用于病毒清除的疏水相互作用色谱制造技术

本申请提供了一种用于表征和/或确定疏水相互作用色谱(HIC)的病毒清除能力的方法，其包括HIC的病毒清除的多变量分析的实验设计。所述方法通过运行D

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于病毒清除的疏水相互作用色谱


[0001]本专利技术总体上涉及表征疏水相互作用色谱的病毒清除能力的方法，包括多变量分析的实验设计。

技术介绍

[0002]生物制品可能被不想要的病毒污染，导致传播病毒疾病的风险。全球卫生当局要求对制造生物制剂或生物技术产品的病毒清除进行评价，因为病毒载量可以在哺乳动物细胞培养物生长期间倍增。有效的病毒清除研究是过程验证的基本部分，这对于确保药物安全性至关重要。病毒污染会影响原料、细胞培养过程、生物反应器和下游纯化过程。
[0003]病毒验证研究旨在提供所选操作条件将有效灭活和/或清除病毒的证据。病毒清除研究的实验设计包括制造过程的表征，以确保其去除病毒的能力，并提高对处理条件的理解。在评价病毒污染物的清除时，选择最坏情况条件进行评价是合理的。
[0004]病毒灭活或去除的过程包括pH处理、热处理、过滤或色谱。色谱步骤可以用于纯化具有为病毒清除提供病毒减少的潜力的生物制品，如蛋白A、阴离子交换色谱或疏水相互作用色谱(HIC)。当色谱步骤用于捕获单克隆抗体时，病毒可能与抗体和/或色谱树脂相互作用。对于使用HIC进行的抗体纯化，对与HIC的流通模式相关的病毒清除的理解有限，例如，当抗体出现在流通中时，不需要的组分的选择性结合。
[0005]将认识到，需要有效表征制造过程的病毒清除能力以确保药物安全的方法，包括建立解释机制并证明选择最坏情况条件的合理性的回顾性病毒清除数据库，如提高对HIC的病毒清除能力的理解。

技术实现思路

[0006]本公开提供了确定动态因子对HIC的病毒清除能力的影响的方法，包括HIC的病毒清除的多变量分析的实验设计。本公开还提供了对病毒清除机制的理解和对病毒清除的最坏情况处理条件的理解以增强药物安全性。另外，本公开提供了建立解释机制并证明选择最坏情况条件的合理性的回顾性病毒清除HIC数据库的方法。为了利用HIC清除病毒，本公开提供与指示逆转录病毒的清除相关的HIC的表征以获得对该过程的理解。
[0007]本公开还提供了一种从包含一种或多种包括病毒颗粒的杂质的样本中纯化抗体的方法，其包含以下步骤：(a)提供包含宿主细胞中产生的抗体的样本、(b)将样本的pH调节到约4.2至约8.0的范围、(c)将样本加载到疏水相互作用色谱(HIC)柱，其中样本的浓度为约40g/L至约200g/L和(d)收集HIC处理的样本。
[0008]在一些示范性实施例中，柠檬酸盐缓冲液用于调节该方法的样本的pH，其中柠檬酸盐缓冲液的浓度为约10mM至约200mM。在一些方面，该方法的HIC柱的树脂是苯基或capto苯基树脂。在一些方面，该方法的HIC柱的疏水强度在弱疏水强度到强疏水强度的范围内，其中该弱疏水强度使用苯基树脂或其等同物实现，其中该强疏水强度使用capto苯基树脂或其等同物实现。
[0009]在一些方面，该方法的抗体是单克隆抗体或双特异性抗体，其中该抗体具有IgG1同种型或IgG4同种型。在一些方面，通过该方法的HIC柱的流速具有约100cm/小时至约300cm/小时的线速度。
[0010]在一些方面，本申请的方法进一步包含测量病毒基因组拷贝的存在和/或测量病毒颗粒的存在。在一些方面，本申请的方法进一步包含测量病毒基因组拷贝和病毒颗粒两者的存在。
[0011]本公开至少部分地提供了一种从包含一种或多种包括病毒颗粒的杂质的样本中纯化抗体的方法，其包含以下步骤：(a)提供包含宿主细胞中产生的抗体的样本、(b)将样本的pH调节到约4.2至约8.0的范围、(c)将样本加载到疏水相互作用色谱(HIC)柱，其中样本的浓度为约40g/L至约200g/L，(d)收集HIC处理的样本，和(e)测量步骤(d)的HIC处理的样本中病毒基因组拷贝和/或感染性病毒颗粒的存在。
[0012]在一些示范性实施例中，本申请的方法进一步包含通过运行D
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最优实验设计来优化病毒基因组拷贝和/或病毒颗粒的去除。在某些方面，本申请的实验的D
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最优设计评价以下因子：(a)约4.2至约8.0的样本的pH、(b)柱加载量，其中该样本的浓度为约40g/L至约200g/L、(c)约100cm/小时至约300cm/小时的通过HIC柱的流速的线速度和(d)从弱疏水强度到强疏水强度的HIC柱的疏水强度；其中该弱疏水强度使用苯基树脂或其等价物实现，其中该强疏水强度使用capto苯基树脂或其等价物实现。在一些方面，本申请的D
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最优实验设计进一步评价抗体的同种型，其中该抗体是单克隆抗体或双特异性抗体。
[0013]本公开至少部分地提供了一种从包含一种或多种包括病毒颗粒的杂质的样本中纯化抗体的方法，其包含以下步骤：(a)提供包含宿主细胞中产生的抗体的样本、(b)向样本中添加柠檬酸盐缓冲液、(c)将样本的pH调节到约4.2至约8.0的范围、(d)将样本加载到疏水相互作用色谱(HIC)柱，其中该样本的浓度为约40g/L至约200g/L、(e)收集HIC处理的样本和(f)测量步骤(e)的HIC处理的样本中病毒基因组拷贝和/或病毒颗粒的存在。
[0014]在一些示范性实施例中，本申请的方法进一步包含通过运行D
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最优实验设计来优化病毒基因组拷贝和/或病毒颗粒的去除，其中该D
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最优实验设计评价以下因子：(a)约4.2至约8.0的样本的pH、(b)约10mM至约200mM的柠檬酸盐缓冲液的浓度、(c)柱加载量，其中该样本的浓度为约40g/L至约200g/L、(d)约100cm/小时至约300cm/小时的通过HIC柱的流速的线速度和和(e)从弱疏水强度到强疏水强度的HIC柱的疏水强度，其中该弱疏水强度使用苯基树脂或其等价物实现，其中该强疏水强度使用capto苯基树脂或其等价物实现。在一些方面，该方法的抗体是单克隆抗体或双特异性抗体。
[0015]当结合以下描述和附图考虑时，将更好地认识并理解本专利技术的这些和其它方面。以下描述虽然指示了各种实施例及其许多具体细节，但以说明而非限制的方式给出。在本专利技术的范围内可以进行许多替换、修改、添加或重新排列。
附图说明
[0016]图1示出了根据示范性实施例的使用病毒测定进行病毒清除定量的示范性过程的概述。
[0017]图2示出了根据示范性实施例的病毒清除定量的总对数减小因子(LRF)的计算。
[0018]图3示出了根据示范性实施例的用于阐明主效应、相互作用和二次方以评价包括
pH、柠檬酸盐、柱加载量、线速度或HIC树脂在内的大范围的动态因子的D
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最优设计的散点图矩阵。
[0019]图4示出了根据示范性实施例的原种病毒对照、HIC加载物保持对照和HIC产物池的病毒定量。
[0020]图5示出了根据示范性实施例的基于实际报告的LRF和预测的报告的LRF生成的预测图以评价X
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MuLV的病毒清除。
[0021]图6示出了根据示范性实施例的通过将报道的清除模型应用于回本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种从包含一种或多种包括病毒颗粒的杂质的样本中纯化抗体的方法，所述方法包含以下步骤：提供包含在宿主细胞中产生的所述抗体的所述样本，将所述样本的pH调节到约4.2至约8.0的范围，将所述样本加载到疏水相互作用色谱(HIC)柱，其中所述样本的浓度为约40g/L至约200g/L，以及收集HIC处理的样本。2.根据权利要求1所述的方法，其中柠檬酸盐缓冲液用于调节所述样本的pH，其中所述柠檬酸盐缓冲液的浓度为约10mM至约200mM。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述HIC柱的树脂是苯基树脂。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述HIC柱的树脂是capto苯基树脂。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述HIC柱的疏水强度在从弱疏水强度到强疏水强度的范围内。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述弱疏水强度使用苯基树脂或其等同物实现。7.根据权利要求5所述的方法，其中所述强疏水强度使用capto苯基树脂或其等同物实现。8.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗体是单克隆抗体或双特异性抗体。9.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗体具有IgG1同种型或IgG4同种型。10.根据权利要求1所述的方法，其中通过所述HIC柱的流速具有约100cm/小时至约300cm/小时的线速度。11.根据权利要求1所述的方法，其进一步包含测量病毒基因组拷贝的存在。12.根据权利要求1所述的方法，其进一步包含测量病毒颗粒的存在。13.根据权利要求1所述的方法，其进一步包含测量病毒基因组拷贝和病毒颗粒的所述存在。14.一种从包含一种或多种包括病毒颗粒的杂质的样本中纯化抗体的方法，所述方法包含以下步骤：提供包含在宿主细胞中产生的所述抗体的所述样本，将所述样本的pH调节到约4.2至约8.0的范围，将所述样本加载到疏水相互作用色谱(HIC)柱，其中所述样本的浓度为约40g/L至约200g/L，收集HIC处理的样本，以及测量收集的HIC处理的样本中病毒基因组拷贝和/或病毒颗粒的存在。15.根据权利要求14所述的方法，其进一步包含通过运行D
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最优实验设计来优化病毒基因组拷贝和/或病毒颗粒的去除。16.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：