新冠病毒RBD特异性单克隆抗体和应用制造技术

本发明专利技术属于单克隆抗体技术领域，具体公开了新冠病毒RBD特异性单克隆抗体以及上述新冠病毒RBD特异性单克隆抗体的应用。本发明专利技术对于新型冠状病毒SARS

【技术实现步骤摘要】
新冠病毒RBD特异性单克隆抗体和应用


[0001]本专利技术属于单克隆抗体
，尤其涉及新冠病毒RBD特异性单克隆抗体和应用。

技术介绍

[0002]抗体是由四条多肽链组成的免疫球蛋白分子，四条多肽链包括两条重链(H链)和两条轻链(L 链)。H链由重链可变区(VH)和重链恒定区组成，重链恒定区由三个区CH1、CH2和CH3组成。L 链由L链可变区(VL)和轻链恒定区组成，轻链恒定区由CL区组成。VH和VL可进一步分成称为互补决定区(CDRs)的高变区和称为构架区(FR)交替分布的保守区。
[0003]目前研究发现：新冠病毒(SARS
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CoV
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2)具有四种主要的结构蛋白，分别为刺突蛋白(S蛋白)、核衣壳蛋白(N蛋白)、膜蛋白(M蛋白)和包膜蛋白(E蛋白)，其中S蛋白有两个亚基：S1和 S2，受体结合位点(RBD)位于S1亚基上，其主要功能是识别宿主细胞表面受体，介导与宿主细胞的融合。
[0004]近期治愈出院的患者血浆中含有高浓度特异性的抗原中和抗体，输入患者体内后，可以中和新冠病原体，介导有效的免疫反应，因此利用恢复期血浆有望为救治感染新冠病毒的患者提供有效的治疗手段，降低死亡率，保障患者生命安全。
[0005]申请公开号为CN111303280A的中国专利技术专利申请公开了一种高中和活性抗SARS
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CoV
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2全人源单克隆抗体，上述专利提供的是识别区域为S1非RBD区的全人源单克隆抗体，但是由于新冠病毒入侵宿主细胞是通过RBD与宿主细胞的ACE2结合，所以上述专利获得的全人源单克隆抗体对病毒的阻断效果有限，并且上述专利是通过标记浆细胞而获得抗体cDNA，但是与浆细胞相比，是记忆 B细胞活化后迅速做出反应，所以记忆B细胞能够引发比初次反应更快，也更强烈的体液免疫反应，而浆细胞所引发的体液免疫反应有限。

技术实现思路

[0006]为了达到上述目的，本专利技术提供了新冠病毒RBD特异性单克隆抗体，具体的，抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示；轻链氨基酸序列可如SEQ ID NO:22所示(单抗11
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CQTS076)。重链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:23所示；轻链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:24所示(单抗 12
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CQTS077)。重链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:25所示；轻链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:26 所示(单抗13
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CQTS078)。重链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:27所示；轻链氨基酸序列还可如SEQID NO:28所示(单抗14
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CQTS079)。重链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:29所示；轻链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:30所示(单抗15
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CQTS080)。重链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:31所示；轻链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:32所示(单抗16
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CQTS081)。重链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:33 所示；轻链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:34所示(单抗17
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CQTS082)。重链氨基酸序列还可如SEQID NO:35所示；轻链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:36所示(单抗18
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CQTS083)。重链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:37所示；轻链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:38所示(单抗19
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CQTS086)。重链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:39所示；
轻链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:40所示(单抗 20
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CQTS090)。
[0007]本专利技术还提供了上述新冠病毒RBD特异性单克隆抗体，在制备检测或诊断SARS
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CoV
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2试剂或疫苗或药物中的应用，其中药物包括权利要求1
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10任一权利要求所述的新冠病毒RBD特异性单克隆抗体和药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体；还提供了编码上述新冠病毒RBD特异性单克隆抗体的核酸分子；还提供了含有上述核酸分子的表达盒、重组载体、重组菌或转基因细胞系；还提供了上述表达盒、重组载体、重组菌或转基因细胞系在制备产品中的应用。
[0008]本专利技术还提供了产品，包括上述新冠病毒RBD特异性单克隆抗体；产品用途如下(b1)
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(b4) 中的任一种：(b1)结合新型冠状病毒SARS
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CoV
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2；(b2)检测结合新型冠状病毒SARS
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CoV
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2； (b3)结合新型冠状病毒SARS
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CoV
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2的S蛋白；(b4)检测新型冠状病毒SARS
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CoV
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2的S蛋白。
[0009]优选的，上述新冠病毒RBD特异性单克隆抗体均通过分选RBD特异性记忆B细胞，再通过RBD 特异性记忆B细胞的mRNA获得抗体可变区cDNA。
[0010]本专利技术的原理和有益效果在于：
[0011](1)本专利技术提供的单克隆抗体具有RBD特异性，与针对S1非RBD区的单可隆抗体相比，本专利技术提供的单克隆抗体与RBD结合，为抗体药物筛选，诊断、预防和治疗新冠肺炎提供了更加广泛的应用价值。
[0012](2)本专利技术提供的单克隆抗体是通过分选RBD特异性记忆B细胞而得到，与通过分选浆细胞的现有技术相比，本专利技术制备的单克隆抗体能够引发更强烈的体液免疫反应。另外，本专利技术只针对 RBD特异性记忆B细胞进行后续RT
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PCR、巢式PCR和抗体功能分析，大大提高了单克隆抗体与RBD 特异性结合能力。
附图说明
[0013]图1为采用流式细胞仪分析记忆B细胞的细胞分选图；
[0014]图2为采用流式细胞仪分析RBD特异性记忆B细胞的细胞分选图；
[0015]图3为单细胞抗体基因PCR产物凝胶电泳图；
[0016]图4为PCR扩增包含CMV启动子、WPRE
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γ或WPRE
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κ元件抗体基因表达盒后的琼脂糖凝胶电泳图；
[0017]图5为RBD特异性的实验结果图。
具体实施方式
[0018]下面将结合本专利技术实施例的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0019]实施例1
[0020]本实施例提供一种新冠病毒RBD特异性单克隆抗体，重链氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示；轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示。
[002本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.根据权利要求1所述的新冠病毒RBD特异性单克隆抗体，其特征在于，重链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:21所示；轻链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:22所示。2.根据权利要求1所述的新冠病毒RBD特异性单克隆抗体，其特征在于，重链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:23所示；轻链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:24所示。3.根据权利要求1所述的新冠病毒RBD特异性单克隆抗体，其特征在于，重链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:25所示；轻链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:26所示。4.根据权利要求1所述的新冠病毒RBD特异性单克隆抗体，其特征在于，重链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:27所示；轻链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:28所示。5.根据权利要求1所述的新冠病毒RBD特异性单克隆抗体，其特征在于，重链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:29所示；轻链氨基酸序列还可如SEQ ID NO:30所示。6.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：李婷婷，韩晓建，王应明，王建为，罗飞扬，龙颖宜，宋术义，金艾顺，
申请(专利权)人：冯玉林，
类型：发明
国别省市：