TEIPP肽变体及其用途制造技术

提供了可用作例如预防或治疗与受损的HLA I类抗原呈递相关的癌症或病毒感染的药物的新型核酸序列、载体、细胞、结合剂、肽和药物组合物。还提供了相应的方法和用途。物。还提供了相应的方法和用途。物。还提供了相应的方法和用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】TEIPP肽变体及其用途


[0001]本文提供了可用作例如预防或治疗与HLA I类抗原呈递受损相关的癌症或病毒感染的药物的新型肽、核酸序列、载体、修饰的细胞、结合剂和药物组合物。本文还提供了相应的方法和用途。

技术介绍

[0002]T细胞靶向免疫疗法的成功依赖于肿瘤抗原在癌细胞细胞表面的呈递。然而，癌细胞经常下调抗原加工机制的组分，以防止HLA I类分子呈递肿瘤相关和肿瘤特异性抗原1‑3。这一细胞内过程的关键步骤是通过专用泵TAP将所释放的肽转运到ER膜上，该泵充当瓶颈并为所有HLA I类分子提供肽2‑4。TAP特异性加工缺陷使肿瘤能够逃避CD8 T细胞免疫，并且经常在人类癌症中观察到。
[0003]尽管由于数百项试验完全缺乏客观的临床反应，人们对癌症疫苗的兴趣很久以前被削弱，但它们最近重新受到关注，因为新平台证明了诱导广泛CD4和CD8抗肿瘤T细胞免疫、增加人类癌症的免疫浸润和根除恶变前病变的功效8‑
10
。此外，疫苗疗法似乎与免疫检查点阻断联合得很好，因为复发疫苗接种患者对PD
‑
1疗法的反应非常好，而重要的是，在标准化的PD
‑
1治疗方案中添加长肽疫苗改善了总体反应率和中位总生存期(OS)
11,12
。
[0004]所有以T细胞为导向的疫苗接种平台都依赖于将肿瘤抗原递送至宿主，以及抗原呈递细胞在HLA I类和II类分子中交叉呈递这些肿瘤抗原而用于随后的T细胞活化的卓越能力。许多参数对于成功开发治疗性癌症疫苗很重要，包括递送系统、给予途径和佐剂，这些被认为会激活先天免疫系统并诱导T细胞共刺激分子。
[0005]需要用于预防和/或治疗癌症的新型药物组合物。

技术实现思路

[0006]专利技术人之前已经开发了一种合成长肽(SLP)疫苗接种平台，并已证明具有10
‑
35个氨基酸(优选20
‑
35个氨基酸)的肽具有触发CD4和CD8T细胞反应并导致根除癌前病变的能力
9,13,14
，以及在化疗期间接种疫苗时改善癌症患者的总生存期(Melief et al，2019)。宿主树突细胞对此类肽的交叉呈递涉及多个连续步骤，包括通过内吞作用摄取、通过蛋白酶体(主要蛋白水解酶)将SLP胞质裂解为短肽、通过TAP在ER膜上转运并加载到MHC
‑
I上分子
15
。
[0007]肿瘤抗原的新亚群(TEIPP；与受损肽处理相关的肿瘤表位)由具有下调TAP表达的癌症选择性呈递5‑7。一种这样的TEIPP抗原(FLGPWPAAS；SEQ ID NO:2)来源于普遍表达的LRPAP1蛋白的信号肽，并呈递于多种HLA
‑
A*0201阳性TAP缺陷型癌症，包括肾细胞癌、淋巴瘤、黑色素瘤、和结肠癌。其是迄今为止鉴定出的最具免疫原性和突出的人类TEIPP抗原。
[0008]FLGPWPAAS存在于LRPAP1的信号肽(也称为“前导序列”)中，其功能是将蛋白质翻译产物系泊于ER膜中的sec61易位通道
22
。这些信号肽通常被蛋白酶信号肽酶(SPase)从新生蛋白上切割下来，从而产生小蛋白质跨膜残留物。这些信号肽残端通过在脂质双层内切
割的蛋白酶信号肽肽酶(SPPase)从ER膜释放出来
19
。因此，一部分信号肽以不依赖TAP的方式进入ER，这就是信号肽在TAP缺陷细胞的HLA I类结合库中过多的原因
23
‑
25
。虽然没有正式证明，但LRPAP
21
‑
30
肽的释放很可能不是由蛋白酶体介导，蛋白酶体参与了大多数HLA I类呈递肽的蛋白水解切割4。
[0009]尽管TAP缺陷细胞的HLA I类结合库中TEIPP抗原递呈过多，但专利技术人发现，TAP缺陷肿瘤不能引发TEIPP特异性T细胞(Doorduijn et al，2017)。
[0010]本文提供的数据表明，当用其天然侧翼序列伸长时，树突细胞不能交叉呈递长版本的HLA
‑
A*0201呈递天然LRPAP
21
‑
30
表位(FLGPWPAAS)。值得注意的是，C端锚定残基从丝氨酸(S)到缬氨酸(V)的氨基酸交换导致T细胞刺激增强。用递呈S
‑
变体或V
‑
变体的多聚体分离的LRPAP
21
‑
30
特异性CD8+T细胞可以与其他多聚体共染色到相同程度，从而识别其他肽以及TAP缺陷肿瘤细胞。当用分离的LRPAP
21
‑
30
特异性TCR转染CD8+T细胞时，获得了类似的发现。重要的是，用V
‑
变体SLP进行体外疫苗接种导致肽疫苗的交叉呈递和从正常T细胞库中分离的多克隆LRPAP1
‑
特异性CD8 T细胞培养物。从这些培养物中扩增的CD8 T细胞克隆不仅识别天然含S肽，而且显示出识别TAP缺陷型黑色素瘤细胞的高度选择性能力。
[0011]本文提供的数据表明，信号肽表位的微小改变会保留TEIPP抗原的免疫原性，并使它们成为SLP疫苗形式的合适候选者。这种疫苗可能通过激活在所有测试的健康供体中发现的LRPAP1特异性T细胞而代表免疫逃逸癌症的挽救疗法。
[0012]在本文测试的几种单一氨基酸肽变体中，发现FLGPWPAAV是最有效的。因此，本专利技术基于出乎意料的发现，即FLGPWPAAS肽序列中的单一特定氨基酸变化(变化为FLGPWPAAV；SEQ ID NO:1)导致肽对HLA
‑
A*02的更高结合亲和力和通过单核细胞衍生的树突状细胞的更有效的交叉呈递。出乎意料的是，这种特定氨基酸变化使肽可以用作更有效的肽疫苗。
[0013]因此，在一方面中，本专利技术提供了一种包含氨基酸序列FLGPWPAAV(SEQ ID NO:1)的分离肽。
[0014]合适的是，该肽可以具有不大于35个氨基酸。
[0015]合适的是，该肽可以由氨基酸序列FLGPWPAAV(SEQ ID NO:1)组成。
[0016]合适的是，该肽可以包含氨基酸序列FLGPWPAAV(SEQ ID NO:1)并且由10
‑
35个氨基酸组成。
[0017]合适的是，该肽可以与TLR配体缀合。
[0018]在另一个方面中，本专利技术提供了编码本专利技术肽的分离核酸序列。
[0019]合适的是，该核酸序列可以是mRNA或DNA。
[0020]在另一个方面中，本专利技术提供一种特异性结合包含氨基酸序列FLGPWPAAV(SEQ ID NO:1)的肽的结合剂。
[0021]合适的是，该结合剂可以是HLA
‑
A2*02分子。
[0022]在另一方面中，本专利技术提供了包含本专利技术核酸序列的载体。
[0023]合适的是，该载体可本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的肽，包含氨基酸序列FLGPWPAAV(SEQ ID NO:1)。2.根据权利要求1所述的肽，其中：a)所述肽具有不大于35个氨基酸；b)所述肽由氨基酸序列FLGPWPAAV(SEQ ID NO:1)组成；和/或c)所述肽包含氨基酸序列FLGPWPAAV(SEQ ID NO:1)，并由10
‑
35个氨基酸组成。3.根据前述权利要求中任一项所述的肽，其中，所述肽与TLR配体缀合。4.一种分离的核酸序列，编码权利要求1
‑
3中任一项所述的肽。5.一种结合剂，与包含氨基酸序列FLGPWPAAV(SEQ ID NO:1)的肽特异性结合，可选地其中所述结合剂是HLA
‑
A2*02分子。6.一种载体，包含权利要求4所述的核酸序列。7.一种修饰的细胞，所述修饰的细胞用权利要求4所述的核酸序列或权利要求6所述的载体转化、转染或转导，可选地其中所述修饰的细胞是人细胞。8.一种制备权利要求1
‑
3中任一项所述的肽的方法，包括在培养基中培养权利要求7所述的修饰的细胞，并在细胞裂解后将所述肽从所述培养基或所述修饰的细...

【专利技术属性】
技术研发人员：托尔巴尔德，
申请(专利权)人：莱顿大学医学中心附属莱顿教学医院，
类型：发明
国别省市：