一种检测PCM1-JAK2融合基因的多重PCR方法、引物探针组合与试剂盒技术

本发明专利技术涉及生物医学技术领域，提供了一种检测PCM1

【技术实现步骤摘要】
一种检测PCM1
‑
JAK2融合基因的多重PCR方法、引物探针组合与试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物医学
，尤其涉及了一种检测PCM1
‑
JAK2融合基因的多重PCR方法、引物探针组合与试剂盒。本专利技术检测的PCM1
‑
JAK2融合基因包括：PCM1
‑
26/AK2
‑
9、PCM1
‑
28/JAK2
‑
9、PCM1
‑
30/JAK2
‑
9、PCM1
‑
36/JAK2
‑
9、PCM1
‑
29/JAK2
‑
11、PCM1
‑
36/JAK2
‑
11或PCM1
‑
23/JAK2
‑
12。

技术介绍

[0002]PCM1
‑
JAK2由t(8；9)(p22；p24)异位产生，在2005年首次确定的一种血液恶性肿瘤相关的融合基因，该种融合基因在髓系和淋巴系恶性肿瘤中都存在。PCM1、JAK2均具有多个断裂位点，现已报道有7种PCM1
‑
JAK2融合方式：E26
‑
E9、E28
‑
E9、E30
‑
E9、E36
‑
E9、E29
‑
E11、E36
‑
E11、E23
‑/>E12(文献报道因参考转录本的不同而有更多种融合方式，但经同一转录本(PCM1:NM_006197.4，JAK2:NM_004972.4)确认后，融合方式为以上7种)。
[0003]现有技术中如申请号为CN201711071291.3的中国专利技术专利中公开了检测PCM1
‑
JAK2相对表达量的方法、试剂盒和寡核苷酸，寡核苷酸包括检测用上游引物PCM1
‑
JAK2
‑
E36/E9
‑
F、PCM1
‑
JAK2
‑
E25/E9
‑
F，下游引物PCM1
‑
JAK2
‑
E36/E9
‑
R、PCM1
‑
JAK2
‑
E36/E7
‑
R、PCM1
‑
JAK2
‑
E25/E9
‑
R，探针PCM1
‑
E36
‑
Probe和PCM1
‑
E25
‑
Probe，能够检测PCM1
‑
JAK2(E36/E9)、PCM1
‑
JAK2(E36/E7)或PCM1
‑
JAK2(E25/E9)三种PCM1
‑
JAK2融合基因。
[0004]现有技术中如申请号为202011373790.X的中国专利技术专利中公开了一种检测Ph样ALL融合基因的引物探针组合与试剂盒，检测Ph样ALL融合基因的引物探针组合，由序列表中序列1
‑
42所示的42条单链DNA与TaqMan探针1
‑
13组成；TaqMan探针1
‑
13的序列依次为序列表中43
‑
55，不能够检测
[0005]PCM1
‑
JAK2(E28/E9)、PCM1
‑
JAK2(E29/E11)、PCM1
‑
JAK2(E23/E12)23
‑
12三种PCM1
‑
JAK2融合基因。
[0006]由于PCM1
‑
JAK2融合方式多种多样，由于现有技术中的检测范围不能涵盖所有PCM1
‑
JAK2融合方式，临床中常出现漏检，为了检测全面需要多次单独检测，检测效率低，患者和医院的经济负担重。

技术实现思路

[0007]针对现有技术中检测PCM1
‑
JAK2融合基因的不足和实际需求，本专利技术提供了一种检测PCM1
‑
JAK2融合基因的多重PCR方法、引物探针组合与试剂盒。本专利技术设计了检测内参/目的基因的引物、探针序列及其组合，采用多重PCR技术同时检测多种PCM1
‑
JAK2融合基因，通过调整引物、探针浓度及比例，优化PCR反应体系和反应条件，使扩增效率和速率均达到最佳，检测范围涵盖了已公开的7种PCM1
‑
JAK2融合方式。
[0008]本专利技术提供了一种检测PCM1
‑
JAK2融合基因的引物探针组合，所述引物探针组合包括引物探针组合A1和引物探针组合A2：
[0009]所述引物探针组合A1包括上游引物PCM1
‑
E23
‑
F、PCM1
‑
E26
‑
F、PCM1
‑
E28
‑
F、PCM1
‑
E30
‑
F、PCM1
‑
E36
‑
F、下游引物JAK2
‑
E9
‑
R、JAK2
‑
E12
‑
R和探针JAK2
‑
E9
‑
Probe、JAK2
‑
E12
‑
Probe，其碱基序列如下所示：
[0010]PCM1
‑
E23
‑
F：CCAGCCTGGCATCTAAAGATA
[0011]PCM1
‑
E26
‑
F：CTAGTGAGAGCCTTGCTACTAC
[0012]PCM1
‑
E28
‑
F：CTGGTGCAGGTACTACAGTT
[0013]PCM1
‑
E30
‑
F：TGATGAGAGCAAAGAGTTTGTAAAG
[0014]PCM1
‑
E36
‑
F：GCTGGAAGTCCTGATACTGA
[0015]JAK2
‑
E9
‑
R：ATGTGCATCTGCAGTTAATCTATAA
[0016]JAK2
‑
E12
‑
R：TGTTGGTGAGGTTGGTACATC
[0017]JAK2
‑
E9
‑
Probe：FAM
‑
CCATCAATTAATGACACGAAAGACA
‑
MGB
[0018]JA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测PCM1
‑
JAK2融合基因的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合包括引物探针组合A1和引物探针组合A2：所述引物探针组合A1包括上游引物PCM1
‑
E23
‑
F、PCM1
‑
E26
‑
F、PCM1
‑
E28
‑
F、PCM1
‑
E30
‑
F、PCM1
‑
E36
‑
F、下游引物JAK2
‑
E9
‑
R、JAK2
‑
E12
‑
R和探针JAK2
‑
E9
‑
Probe、JAK2
‑
E12
‑
Probe，其碱基序列如下所示：PCM1
‑
E23
‑
F：CCAGCCTGGCATCTAAAGATAPCM1
‑
E26
‑
F：CTAGTGAGAGCCTTGCTACTACPCM1
‑
E28
‑
F：CTGGTGCAGGTACTACAGTTPCM1
‑
E30
‑
F：TGATGAGAGCAAAGAGTTTGTAAAGPCM1
‑
E36
‑
F：GCTGGAAGTCCTGATACTGAJAK2
‑
E9
‑
R：ATGTGCATCTGCAGTTAATCTATAAJAK2
‑
E12
‑
R：TGTTGGTGAGGTTGGTACATCJAK2
‑
E9
‑
Probe：FAM
‑
CCATCAATTAATGACACGAAAGACA
‑
MGBJAK2
‑
E12
‑
Probe：HEX
‑
ACACCATTCGTTCTGAAGACTAGA
‑
MGB所述引物探针组合A2包括上游引物PCM1
‑
E23
‑
F、PCM1
‑
E26
‑
F、PCM1
‑
E28
‑
F、PCM1
‑
E30
‑
F、PCM1
‑
E36
‑
F、下游引物JAK2
‑
E11
‑
R和探针JAK2
‑
E11
‑
Probe，其碱基序列如下所示：PCM1
‑
E23
‑
F：CCAGCCTGGCATCTAAAGATAPCM1
‑
E26
‑
F：CTAGTGAGAGCCTTGCTACTACPCM1
‑
E28
‑
F：CTGGTGCAGGTACTACAGTTPCM1
‑
E30
‑
F：TGATGAGAGCAAAGAGTTTGTAAAGPCM1
‑
E36
‑
F：GCTGGAAGTCCTGATACTGAJAK2
‑
E11
‑
R：GAACAGTTTCCATCTGGTAACAATJAK2
‑
E11
‑
Probe：JOE
‑
CACTGAGGTTGTACTCTTCATTCT
‑
MGB2.根据权利要求1所述的一种检测PCM1
‑
JAK2融合基因的引物探针组合，其特征在于，所述检测PCM1
‑
JAK2融合基因的引物探针组合中各探针的3
’
末端均标记MGB，5
’
末端标记FAM、JOE或HEX。3.根据权利要求2所述的一种检测PCM1
‑
JAK2融合基因的引物探针组合，其特征在于，所述PCM1
‑
JAK2融合基因选自PCM1
‑
26/AK2
‑
9、PCM1
‑
28/JAK2
‑
9、PCM1
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：汝昆，张蕾，蔺亚妮，
申请(专利权)人：天津见康华美医学诊断技术有限公司，
类型：发明
国别省市：