一种千金藤素的提取制备方法技术

本发明专利技术提供一种采用山乌龟提取制备千金藤素的方法，包括原料提取、萃取、硅胶柱层析、重结晶四个步骤，工艺步骤少，生产周期较短，操作简单，成本低，易于放大生产。易于放大生产。

【技术实现步骤摘要】
一种千金藤素的提取制备方法


[0001]本专利技术涉及一种天然产物的提取方法，具体涉及一种从山乌龟中提取制备千金藤素的方法，属于天然产物提取领域。

技术介绍

[0002]山乌龟为防己科千金藤属StephaniaLour植物的块根，此块根硕大露于地面，故名山乌龟，主产于长江流域及以南各地，为民间常用药。其中一种山乌龟((Stephaniaepigaea)主用于提升白细胞、清热解毒、消炎止痛、毒蛇咬伤、无名肿毒等作用。其主要药用成分千金藤素(Cepharanthine)含量较高，用于肿瘤病人放射治疗或因苯等有机溶剂引起的白细胞减少，已取得良好效果。CN113046327A公开千金藤素在抗新冠病毒SARS COV 2方面表现出异常强的活性，因此具有广阔的应用前景。
[0003]千金藤素的分子结构式如下：
[0004][0005]为更好地开发、利用山乌龟的药用价值，提高千金藤素的产量，降低千金藤素的生产成本，还需要深入研究千金藤素的提取制备技术。专利技术人长期研究千金藤素提取制备方法，在大量的试验研究中发现了千金藤素一种简便高效的提取制备方法，从而完成了本专利技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种采用山乌龟提取千金藤素的方法，通过酸化的乙醇
‑
水溶液提取
‑
萃取
‑
硅胶柱层析
‑
重结晶的简单工艺制备得到克级至公斤级的千金藤素。
[0007]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：/>[0008]提供一种采用山乌龟提取制备千金藤素的方法，包括如下步骤：
[0009](1)原料提取：将山乌龟药材粉碎，加入10
‑
40％酸性乙醇
‑
水溶液回流提取2
‑
3次，过滤并合并滤液，减压蒸馏除去乙醇后，采用大孔树脂富集，用醇溶液进行洗脱，收集醇洗液并浓缩得到原料提取液；
[0010](2)萃取：取原料提取液，加水稀释后量取等体积乙酸乙酯萃取1
‑
3次，弃乙酸乙酯层，水层用氢氧化钠调节pH至8
‑
9，再加入等体积乙酸乙酯萃取2
‑
3次，合并乙酸乙酯层并浓缩备用；
[0011](3)硅胶柱层析：取浓缩后的乙酸乙酯萃取液，加入硅胶均匀拌样、烘干后，将样品加入硅胶柱层析中，用石油醚
‑
乙酸乙酯
‑
氨水体系梯度洗脱，通过薄层色谱进行监控，收集
千金藤素流份，浓缩得到千金藤素粗品；
[0012](4)重结晶：将层析得到的千金藤素粗品，分别加入乙醇加热溶解，放置结晶，得到的晶体重复本步骤操作2
‑
3次得结晶的千金藤素。
[0013]在一实施方案中，步骤(1)中，回流提取时10
‑
40％酸性乙醇
‑
水溶液中所采用的酸的质量浓度为0.5％，10
‑
40％酸性乙醇
‑
水溶液的加入量为山乌龟药材质量的6
‑
8倍。
[0014]在一实施方案中，步骤(1)中，所述10
‑
40％酸性乙醇
‑
水溶液为盐酸或硫酸。
[0015]在一实施方案中，步骤(1)中，所述大孔树脂为D101或AB
‑
8。
[0016]在一实施方案中，步骤(1)中，所述醇溶液为60％
‑
90％甲醇或乙醇。
[0017]在一实施方案中，步骤(3)中，所述硅胶柱层析装柱料为100
‑
200目硅胶。
[0018]在一实施方案中，步骤(3)中，拌样硅胶与装柱硅胶比例为1:3或1:5。
[0019]在一实施方案中，步骤(3)中，所述氨水为0.1
‑
0.2％氨水，由0.1
‑
0.2体积份25％浓氨水与100体积份水配制而成；所述薄层色谱的薄层展开剂为6.8:3.2:1的正己烷/乙酸乙酯/甲醇，所述薄层色谱的显色剂为改良碘化铋钾。
[0020]本专利技术千金藤素含量的HPLC检测方法如下：
[0021]一、色谱条件：
[0022]1.色谱柱：Kromasil 4.6
×
250mm 5μm；
[0023]2.流动相：A：乙腈，B：pH＝8的三乙胺
‑
水溶液，70％A、30％B等度洗脱；
[0024]3.流速：1.0ml/min；
[0025]4.检测波长：283nm；
[0026]5.进样量：10μl；
[0027]6.柱温：30℃。
[0028]二、样品配制：
[0029]1.对照品配制：精密称取千金藤素对照品5mg于100ml容量瓶中，加入50ml甲醇，超声溶解，超声10min，再加入45ml甲醇超声20min，冷却后加甲醇定容至100ml。
[0030]2.供试品配制：精密称取供试品适量(依含量而定称样量)于100ml容量瓶中，加入50ml甲醇，超声溶解，超声10min，再加入45ml甲醇超声20min，冷却后加甲醇定容至100ml。
[0031]三、样品测定
[0032]测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各约10ml，弃去初滤液，注入液相色谱仪，20μl定量环定量，测定，外标法计算千金藤素的含量。
[0033]四、含量计算：
[0034][0035]其中：M
标样
—为千金藤素标准品重量，
[0036]C
标样
—为千金藤素标准品含量，
[0037]A
样品
—为样品峰面积，
[0038]A
标样
—为千金藤素标准品峰面积，
[0039]M
样品
—为样品重量。
[0040]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0041]1、本专利技术通过酸化的乙醇
‑
水溶液提取
‑
萃取
‑
硅胶柱层析
‑
重结晶的简单工艺制备得到克级至公斤级的千金藤素，为千金藤素的抗新冠病毒研究提供了物质基础；
[0042]2、本专利技术利用千金藤素易溶于10
‑
40％酸性乙醇
‑
水溶液的特点，采用10
‑
40％酸性乙醇
‑
水溶液对药材进行提取，减少了脂溶性杂质的提取率，有利于进一步的纯化，并且避免了有机试剂的使用，对环境友好；
[0043]3、本专利技术采用10
‑
40％酸性乙醇
‑
水溶液提取除杂，碱性水溶液富集千金藤素工艺进一步除掉非生物碱类杂质，且萃取溶剂可以反复回收利用，节约了成本；
[0044]4、本专利技术硅胶柱层析中在石油醚
‑
乙酸乙酯体系中加入0.1
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种采用山乌龟提取制备千金藤素的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)原料提取：将山乌龟药材粉碎，加入10
‑
40％酸性乙醇
‑
水溶液回流提取2
‑
3次，过滤并合并滤液，减压蒸馏除去乙醇后，采用大孔树脂富集，用醇溶液进行洗脱，收集醇洗液并浓缩得到原料提取液；(2)萃取：取原料提取液，加水稀释后量取等体积乙酸乙酯萃取1
‑
3次，弃乙酸乙酯层，水层用氢氧化钠调节pH至8
‑
9，再加入等体积乙酸乙酯萃取2
‑
3次，合并乙酸乙酯层并浓缩备用；(3)硅胶柱层析：取浓缩后的乙酸乙酯萃取液，加入硅胶均匀拌样、烘干后，将样品加入硅胶柱层析中，用石油醚
‑
乙酸乙酯
‑
氨水体系梯度洗脱，通过薄层色谱进行监控，收集千金藤素流份，浓缩得到千金藤素粗品；(4)重结晶：将层析得到的千金藤素粗品，分别加入乙醇加热溶解，放置结晶，得到的晶体重复本步骤操作2
‑
3次得结晶的千金藤素。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，回流提取时10
‑
40％酸性乙醇
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：付书清，张林，罗宗昂，徐敏，彭松，
申请(专利权)人：四川健腾药业有限公司，
类型：发明
国别省市：