一种裂解酶、编码基因、组合物、抑菌剂制备方法及应用技术

本申请属于分子生物学技术领域，尤其涉及一种裂解酶、编码基因、组合物、抑菌剂制备方法及应用。一种葡萄球菌噬菌体裂解酶PB50，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。一种编码权利要求1所述的葡萄球菌裂解酶PB50的基因，所述基因序列如SEQ ID NO.2所示。本申请的裂解酶能够快速裂解葡萄球菌，裂解酶的异源表达可溶性强，包涵体较少。包涵体较少。包涵体较少。

【技术实现步骤摘要】
一种裂解酶、编码基因、组合物、抑菌剂制备方法及应用


[0001]本申请属于分子生物学
，尤其涉及一种裂解酶、编码基因、组合物、抑菌剂制备方法及应用。

技术介绍

[0002]自弗莱明发现青霉素以来，抗生素由于其广谱性和高效性的优点，被广泛快速地应用于医疗、农业、畜牧业、养殖业等，使具有天然耐药性或者获得耐药性的病原细菌大量繁殖，也使细菌的耐药性不断增强。从而导致细菌耐药性成为一个全球性的问题。已开发抗生素类药物有上百种，开发新型抗生素的速率，远远赶不上耐药菌的进化速率，随着耐药性的增强，最终也会使细菌感染变得无药可治。据报道，抗生素会引发包括过敏反应、肾毒性、心脏毒性、肝毒性和神经毒性等不良反应，促使人类需要开发更安全、高效的替抗产品。
[0003]目前应用研发较多的替抗产品包括植物提取物、酸化剂、微生态制剂、噬菌体及其裂解酶等。噬菌体裂解酶是双链DNA噬菌体在感染宿主细胞的后期表达的一种细胞壁水解酶。裂解酶在“杀死”细菌方面，具有以下优势：第一，裂解酶与其来源噬菌体相比，裂解谱更广，可以作用于更多病原菌；第二，裂解酶裂解速率快，通常数分钟即可完成裂解过程；第三，与抗生素、溶菌酶等其他抗菌剂联用效果更好，可以降低单一药物的副作用，并降低耐药性的产生；第四，未见耐药性相关报道。在减抗、替抗的大背景下，裂解酶体现的诸多优势，使其在农业、养殖、食品安全、医疗等领域具有较高的可开发价值。
[0004]葡萄球菌属是一群革兰氏阳性球菌，能引起人和动物的许多严重感染，在人类患病、畜禽疾病及各类环境微生物、食品源微生物中的检出率极高。而耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的传播给临床治疗带来了巨大的挑战。我们期望能够找到一种应对葡萄球菌感染的裂解酶，从噬菌体基因组出发，挖掘更多新型、广谱的裂解酶，为农业、养殖、食品安全、医疗等领域的减抗替抗事业，开辟更多可能性。高效、广谱的噬菌体裂解酶，在葡萄球菌感染的治疗、消杀方面具有巨大的产业化价值。但是，噬菌体裂解酶在异源表达时，通常存在可溶性差、包涵体较多的难题。获得高效、广谱的噬菌体裂解酶是很有必要的。

技术实现思路

[0005]为了获得高效、广谱的葡萄球菌噬菌体裂解酶，本申请提供一种裂解酶、编码基因、组合物、抑菌剂制备方法及应用。
[0006]第一方面，本申请提供一种葡萄球菌噬菌体裂解酶PB50，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0007]第二方面，本申请提供一种编码权利要求1所述的葡萄球菌裂解酶PB50的基因，所述基因序列如SEQ ID NO.2所示。
[0008]第三方面，本申请提供编码葡萄球菌噬菌体裂解酶PB50的基因的用途，应用时采用该基因重组表达产生权利要求1所述的能裂解葡萄球菌的酶。
[0009]第四方面，本申请提供一种抑菌组合物，包括上述葡萄球菌噬菌体裂解酶PB50。
[0010]第五方面，本申请提供一种抑菌剂，其主要活性成分为葡萄球菌噬菌体裂解酶PB50、含有PB50表达元件的载体、含有PB50表达元件的表达盒或含有PB50表达元件的宿主细胞中的至少一种，裂解酶PB50的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示或者编码葡萄球菌裂解酶PB50的基因序列如SEQ ID NO.2所示。
[0011]优选的，抑菌谱为人源葡萄球菌和动物源葡萄球菌。
[0012]第六方面，本申请提供一种PCR引物组，包括特异性扩增葡萄球菌噬菌体PB50基因的引物对pET22b
‑
PB50
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F
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和pET22b
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R
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、pET25b
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，
[0013]各个引物的核苷酸序列分别为：
[0014]pET22b
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：GGAATTCCATATGAAAACAAAAACTCAAGCTCTTGNde I酶切位点
[0015]pET22b
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：CCGCTCGAGACTAAATGTACCCCATGCAGCAC
[0016]Xhol I酶切位点
[0017]pET25b
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：GGAATTCCATATGAAAACAAAAACTCAAGCTCTTGNde I酶切位点
[0018]pET25b
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PB50
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：CCGCTCGAGACTAAATGTACCCCATGCAGCAC
[0019]Xhol I酶切位点
[0020]pET28a
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PB50
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F
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：CGGGATCCATGAAAACAAAAACTCAAGCTCTTG
[0021]BamH I酶切位点
[0022]pET28a
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R
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：CCGCTCGAGTTAACTAAATG TACCCCATGC AGCACCA
[0023]Xhol I酶切位点
[0024]pET32a
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F
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：CGGGATCCATGAAAACAAAAACTCAAGCTCTTG
[0025]BamH I酶切位点
[0026]pET32a
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PB50
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R
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：CCGCTCGAGTTAACTAAATG TACCCCATGC AGCACCA
[0027]Xhol I酶切位点，
[0028]引物对用于扩增的目的片段的大小为798bp。
[0029]第七方面，本申请提供一种葡萄球菌噬菌体裂解酶PB50的制备方法，包括以下步骤：
[0030]以葡萄球菌噬菌体基因组为模板，加入引物，进行PCR扩增，回收葡萄球菌噬菌体裂解酶PB50的编码基因，与相同酶切后的表达载体骨架连接，验证为阳性的重组表达载体pET
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PB50转化表达宿主BL21(DE3)后，经液体培养基培养，诱导表达，收集菌体，提取，纯化，葡萄球菌噬菌体裂解酶PB50具有如SEQ ID N本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种葡萄球菌噬菌体裂解酶PB50，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种编码权利要求1所述的葡萄球菌裂解酶PB50的基因，其特征在于：所述基因序列如SEQ ID NO.2所示。3.如权利要求2所述编码权利要求1所述葡萄球菌噬菌体裂解酶PB50的基因的用途，其特征在于：应用时采用该基因重组表达产生权利要求1所述的能裂解葡萄球菌的酶。4.一种抑菌组合物，其特征在于：包括如权利要求1或2所述的葡萄球菌噬菌体裂解酶PB50。5.一种抑菌剂，其特征在于：其主要活性成分为葡萄球菌噬菌体裂解酶PB50、含有PB50表达元件的载体、含有PB50表达元件的表达盒或含有PB50表达元件的宿主细胞中的至少一种，裂解酶PB50的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示或者编码葡萄球菌裂解酶PB50的基因序列如SEQ ID NO.2所示。6.根据权利要求5所述的抑菌剂，其特征在于：抑菌谱为人源葡萄球菌和动物源葡萄球菌。7.一种PCR引物组，其特征在于：包括特异性扩增葡萄球菌噬菌体PB50基因的引物对pET22b
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PB50
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，各个引物的核苷酸序列分别为：pET22b
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：GGAATTCCATATGAAAACAAAAACTCAAGCTCTTGNde I酶切位点pET22b
‑
PB50
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘强，任慧英，于凌云，孙虎芝，田延军，
申请(专利权)人：北京诺安百汇医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：