包含辣根过氧化物酶标记的抗体的试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及包含辣根过氧化物酶标记的抗体的试剂盒。本发明专利技术针对单核细胞增生李斯特氏菌的鞭毛蛋白特异性的筛选获得了相应的单克隆抗体，所述抗体具有较好的特异性，并且通过包被抗体和酶标抗体的配对使用后，能够最低限度的检测单核细胞增生李斯特氏菌，具有较好的应用前景。应用前景。

【技术实现步骤摘要】
包含辣根过氧化物酶标记的抗体的试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物检测领域，更具体的是涉及包含辣根过氧化物酶标记的抗体的试剂盒。

技术介绍

[0002]单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)简称单增李斯特菌，革兰氏阳性小杆菌，大小为(0.4
‑
0.5)μm
×
(0.5
‑
2)μm，直或稍弯，多数菌体一端较大，似棒状，常呈V字型排列，有的呈丝状，偶尔可见双球状。在22℃
‑
25℃环境可形成4根鞭毛。本菌对理化因素抵抗力较强。在士壤、粪便、青贮饲料和干草内能长期存活:对碱和盐抵抗力强，对青霉素、氨苄青霉素、四环素、磺胺等均敏感。它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李斯特氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。
[0003]目前，常规的检测方法主要包括细菌培养法，血清凝集法以及分子生物学检测方法。其中，细菌培养法中，特别是食品中李斯特氏菌的传统检验方法是进行前增菌或选择性增菌，以分离培养得到的可疑菌落做生化反应实验、溶血实验、协同溶血实验(CAMP)等免疫学检测，被确定为李斯特氏菌后进一步进行血清分型。该方法中增菌和选择性增菌是不可缺少的步骤。增菌的方法主要包括：冷增菌法和常温培养方法。冷增菌法是在4℃培养30d，有时甚至长达一年。常温增菌需培养24h至7d。故传统检测方法需要7
‑
11d才能分离鉴定出李斯特氏菌，故传统方法检测周期较长。PCR检测时目前较为常见的检测方法，PCR的发展已经相当成熟，广泛应用于李斯特氏菌的检测。PCR扩增特异性引物一种是依据李斯特氏菌的特异毒力基因序列而设计，一种是依据李斯特氏菌基因组中特异序列而设计。常用的靶序列为hlyA、iap、inl、Dth
‑
18等毒力基因。利用PCR方法来检测李斯特氏菌的优点是方法的特异性好，不足之处是灵敏度较低；将样品培养物经化学抽提后再进行扩增，提高了样品的检出率；并且可以检测到传统增菌方法不能检出的“活的非可培养”的李斯特氏菌。PCR技术还可对李斯特氏菌进行定量检测。但是由于PCR检测需要特定的设备，分子生物学方法大多数用于科研，由于该方法的前处理较复杂，而且操作过程要求的技术较高，较难使用于大批量的食品样品的检测。并不适宜偏远地区的快速检测。
[0004]免疫学检测随之应用而生。现在已有德国拜发公司生产的商品化的单增李斯特菌检测试剂盒可供使用。用ELISA方法操作较简单，特异性强，反应灵敏度高，但由于单克隆抗体制备昂贵，所以用ELISA盒进行多种食品样品的检测费用较高。因此，开发自己生产的价格低廉的单克隆抗体避免被国外卡脖子，是目前研究的主要方向。

技术实现思路

[0005]一方面，本专利技术提供了一种特异性针对单核细胞增生李斯特氏菌的单克隆抗体。
[0006]进一步的，所述单克隆抗体是LM3F6，LM3F6单克隆抗体其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：
[0007]DLVMTQTAPSVPVTPGESVSISCRSTQGYCRKLVGDYLYWFLQRPGQSPQLLIYWHPNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCLCCRCKSGGFGSGTKLEIK
[0008]重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示：
[0009]VKPGGSLKLSCAASSWAQYINTMSWVRQTPDKRLEWVAIISYYSRDKYYPDSVKGRFTISRDQDKQTLYLQMSSLKSEDTAMYYCPYTRPPVIWMTWGQGTTVTVS。
[0010]进一步的，还提供了一种与LM3F6配对使用的LM6G3单克隆抗体，该抗体其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示：
[0011]DLVMTQTAPSVPVTPGESVSISCRSTFKPWPKYEPLHLYWFLQRPGQSPQLLIYMWFNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMNACCYYRQFGSGTKLEIK
[0012]重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示：
[0013]VKPGGSLKLSCAASITAQPSPRMSWVRQTPDKRLEWVAICFEKKIGLYYPDSVKGRFTISRDQDKQTLYLQMSSLKSEDTAMYYCEHEWWDEQVSPWGQGTTVTVS。
[0014]在一些实施例中，抗体或其片段(如本文提供的抗SAA抗体)特异性结合靶(SAA)，结合常数至少为10
‑9M或更大的结合常数。在一些实施例中，抗体(例如，单克隆抗体)或其片段，具有10nM或更小的平衡常数(Kd)，例如9nM或更小，8.1nM或更小，8nM或更小，7nM或更小，6nM或更小，6.5nM或更小，6.3nM或更小，5nM或更小，4.3nM或更小，4nM或更小，3nM或更小，2nM或更小，5nM或更小，5nM或更小，4nM或更小，3nM或更小或1.2nM或更小。例如，抗体或其片段以至少约0.1
×
10
‑8M的结合亲和力与靶亲和，至少约0.3
×
10
‑8M，至少约0.5
×
10
‑8M，至少约0.75
×
10
‑8M，至少约0
×
10
‑8M，至少约3
×
10
‑8M至少约5
×
10
‑8M，或至少约2.0
×
10
‑8M，至少约2.5
×
10
‑
8，至少约3.0
×
10
‑
8，至少约3.5
×
10
‑
8，至少约4.0
×
10
‑
8，至少约4.5
×
10
‑
8，至少约5.0
×
10
‑
8M，至少约1
×
10
‑
9M，至少约3
×
10
‑
9M，至少约5
×
10
‑
9M，至少约2
×
10
‑
9M，至少约3
×
10
‑
9M，至少约4
×
10
‑
9M，至少约4.3
×
10
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9M，至少约5
×
10
‑
9M，至少约6
×
10
‑
9M，至少约6.3
×
10
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9M，至少约6.9
×
100.9M，至少本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.结合单核细胞增生李斯特氏菌的单克隆抗体LM3F6和与LM3F6配对使用的结合单核细胞增生李斯特氏菌的单克隆抗体LM6G3在制备检测单核细胞增生李斯特氏菌的ELISA试剂盒中的用途；其中，LM3F6单克隆抗体其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；与LM3F6配对使用的LM6G3单克隆抗体，该抗体其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。2.结合单核细胞增生李斯特氏菌的单克隆抗体LM3F6在制备检测单核细胞增生李斯特氏菌的ELISA试剂盒中的用途；其中，LM3F6单克隆抗体其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；重...

【专利技术属性】
技术研发人员：詹先发，柳静，
申请(专利权)人：北京科跃中楷生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：