：1和15至17)或RPPv(SEQ ID NO：18至137和140至159)，促进REST蛋白质的降解。融合蛋白的示例为SEQ ID NO：2和4至14。
[0013]本文公开了N端或C端融合到细胞内转运序列(SEQ ID NO：118至137和140
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159)的如SEQ ID NO：1和15至17的REST类磷酸肽或SEQ ID NO：18至117的RPPv，促进REST靶基因的表达。融合蛋白的示例为SEQ ID NO：2、4至14。
[0014]本文公开了N或C端融合到细胞内转运肽(SEQ ID NO：118至137和140至159)的如SEQ ID NO：1和15至17的RPP或RPPv(SEQ ID NO：18至117)，通过向动物施用有效治疗量的化合物，以增加REST靶基因的表达或增加BDNF的表达，用于治疗患有与REST或CTDSP1相关疾病或病变的动物。融合蛋白的示例为SEQ ID NO：2和4至14。
[0015]本文公开了融合到细胞内转运肽(SEQ ID NO：118至137和140至159)的RPP SEQ ID NO：1和15至17或RPPv(SEQ ID NO：18至117)，可用于治疗动物的创伤性脑损伤、慢性疼痛、周围神经损伤、癫痫、糖尿病、阿尔茨海默病、亨廷顿病、脑肿瘤(包括多形性胶质母细胞瘤)，或者胰腺癌。融合蛋白的示例为SEQ ID NO：2和4至14。
附图说明
[0016]随附附图包含在本说明书中，并构成本说明书的一部分。附图与上面给出的一般描述以及下面给出的示例性实施例和方法的详细描述一起，用于解释本专利技术的原理。在此类附图中：
[0017]图1.(A)示出了CTDSP1结合位点位置的全长REST蛋白。(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的肽，其包含选自SEQ ID NO：1、15
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17和18
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117的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的肽，其中所述氨基酸序列为融合肽。3.根据权利要求2所述的肽，其中所述氨基酸序列融合至细胞穿透肽或内涵体释放序列。4.根据权利要求3所述的肽，其中所述细胞穿透肽或所述内涵体释放序列选自SEQ ID NO：118
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137或140
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159。5.根据权利要求3所述的肽，其中接头将所述氨基酸序列连接至所述细胞穿透肽或所述内涵体释放序列。6.根据权利要求5所述的肽，其中所述接头选自SEQ ID NO：138、139、160和161。7.根据权利要求2所述的肽，其中所述细胞穿透肽或所述内涵体释放序列在N端或C端融合至所述氨基酸序列。8.根据权利要求7所述的肽，其中所述融合肽为环化的。9.根据权利要求2所述的肽，其中所述融合肽具有选自SEQ ID NO：2及4
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14的氨基酸序列。10.一种体内抑制REST活性的方法，所述方法包括将权利要求1所述的肽与CTDSP1接触的步骤。1...

【专利技术属性】
技术研发人员：埃德蒙，
申请(专利权)人：阿尔卡梅纳干细胞治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：