检测抗HSP90-beta-IgG自身抗体的试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及检测抗HSP 90

【技术实现步骤摘要】
检测抗HSP 90
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beta
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IgG自身抗体的试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，特别是涉及检测抗HSP 90
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beta
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IgG自身抗体的试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]血液、血管和心脏组成了人体的血液循环系统，血液循环系统中的血液在血管中流动，流经心脏、肺、肝等全身脏器，血管的最里层附着着血管内皮细胞。血管内皮细胞是介于血流和血管壁组织之间的一层单核细胞，可通过自分泌、内分泌、旁分泌三种途径分泌一系列NO、PGI2、ET
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1等血管活性物质发挥调节血管紧张性、抗血栓形成、抑制平滑肌细胞增殖及血管壁炎症反应等功能。NO是内皮细胞产生最重要的舒血管因子，由内皮细胞的NO合酶(eNOs)作用于L
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精氨酸产生，NO可扩散至血管壁平滑肌细胞激活鸟氨酸环化酶，介导cGMP调控的血管舒张。不仅如此，NO还具有抑制血小板聚集、抑制单核细胞粘附于内皮细胞、抑制平滑肌细胞增殖等作用。然而血管内皮在受到一系列有害因素作用时，内皮细胞释放的舒血管因子减少，缩血管因子增多，打破血管平衡稳态，最终导致一系列心血管事件的发生。血管内皮细胞自身抗体会造成血管内皮细胞损伤，诱发血液循环系统功能障碍，从而导致心脏、肺、肝等脏器的损伤，引发各个脏器相关的疾病，包括肾病综合征。
[0003]微小病变病(MCD)是儿童肾病综合征的主要原因，占成人肾病综合征的10
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15％。微小病变病患者肾小球在光学显微镜下看起来基本正常，在电子显微镜下可见的唯一组织病理学异常是弥漫性足细胞足突融合消失。因此，MCD被认为是一种原发性足细胞疾病。皮质类固醇治疗后蛋白尿完全缓解是MCD的标志，一般而言进行性肾功能衰竭很少见。然而，MCD会导致严重的并发症。在成人中观察到的与疾病相关的并发症主要包括静脉血栓形成和需要临时透析的严重急性肾损伤。此外，由于MCD的特点是慢性、复发性病程，因此通常需要延长免疫抑制治疗以维持蛋白尿缓解。然而，长期免疫抑制治疗会增加严重感染的风险，并带来恶性肿瘤的长期风险。
[0004]目前，我们对MCD的潜在发病机制仍然知之甚少。其中一个观点认为是由免疫细胞产生的循环通透性因子引发了该病。由于原发性局灶节段性肾小球硬化(FSGS)的发病机制与MCD非常相似，因此许多学者认为MCD和FSGS是同一个疾病在不同阶段的表型。基于MCD与非霍奇金淋巴瘤之间的关联、麻疹感染诱导的缓解以及环磷酰胺治疗后的延长缓解，T细胞最早被怀疑是循环通透性因子的来源。然而，近些年利妥昔单抗和其他特异性B细胞消除药物的治疗效果对T细胞来源提出了挑战。值得注意的是，皮质类固醇和利妥昔单抗对足细胞的直接作用也被认为具有治疗效果。我们团队在MCD和FSGS肾病综合征患者体内筛选和鉴定到了许多足细胞自身抗体，从而提供了足细胞损伤、自身免疫和蛋白尿对抗B细胞治疗的反应之间的潜在联系，并据此在国际上首次提出了“自身免疫性足细胞病”(Autoimmune podocytopathies)的概念，并逐步得到了国内外同行的认可。最近，哈佛医学院团队Watts等人发现，儿童及成人微小病变肾病综合征患者血清中还存在抗Nephrin自身抗体，这为我们的创新理论提供了有力佐证。
[0005]尽管观察到的足细胞损伤是MCD的主要经典特征，但疾病机制可能还涉及肾小球血管内皮细胞。早在2000年Futrakul N等报道特发性肾病综合征(INS)病人常伴有肾脏灌流不足。他们使用人内皮细胞株ECV 304，与INS病人血清共孵育，进行内皮细胞毒性试验，结果发现，FSGS病人血清造成的内皮细胞损伤最明显。因此，他们推测肾小球血管内皮细胞损伤可能是造成INS病人肾脏灌流不足的原因。Purohit S等人发现在MCD病人循环系统中有内皮细胞损伤标志物syndecan 1升高，但是不清楚是否同时存在肾小球内皮细胞的损伤。Trachtman H等人在FSGS和MCD病人的肾组织中观察到了IgM与补体成分共沉积，且证实IgM是针对GEC和心磷脂表位的抗体。2022年Bauer C等人发现，MCD病人血清中内皮细胞标志物有升高，同时肾组织病理证实肾小球内皮细胞caveolin
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1表达明显上升，进一步将病人血清与体外培养的人肾小球内皮细胞共孵育会显著增加肾小球血管内皮细胞损伤的标志物thrombomodulin的表达，由此证明MCD病人存在肾小球血管内皮细胞的损伤。
[0006]尽管如此，至今大家并不清楚造成肾小球内皮细胞损伤的致病因子到底是什么。我们的研究团队通过前期的研究在MCD和FSGS肾病综合征患者体内筛选和鉴定到了一系列的肾小球血管内皮细胞自身抗体。动物实验证实这些肾小球血管内皮细胞自身抗体会引起小鼠肾小球血管内皮细胞严重损伤。体外细胞培养实验也表明这些自身抗体会影响血管内皮细胞的形态和功能。临床研究更是表明这些肾小球血管内皮细胞自身抗体与患者的高凝状态以及不良预后有关。此外，我们的研究结果还提示肾小球血管内皮细胞自身抗体引起的肾小球血管内皮细胞损伤可能是MCD中的特征性足细胞损伤的始动因素，是该病的重要病因之一。由此，我们在国际上首次提出了MCD和FSGS肾病综合征发病的二次打击理论：即，包括自身抗体在内的致病因子首先损伤肾小球血管内皮细胞，之后这些致病因子进一步损伤足细胞，最终引起患者发病。因为从足细胞特殊的解剖位置来看，血液循环系统中的致病因子不可能与之接触，除非肾小球血管内皮细胞的完整性已经受到了损伤。由此可见，我们关于肾小球血管内皮细胞自身抗体的研究成果是一次在肾病综合征发病机制的理论研究方面的突破。同时这些自身抗体还具有重要的临床价值和商业价值，对指导肾病综合征的诊疗有很高的价值。
[0007]抗Heat shock protein 90
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beta抗体(即抗HSP 90
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beta抗体)是其中一种重要的肾小球血管内皮细胞自身抗体，与MCD和FSGS肾病综合征的发生发展密切相关，且能指导临床的诊疗。Heat shock protein 90
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beta被研究发现在肿瘤发生和恶性进展过程中是必不可少的。不同于Heat shock protein 90
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beta抗原在肿瘤疾病中的研究与应用，我们的研究在于抗Heat shock protein 90
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beta抗体在血管内皮细胞损伤包括肾病综合征患者肾小球血管内皮细胞损伤中的研究。然而，由于该研究内容新颖前沿，目前市场上缺乏相应的临床检测试剂盒。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于提供检测抗Heat shock protein 90
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beta
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IgG自身抗体的试剂在制备检测血管内皮损伤的试剂盒中的应用，可通过免疫反应对来自血液、组织或体液中的自身抗体抗Heat shock protein90
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beta...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测抗Heat shock protein 90
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beta
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IgG自身抗体的试剂在制备检测血管内皮损伤的试剂盒中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测抗Heat shock protein 90
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beta
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IgG自身抗体的试剂包括Heat shock protein 90
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beta蛋白或含标签的Heat shock protein 90
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beta重组蛋白或多肽；所述Heat shock protein 90
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beta蛋白的NCBI蛋白登录号为BC014485。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述标签修饰于所述Heat shock protein 90
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beta重组蛋白的N
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末端或C
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末端，所述标签选自His标签、硫氧还蛋白、...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶青，毛建华，周希，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：