一种检测阿尔茨海默病的化学发光试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开一种检测阿尔茨海默病的化学发光试剂盒，由以下几种成分组成：链霉亲和素包被磁微粒，生物素标记的Aβ1

【技术实现步骤摘要】
一种检测阿尔茨海默病的化学发光试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术属于检测领域，涉及一种体外诊断试剂盒，具体涉及一种检测阿尔茨海默病的化学发光试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]阿尔茨海默病(Alzheimer
’
s disease，AD)，是一种不可逆的、起病隐袭的、进展性的疾病，临床表现为记忆障碍、失语、失用、失认、执行功能障碍以及人格和行为改变等，目前已成为继心脑血管疾病和恶行肿瘤之后的第三位慢性非传染性疾病。
[0003]随着我国人口老龄化的加剧，AD患病率逐年上升，据统计，我国AD患病人数已经超过600万，预计2050年患病人数将超过2000万，是世界上AD患病人口最多、增长速度最快的地区，给患者、家庭、社会和医疗带来沉重负担。
[0004]据《阿尔茨海默病诊疗规范》(2020版)，AD生物标志物检查包括：正电子发射断层成像(positron emission tomography，PET)扫描显示Aβ或神经原纤维蛋白(tau蛋白)成像阳性。脑脊液中Aβ1
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42蛋白水平下降，总tau蛋白和磷酸化tau蛋白水平升高。
[0005]相对于脑脊液样本取样操作复杂及有创，PET设备价格复杂检测费用昂贵，血液检测样本采集创伤和操作难度更小，更适于疾病早期筛查和普及使用。人在正常状态下，每天有约500mL脑脊液(CSF)吸收入血，因此血液可以间接地反应中枢神经系统的改变，并且相对于CSF标本，血液标本更容易获得。AD与其他痴呆的不同点在于AD患者脑组织中出纳在β
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淀粉样蛋白斑块和神经原纤维(tau蛋白)缠结。与AD相关的血液标志物有Aβ1
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40、Aβ1
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42、Aβ1
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40蛋白和p
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tau蛋白等，这些血液中的生物标记物的准确检测可以为AD的早期诊断和人群筛查提供重要依据。
[0006]AD发病机制尚未明确，目前比较公认的发病机制认为Aβ的生成和清除失衡是神经元变性和痴呆发生的始动因素，其可诱导tau蛋白过度磷酸化、炎症反应、神经元死亡等一系列病理过程。由于AD病因复杂，单一生物标志物不足以有效辅助AD诊断，多种生物标志物联用能显著提高AD诊断的灵敏度和特异性。研究发现，AD患者样本中Aβ1
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42比正常人低，Aβ1
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40比正常人高，通过测试样本中Aβ1
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42/Aβ1
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40的值可以显著提高AD诊断的特异性和灵敏度。本专利技术旨在对阿尔茨海默症相关的多种血液标志物的特异性和灵敏度进行研究和基于化学发光平台的诊断试剂开发和转化。
[0007]现有技术中存在对AD的生物标记物检测的试剂盒，有以下问题：只使用一种生物标记物进行检测，对AD诊断的特异性和灵敏度欠佳；不适用与血液的检测；操作复杂，检测时间长，灵敏度低，线性范围窄；不能实现自动化和大批量样本连续测定，临床应用作用非常有限。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的是提供一种检测阿尔茨海默病的化学发光试剂盒及其制备方法，以血液中Aβ1
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40蛋白浓度和Aβ1
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42蛋白浓度值作为判断是否为AD患者的指标，主要解决现有
技术中在血液中检测单一AD标志物的灵敏度和特异性不高、操作复杂、检测时间长和不能实现自动化检测等技术问题。
[0009]本专利技术的一种检测阿尔茨海默病的化学发光试剂盒，其特征在于，由以下几种成分组成：
[0010]链霉亲和素包被磁微粒，生物素标记的Aβ1
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40抗体和/或生物素标记的Aβ1
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42抗体，碱性磷酸酶标记的Aβ1
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40抗体和/或碱性磷酸酶标记的Aβ1
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42抗体，Aβ1
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40抗体定标品和/或Aβ1
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42抗体定标品；
[0011]所述血液为血清或血浆；所述链霉亲和素包被磁微粒，在浓度0.4～1.0mg/mL下装量为15～20mL，所述磁微粒的平均粒径为0.5～3μm；所述生物素标记的Aβ1
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40抗体为识别Aβ1
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40蛋白的单抗，所述生物素标记的Aβ1
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42抗体为识别Aβ1
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42蛋白的单抗，在浓度0.5～5mg/mL下装量为16～24mL；所述碱性磷酸酶标记的Aβ1
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40抗体为识别Aβ1
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40蛋白的单抗，所述碱性磷酸酶标记的Aβ1
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42抗体为识别Aβ1
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42蛋白的单抗，在浓度0.5～3mg/mL下装量为16～24mL；所述Aβ1
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40定标品为用定标品缓冲液将Aβ1
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40抗原配制成一系列浓度，所述Aβ1
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42定标品为用定标品缓冲液将Aβ1
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42抗原配制成一系列浓度。
[0012]本专利技术所述的检测阿尔茨海默病的化学发光试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0013]S1，取链霉亲和素包被磁微粒，用R1缓冲液清洗磁微粒，再用R1缓冲液把链霉亲和素磁微粒稀释到0.2～0.8mg/mL，作为试剂R1；
[0014]所述R1缓冲液是浓度为0.02～0.2mol/L，PH值7.0～7.4的三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸盐缓冲液、4
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羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液中的一种，所述R1缓冲液中包括0.5wt％的明胶、0.1wt％的表面活性剂和0.1～0.2vol％的防腐剂，所述防腐剂优选为叠氮钠或proclin300；
[0015]S2，配制生物素溶液；将识别Aβ1
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40蛋白或Aβ1
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42蛋白的抗体的储存溶液置换成磷酸盐缓冲液，得到抗体溶液；在所述抗体溶液中加入所述生物素溶液，所述抗体与所述生物素的摩尔比为1:(10～30)；在室温下反应20～50min；反应结束后除去未反应的生物素，得到生物素标记的总tau抗体；再用R2缓冲液将其稀释到0.2～5ug/mL，作为试剂R2；
[0016]所述R2缓冲液是是浓度为0.02～0.2mol/L，PH值7.0～7.4的三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液、磷酸盐(PBS)缓冲液、4
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羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)缓冲液中的一种，所述R2缓冲液中包括1wt％的牛血清白蛋白、0.5wt％的明胶、0.1wt％的表面活性剂和0.1～0.2vol％的防腐剂，所述防腐剂优选为叠氮钠或proclin300；
[0017]S3，将识别Aβ1
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40蛋白或Aβ1
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42蛋白的抗体与活化剂1反应20～60min，二者的质量比为1：(2～60)，得到活化的Aβ1
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40抗体或Aβ1
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42抗体；将质量比为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测阿尔茨海默病的化学发光试剂盒，其特征在于，由以下几种成分组成：链霉亲和素包被磁微粒，生物素标记的Aβ1
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40抗体和/或生物素标记的Aβ1
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42抗体，碱性磷酸酶标记的Aβ1
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40抗体和/或碱性磷酸酶标记的Aβ1
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42抗体，Aβ1
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40抗体定标品和/或Aβ1
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42抗体定标品。2.根据本领域技术1所述的检测阿尔茨海默病的化学发光试剂盒，其特征在于，所述血液为血清或血浆；所述链霉亲和素包被磁微粒，在浓度0.4～1.0mg/mL下装量为15～20mL，所述磁微粒的平均粒径为0.5～3μm；所述生物素标记的Aβ1
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40抗体为识别Aβ1
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40蛋白的单抗，所述生物素标记的Aβ1
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42抗体为识别Aβ1
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42蛋白的单抗，在浓度0.5～5mg/mL下装量为16～24mL；所述碱性磷酸酶标记的Aβ1
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40抗体为识别Aβ1
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40蛋白的单抗，所述碱性磷酸酶标记的Aβ1
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42抗体为识别Aβ1
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42蛋白的单抗，在浓度0.5～3mg/mL下装量为16～24mL。3.根据本领域技术1所述的检测阿尔茨海默病的化学发光试剂盒，其特征在于，所述Aβ1
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40定标品为用定标品缓冲液将Aβ1
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40抗原配制成一系列浓度，所述Aβ1
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42定标品为用定标品缓冲液将Aβ1
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42抗原配制成一系列浓度。4.根据本领域技术3所述的检测阿尔茨海默病的化学发光试剂盒，其特征在于，所述定标品稀释液是浓度为0.05～0.1mol/L，PH值7.4的三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲液，所述定标品缓冲液中含有2wt%的牛血清白蛋白、20wt%的丙三醇和0.1～0.2vol%的防腐剂，所述防腐剂为叠氮钠或者ProClin
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300。5.根据权利要求1～4任意一项所述的检测阿尔茨海默病的化学发光试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，取链霉亲和素包被磁微粒，用R1缓冲液清洗磁微粒，再用R1缓冲液把链霉亲和素磁微粒稀释到0.2～0.8mg/mL，作为试剂R1；S2，配制生物素溶液；将识别Aβ1
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40蛋白或Aβ1
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42蛋白的抗体的储存溶液置换成磷酸盐缓冲液，得到抗体溶液；在所述抗体溶液中加入所述生物素溶液，所述抗体与所述生物素的摩尔比为1:（10～30）；在室温下反应20～50min；反应结束后除去未反应的生物素，得到生物素标记的总tau抗体；再用R2缓冲液将其稀释到0.2～5ug/mL，作为试剂R2；S3，将识别Aβ1
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40蛋白或Aβ1
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42蛋白的抗体与活化剂1反应20～60min，二者的质量比为1：（2～60），得到活化的Aβ1
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40抗体或Aβ1
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42抗体；...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘建芳，施维，林杰，
申请(专利权)人：上海科华生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：