一种冻干保护剂及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种冻干保护剂，用于核酸诊断试剂或/和核酸诊断原料，包括：水苏糖、棉子糖、麦芽糖醇或赤藓糖醇中的至少一种。本发明专利技术还涉及一种如前所述冻干保护剂在制备核酸诊断预混液冻干、核酸诊断原料冻干或生物活性肽冻干中的应用。本发明专利技术的冻干保护剂所采用的水苏糖、棉子糖、麦芽糖醇及赤藓糖醇，没有还原性，非常稳定，在较强的酸和碱条件下不水解，也不会和生物活性肽发生化学反应，如与氨基酸发生美拉德反应；与蔗糖、葡萄糖或某些低聚糖相比，本发明专利技术的冻干保护剂具有非常低的吸湿性，在25℃相对湿度为70％时，基本没有吸湿，易于制品的生产及长期保存；冻干制品溶解速率非常快，2～4秒内即可完全溶解。～4秒内即可完全溶解。～4秒内即可完全溶解。

【技术实现步骤摘要】
一种冻干保护剂及其应用


[0001]本专利技术涉及核酸诊断
，尤其涉及一种冻干保护剂及其应用。

技术介绍

[0002]核酸检测包括荧光PCR、恒温扩增和杂交捕获免疫荧光，而荧光PCR是核酸检测中最主要的方法，基于LAMP技术的核酸诊断都需要搭配其仪器进行检测，因此核酸诊断试剂(RT
‑
LAMP)试剂冻干是不可避免的环节。基于转录介导扩增技术的核酸诊断试剂，以RNA为模板进行扩增，利用T7 DNA聚合酶和逆转录酶对转录生成的RNA产物进行分析检测。基于RPA技术(重组酶介导的恒温扩增技术)的核酸诊断试剂有三种，第一种检测过程结合了CRISPR酶切信号放大技术，并对信号进行免疫层析检测，无需借助仪器，肉眼即可判读；第二种采用荧光法进行检测，配合恒温核酸扩增分析仪使用；第三种则包含恒温扩增技术和CRISPR技术，配合一体化核酸快速检测系统(BG
‑
Nova
‑
X8)使用，可完成磁珠提取核酸、RPA恒温扩增和CRISPR酶切放大及信号检测的过程。
[0003]RPA技术参与的酶种类最多，也最不稳定很容易失活，因此冻干成为不二之选。但核酸诊断试剂冻干，目前具有不可逾越的门槛，主要原因有以下几方面：1)底层技术薄弱；2)未正确的使用核酸诊断试剂的保护剂；3)对核酸诊断试剂冻干技术不够重视。
[0004]绝大部分核酸诊断试剂冻干使用海藻糖、甘露醇、葡聚糖及蜜里三糖作为冻干保护剂。海藻糖、甘露醇、葡聚糖及蔗糖作为非还原性糖，不与氨基酸发生反应，也有一定的保护作用。海藻糖具有高玻璃化转变温度及对生物大分子和生物体的非特异性保护作用，如DNA、蛋白、疫苗等，被用作核酸冻干保护剂首选，但是海藻糖具有吸湿性，吸潮后冻干制品活性大大降低，且溶解难度增加。甘露醇在医药上是良好的利尿剂，降低颅内压、眼内压及治疗肾药、脱水药、食糖代用品、也用作药片的赋形剂及固体、液体的稀释剂，甘露醇具有良好的抗潮性，而且冻结点温度高，非常容易成型，但是甘露醇非常容易结晶，对酶及活性肽损伤非常大和蔗糖一样，制品常温保存的温度很差，效期短。
[0005]针对上述问题，本专利旨在提供一种冻干保护剂及其应用。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供一种冻干保护剂。
[0007]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案是：
[0008]本专利技术的第一方面是提供一种冻干保护剂，用于核酸诊断试剂或/和核酸诊断原料，包括：水苏糖、棉子糖、麦芽糖醇或赤藓糖醇中的至少一种。
[0009]优选地，在核酸诊断试剂或/和核酸诊断原料中，所述水苏糖的终浓度为5wt％
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25wt％。
[0010]进一步优选的，在核酸诊断试剂或/和核酸诊断原料中，所述水苏糖的终浓度为7wt％
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20wt％。
[0011]优选地，在核酸诊断试剂或/和核酸诊断原料中，所述棉子糖的终浓度为5wt％
‑
25wt％。
[0012]进一步优选地，在核酸诊断试剂或/和核酸诊断原料中，所述棉子糖的终浓度为5wt％
‑
20wt％。
[0013]优选地，在核酸诊断试剂或/和核酸诊断原料中，所述麦芽糖醇的终浓度为7wt％
‑
25wt％。
[0014]进一步优选地，在核酸诊断试剂或/和核酸诊断原料中，所述麦芽糖醇的终浓度为7wt％
‑
20wt％。
[0015]优选地，在核酸诊断试剂或/和核酸诊断原料中，所述赤藓糖醇的终浓度为5wt％
‑
25wt％。
[0016]进一步优选地，在核酸诊断试剂或/和核酸诊断原料中，所述赤藓糖醇的终浓度为5wt％
‑
15wt％。
[0017]本专利技术的第二方面是提供一种如前所述冻干保护剂在制备核酸诊断预混液冻干、核酸诊断原料冻干或生物活性肽冻干中的应用。
[0018]优选地，所述核酸诊断预混液冻干选自PCR预混液冻干、多重PCR预混液冻干、荧光定量PCR预混液冻干、RT
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PCR预混液冻干、RPA预混液冻干、LAMP预混液冻干或TMA预混液冻干中的至少一种。
[0019]优选地，所述核酸诊断原料冻干选自DNA聚合酶冻干、UDG酶冻干、mmlv逆转录酶冻干或amv逆转录酶冻干中的至少一种。
[0020]本专利技术采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
[0021]本专利技术的冻干保护剂所采用的水苏糖、棉子糖、麦芽糖醇及赤藓糖醇，没有还原性，非常稳定，在较强的酸和碱条件下不水解，也不会和生物活性肽发生化学反应，如与氨基酸发生美拉德反应；与蔗糖、葡萄糖或某些低聚糖相比，本专利技术的冻干保护剂具有非常低的吸湿性，在25℃相对湿度为70％时，基本没有吸湿，易于制品的生产及长期保存；冻干制品溶解速率非常快，2～4秒内即可完全溶解。
附图说明
[0022]图1为本专利技术实施例5中RT
‑
LAMP预混液冻干的实物图；
[0023]图2为本专利技术实施例5中RT
‑
LAMP预混液冻干的扩增结果图。
具体实施方式
[0024]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0025]需要说明的是，在不冲突的情况下，本专利技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0026]下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明，但不作为本专利技术的限定。
[0027]实施例1
[0028]本实施例提供一种冻干缓冲液，包括：
[0029]Tris 10mM，KCl 50mM，NH4Cl 5mM，MgCl
2 2mM，Tween 20 0.01wt％，SE
‑
15 0.01wt％，Prolin300 0.1wt％，明胶0.05wt％，水苏糖3wt％～25wt％、2U Taq DNA聚合酶、200U MMLV逆转录酶。
[0030]表1
[0031]浓度0wt％3wt％5wt％7wt％10wt％15wt％20wt％25wt％是否成型否否是是是是是是2
×
LOD35.434.534.534.835.235.536.838.0
[0032]如上表所示，5wt％～25wt％左右的水苏糖作为冻干保护剂，可以冻干成型，其中5wt％～15wt％的浓度不影响PCR扩增效率。
[0033]实施例2
[0034]本实施例提供另一种冻干缓冲液，包括：
[0035]Tris 40mM，KCl 100mM，NH4Cl 15mM，MgCl
2 5mM，Tween 20 0.1wt％，SE...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种冻干保护剂，用于核酸诊断试剂或/和核酸诊断原料，其特征在于，包括：水苏糖、棉子糖、麦芽糖醇或赤藓糖醇中的至少一种。2.根据权利要求1所述的冻干保护剂，其特征在于，在核酸诊断试剂或/和核酸诊断原料中，所述水苏糖的终浓度为5wt％
‑
25wt％。3.根据权利要求1所述的冻干保护剂，其特征在于，在核酸诊断试剂或/和核酸诊断原料中，所述棉子糖的终浓度为5wt％
‑
25wt％。4.根据权利要求1所述的冻干保护剂，其特征在于，在核酸诊断试剂或/和核酸诊断原料中，所述麦芽糖醇的终浓度为7wt％
‑
25wt％。5.根据权利要求1所述的冻干保护剂，其特征在于，在核酸诊断试剂或...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴菊，
申请(专利权)人：常州可尔生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：