本发明专利技术公开了一种乳粉中单峰驼和双峰驼源性同步检测的引物和探针，引物和探针序列如下：正向引物序列如SEQ ID No.1所示；反向引物序列如SEQ ID No.2所示；单峰驼探针序列如SEQ ID No.3所示；双峰驼探针序列如SEQ ID No.4所示；质控探针序列如SEQ IDNo.5所示。本发明专利技术的引物、探针及试剂盒的特异性好、灵敏度高，可以实现乳粉中单峰驼和双峰驼源性以及质控同管检测。检测。检测。
【技术实现步骤摘要】
乳粉中单峰驼和双峰驼源性同步检测的引物和探针及试剂盒
[0001]本专利技术属于食品检测
，尤其涉及乳粉中单峰驼和双峰驼源性检测领域。
技术介绍
[0002]驼乳粉是由骆驼奶加工而成的奶粉，是一种营养价值高于一般动物的乳制品，历史悠久的滋补品，具有增强体质、促进骨骼发育、稳定血糖等功效。驼奶粉的营养比牛、羊奶粉的营养更高，其中含有丰富的蛋白质、脂肪酸，可以为机体提供足够的能量，而且还可以促进自身蛋白质的合成，增强体质。驼奶粉中含有丰富的钙元素，而且是结合钙，更加容易消化和吸收，经常喝驼奶粉不仅可以促进骨骼的生长发育，而且还可以缓解骨质疏松，适合老年人和小孩饮用。驼奶粉中含有类胰岛素蛋白，具有修复胰腺的作用，可以辅助糖尿病患者降血糖、稳定血糖。消费市场中驼奶粉的价格是牛奶粉价格的十倍之多，驼奶粉的原料来源于单峰驼或双峰驼奶。我国对于乳粉真伪鉴别技术方面的研究起步晚，这一领域的研究还处于初步阶段。目前，源性检测领域并没有检测单峰驼和双峰驼源性的技术方法。动物制品真伪鉴别相关的技术研究、检测标准、专利技术专利以及商业试剂盒主要集中在单一通道单一源性检测和异管质控检测，同时多通道多源性检测和同管质控检测报道较少。
技术实现思路
[0003]本专利技术所要解决的技术问题为：如何提供一种高效且特异性强的乳粉中单峰驼源性和双峰驼源性以及质控同管检测的引物、探针及试剂盒和方法，解决乳粉中单峰驼和双峰驼源性成分定性和定量检测问题。
[0004]本专利技术的技术方案为：乳粉中单峰驼源性和双峰驼源性以及质控同管检测的引物和探针，引物和探针序列如下：
[0005]正向引物序列如SEQ ID No.1所示；
[0006]反向引物序列如SEQ ID No.2所示；
[0007]单峰驼探针序列如SEQ ID No.3所示；
[0008]双峰驼探针序列如SEQ ID No.4所示；
[0009]质控探针序列如SEQ ID No.5所示。
[0010]进一步地，单峰驼探针、双峰驼探针和质控探针序列的5'端修饰有报告基团，3'端修饰有淬灭基团，报告基团为FAM、HEX、ROX或CY5中的任意一种，淬灭基团为TAMRA、BHQ1或BHQ2中任意一种。
[0011]上述所述的引物和探针在乳粉中单峰驼和双峰驼源性检测中的应用
[0012]作为本专利技术的另一目的，提供了一种乳粉中单峰驼源性和双峰驼源性以及质控同管检测的试剂盒，该试剂盒中含有：
[0013]SEQ ID No.1所示的正向引物，
[0014]SEQ ID No.2所示的反向引物，
[0015]SEQ ID No.3所示的单峰驼探针，
[0016]SEQ ID No.4所示的双峰驼探针，
[0017]SEQ ID No.5所示的质控探针，
[0018]Probe qPCR预混液，
[0019]单峰驼阳性标准品，
[0020]双峰驼阳性标准品。
[0021]当然，也可以单独检测单峰驼源性，为了节省成本，只需要去除双峰驼源性相关的试剂即可(SEQ ID No.4所示的双峰驼探针和双峰驼阳性标准品)因此，作为本专利技术的另一目的，还提供了一种乳粉中单峰驼源性以及质控同管检测的试剂盒，该试剂盒中含有：
[0022]SEQ ID No.1所示的正向引物，
[0023]SEQ ID No.2所示的反向引物，
[0024]SEQ ID No.3所示的单峰驼探针，
[0025]SEQ ID No.5所示的质控探针，
[0026]Probe qPCR预混液，
[0027]单峰驼阳性标准品。
[0028]当然，也可以单独检测双峰驼源性，为了节省成本，只需要去除单峰驼源性相关的试剂即可(SEQ ID No.3所示的单峰驼探针和单峰驼阳性标准品)因此，作为本专利技术的另一目的，还提供了一种乳粉中双峰驼源性以及质控同管检测的试剂盒，该试剂盒中含有：
[0029]SEQ ID No.1所示的正向引物，
[0030]SEQ ID No.3所示的反向引物，
[0031]SEQ ID No.4所示的双峰驼探针，
[0032]SEQ ID No.5所示的质控探针，
[0033]Probe qPCR预混液，
[0034]双峰驼阳性标准品。
[0035]乳粉中单峰驼源性和双峰驼源性以及质控同管检测的方法，步骤如下：
[0036](1)提取乳粉的DNA；
[0037](2)以步骤(1)的DNA为模板，利用SEQ ID No.1～SEQ ID No.5的引物和探针进行多重荧光定量PCR扩增，利用双峰驼和单峰驼阳性标准品做阳性对照，利用灭菌的去离子水做阴性对照，利用DNA提取的空白对照做提取方法的对照组；
[0038](3)Real
‑
time PCR反应结束后，设置Threshold为自动，读取单峰驼、双峰驼和质控相应探针的Ct值以及阳性对照、阴性对照和空白对照的Ct；只有当质控Ct≤35和阳性对照Ct≤35，阴性对照和空白对照Ct为0时才可以进行相应探针源性结果的判定；当相应探针的Ct≤35，结果判定为具有相应源性，同时有多个探针的Ct≤35，结果判定为具有相应多源性；
[0039](4)利用单峰驼和双峰驼阳性标准品做DNA定量的标准曲线；
[0040](5)利用检测乳粉的相应源性的Ct值和标准曲线中的公式可以得到乳粉中相应源性的定量检测结果。
[0041]进一步地，Real
‑
time PCR扩增参数为：预变性温度94℃，30s，变性温度94℃，5s，退火延伸温度60℃，31s，40个循环。
[0042]进一步地，Real
‑
time PCR反应体系为：Probe qPCR预混液10μL、SEQ ID No.1所示
的两源性检测正向引物1μL，浓度为10μmol/L；SEQ ID No.2所示的两源性检测反向引物1μL，浓度为10μmol/L；SEQ ID No.3所示的单峰驼探针0.5μL，浓度为10μmol/L；、SEQ ID No.4所示的双峰驼探针0.5μL，浓度为10μmol/L和SEQ ID No.5所示的质控探针0.5μL，浓度为10μmol/L；DNA模板2μL，灭菌的去离子水4.5μL，总体积20μL。
[0043]本专利技术通过比对单峰驼、双峰驼、牛、水牛、牦牛、驴、马、绵羊、山羊、猪、兔、骆驼、狗、鸡、鸭及鹅等16种动物的线粒体基因组，每种动物选取10个品种或品系的线粒体基因组序列。通过生物信息软件比对上述120条序列，筛选出单峰驼和双峰驼保守和特异的序列，利用引物设计软件进行引物和探针的设计。设计的创新性在于需要在100
‑
150bp的序列上筛选出两端保守和中间特异的序列，两端保守的位置设计引物，中间特异的位置设计探针。保守的引物和特异的探针可以有效的减少引物本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.乳粉中单峰驼和双峰驼源性以及质控同管检测的引物和探针，其特征在于，引物和探针序列如下：正向引物序列如SEQ ID No.1所示，反向引物序列如SEQ ID No.2所示，单峰驼探针序列如SEQ ID No.3所示，双峰驼探针序列如SEQ ID No.4所示，质控探针序列如SEQ ID No.5所示。2.根据权利要求1所述的乳粉中单峰驼源性和双峰驼源性以及质控同管检测的引物和探针，其特征在于，单峰驼探针、双峰驼探针和质控探针序列的5'端修饰有报告基团，3'端修饰有淬灭基团，报告基团为FAM、HEX、ROX或CY5中的任意一种，淬灭基团为TAMRA、BHQ1或BHQ2中任意一种。3.权利要求1或2中所述的引物和探针在乳粉中单峰驼和双峰驼源性检测中的应用。4.乳粉中单峰驼源性和双峰驼源性以及质控同管检测的试剂盒，其特征在于，该试剂盒中含有：SEQ ID No.1所示的正向引物，SEQ ID No.2所示的反向引物，SEQ ID No.3所示的单峰驼探针，SEQ ID No.4所示的双峰驼探针，SEQ ID No.5所示的质控探针，Probe qPCR预混液，单峰驼阳性标准品，双峰驼阳性标准品。5.乳粉中单峰驼源性以及质控同管检测的试剂盒，其特征在于，该试剂盒中含有：SEQ ID No.1所示的正向引物，SEQ ID No.2所示的反向引物，SEQ ID No.3所示的单峰驼探针，SEQ ID No.5所示的质控探针，Probe qPCR预混液，单峰驼阳性标准品。6.乳粉中双峰驼源性以及质控同管检测的试剂盒，其特征在于，该试剂盒中含有：SEQ ID No.1所示的正向引物，SEQ ID No.2所示的反向引物，SEQ ID No.4所示的双峰驼探针，SEQ ID No.5所示的质控探针，Probe qPCR预混液，双峰驼阳性标准品。7.乳粉中单峰驼源性、双峰驼源性以及质控同管检测的方法，其特征在于，步骤如下：(1)提取乳粉的DN...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭梁，李春冬，赵瑜洁，张建喆，孙建萌，刘国强，罗建兴，木其勒，特格希巴雅尔，
申请(专利权)人：锡林郭勒职业学院，
类型：发明
国别省市：
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