五味子乙素在制备离体生物样本保存液中的应用制造技术

本发明专利技术公开了五味子乙素在制备离体生物样本保存液中的应用。本发明专利技术创新性地将五味子乙素应用于细胞保存液，使得保存液具有抑制细胞凋亡、稳定细胞膜和清除自由基等保护功能，在低温状态下能够维持离体生物样本的细胞活性，减少氧化应激损伤，克服低温环境下传统细胞培养液存在活力低下、易大量溶胀死亡的缺陷，使得保存液能够在低温下保持细胞活性，并且具有制备方法简单，便于运输和保存的优点，能够降低保存液的制备成本和运输成本。能够降低保存液的制备成本和运输成本。能够降低保存液的制备成本和运输成本。

【技术实现步骤摘要】
五味子乙素在制备离体生物样本保存液中的应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体而言，涉及五味子乙素在制备离体生物样本保存液中的应用。

技术介绍

[0002]随着器官移植的研究与应用，低温保存液由于使用简单，保存操作步骤简单易行，对环境要求低，满足于运输和移植中所要求的短期保存要求，使用范围越来越广泛。在低温条件(0～4℃)下，细胞内酶活性低、细胞代谢慢，细胞及组织器官可以保存于低温条件下延长存活时间，提高细胞保存效果。
[0003]传统低温保存方法是将已分离细胞、组织和器官等直接保存于低温下，如4℃，但这种保存方法会导致在低温保存后细胞存活率下降，细胞膜皱缩，细胞结构遭到严重损伤，无法在复苏后存活。
[0004]在临床医疗中，在短时间内保存细胞时，往往使用生理盐水来维持细胞活性，然而细胞在生理盐水中活性降低速度快，细胞保存效果不理想。
[0005]随着技术进步，越来越多的研究者使用特殊的低温保存液来保存离体器官/组织。国际上通用的器官保存液为1987年研发的威斯康星大学保存液(UW液)和组氨酸
‑
色氨酸
‑
酮戊二酸盐溶液(HTK液)。传统细胞低温保存液大多借鉴和采用器官/组织低温保护液和灌洗液，例如HTK液、UW液、Collins液等。其中，UW液因其优异表现成为器官保存的“金标准”，但是价格昂贵、高黏度、高钾、稳定性不足等特点也限制了UW液的使用范围。
[0006]因此，降低低温保存液的成本同时提高细胞的存活率是改进传统低温保存液的难点。

技术实现思路

[0007]为了解决上述问题，本专利技术的第一目的在于提供五味子乙素在制备离体生物样本保存液中的应用，以在降低低温保存液的制备成本和保存成本的同时提高低温保存后细胞的存活率。
[0008]本专利技术的第二目的在于提供一种离体生物样本保存液，含有五味子乙素，以及生物样本保存所需的能量底物、pH缓冲剂、渗透压维持剂、渗透压调节剂和盐类物质中的至少一种。
[0009]本专利技术的一种实现方式中，保存液中五味子乙素的浓度为0.02g/L～0.04g/L。
[0010]本专利技术的一种实现方式中，保存液还包括以下各组分：
[0011][0012][0013]本专利技术的一种实现方式中，保存液包括：
[0014][0015]本专利技术的一种实现方式中，复方氨基酸水溶液为复方氨基酸原液和水的混合液。
[0016]本专利技术的一种实现方式中，复方氨基酸原液和保存液的体积比为(1～3)：100；和/或
[0017]复方氨基酸原液含有质量百分比为10％的复方氨基酸；和/或
[0018]复方氨基酸原液为复方氨基酸注射液18aa。
[0019]本专利技术的一种实现方式中，保存液的渗透压为280～310m0sm/kg。
[0020]本专利技术的一种实现方式中，保存液的pH值为7.2～7.4。
[0021]本专利技术的第三目的在于提供一种离体生物样本保存方法，将离体生物样本置于上述保存液中低温保存。
[0022]本专利技术的一种实现方式中，低温保存的温度为0～4℃。
[0023]本专利技术的一种实现方式中，离体生物样本为肝细胞样本和肝脏组织样本中的至少
一种。
[0024]本专利技术创新性地将五味子乙素应用于细胞保存液，使得保存液具有抑制细胞凋亡、稳定细胞膜和清除自由基等保护功能，在低温状态下能够维持离体生物样本的细胞活性，减少氧化应激损伤，克服低温环境下传统细胞培养液存在活力低下、易大量溶胀死亡的缺陷，使得保存液能够在低温下保持细胞活性，并且具有制备方法简单，便于运输和保存的优点，能够降低保存液的制备成本和运输成本。
附图说明
[0025]图1为本专利技术实施例5提供的台盼蓝染色法测存活率的染色结果示意图；
[0026]图2为本专利技术实施例5提供的保存液中AST含量以及肝脏组织SOD含量检测结果示意图。
具体实施方式
[0027]现将详细地提供本专利技术实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本专利技术。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本专利技术进行多种修改和变化而不背离本专利技术的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。
[0028]因此，旨在本专利技术覆盖落入所附权利要求的范围及其等同范围中的此类修改和变化。本专利技术的其它对象、特征和方面公开于以下详细描述中或从中是显而易见的。本领域普通技术人员应理解本讨论仅是示例性实施方式的描述，而非意在限制本专利技术更广阔的方面。
[0029]如上文，低温保存对细胞造成的伤害主要有以下几个方面：细胞膜流动性减小，细胞膜损伤引起细胞膨胀，环境压力造成氧化损伤，生成大量脂质过氧化物导致细胞坏死和凋亡等。传统保存方法或使用普通生理盐水，保存后细胞存活率低，或保存液昂贵、成分不稳定，导致低温保存成本高。
[0030]为了至少部分解决上述技术问题的至少一个，本专利技术的第一方面提供了五味子乙素在制备离体生物样本保存液中的应用，五味子乙素使得保存液具有抑制细胞凋亡、稳定细胞膜和清除自由基等保护功能，在低温状态下能够维持离体生物样本的细胞活性，减少氧化应激损伤，使得保存液能够在低温下保持细胞活性，并且具有制备简单，便于运输和保存的优点，能够降低保存液的制备成本和运输成本。
[0031]本专利技术的第二方面提供了一种离体生物样本保存液，含有五味子乙素，以及生物样本所需的能量底物、pH缓冲剂、渗透压维持剂、渗透压调节剂和盐类物质中的至少一种，使得离体生物样本在较长时间保存和运输中，能够维持细胞的存活率及活力；其中，五味子乙素在低温状态下能够维持离体生物样本的细胞活性，减少氧化应激损伤，保持细胞膜形态完整，从而使得保存液能够在低温下保存离体生物样本，减少离体生物样本中的细胞调亡现象，提高离体身生物样本中细胞的存活率，并且具有制备简单，便于运输和保存的优点，能够降低保存液的制备成本和运输成本。
[0032]其中，五味子乙素的浓度为为0.02g/L～0.04g/L，进一步为0.03g/L～0.04g/L，以实现更好的低温保存效果。
[0033]一些实施方案中，保存液还包括以下各组分：5g/L～6g/L氯化钠，0.3g/L～0.5g/L氯化钾，0.01g/L～0.03g/L氯化钙，0.8g/L～1g/L磷酸氢二钠，0.18g/L～0.23g/L硫酸镁，0.4g/L～1.2g/L碳酸氢钠，45g/L～55g/L右旋糖酐40，3.1g/L～4.0g/L甘露醇，1g/L～1.6g/L葡萄糖，4g/L～5.5g/LHEPES，1g/L～1.5g/L腺苷，0.7g/L～1g/LD
‑
海藻糖，0.04g/L～0.07g/L还原型谷胱甘肽，0.1g/L～0.3g/L维生素C以及复方氨基酸水溶液。
[0034]本专利技术利用上述配方中的各成分构成细胞所需基本盐类、pH缓冲剂、冬眠保护本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.五味子乙素在制备离体生物样本保存液中的应用。2.一种离体生物样本保存液，其特征在于，含有五味子乙素，以及生物样本保存所需的能量底物、pH缓冲剂、渗透压维持剂、渗透压调节剂和盐类物质中的至少一种。3.根据权利要求1所述的应用，或者权利要求2所述的保存液，其特征在于，所述保存液中五味子乙素的浓度为0.02g/L～0.04g/L。4.根据权利要求2所述的保存液，其特征在于，所述保存液还包括以下各组分：复方氨基酸水溶液。5.根据权利要求4所述的保存液，其特征在于，所述复方氨基酸水溶液为复方氨基酸原液和水的混合液。6.根据权利要求5所述的保存液，其特征在于，所述复方氨基酸原液含有质量百分...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄小桃，卫思婷，林祥华，张琳，钟嘉伟，
申请(专利权)人：广东顺德工业设计研究院广东顺德创新设计研究院，
类型：发明
国别省市：