一种细胞系统及其应用、以及激活广谱癌细胞特异性T细胞的方法技术方案

本发明专利技术涉及一种细胞系统及其应用、以及激活广谱癌细胞特异性T细胞的方法，细胞系统包括从肿瘤浸润淋巴细胞中提取的癌细胞特异性T细胞，提取包括将肿瘤浸润淋巴细胞或肿瘤浸润淋巴细胞中的T细胞、抗原提呈细胞与负载癌细胞全细胞抗原的纳米粒子和/或微米粒子共孵育以激活癌细胞特异性T细胞，再将被激活的癌细胞特异性T细胞从肿瘤浸润淋巴细胞中分离的步骤。本发明专利技术克服了临床上目前无法有效筛选肿瘤浸润淋巴细胞中广谱和多克隆的癌细胞特异性T细胞的难题，能够从肿瘤浸润淋巴细胞中分离广谱的具有特异性肿瘤杀伤功能的效应性癌细胞特异性T细胞，且具有易分离获取和特异性高的特点，可用于癌症的预防和治疗。可用于癌症的预防和治疗。可用于癌症的预防和治疗。

【技术实现步骤摘要】
一种细胞系统及其应用、以及激活广谱癌细胞特异性T细胞的方法


[0001]本专利技术涉及免疫治疗领域，尤其涉及一种细胞系统及其应用、以及激活广谱癌细胞特异性T细胞的方法。

技术介绍

[0002]肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes,TILs)是一类从肿瘤组织中分离出的浸润淋巴细胞，主要以T细胞、B细胞、巨噬细胞和NK细胞为代表，是肿瘤微环境的重要组成部分，在肿瘤的免疫应答中具有核心作用，严重影响肿瘤患者的治疗和预后。其中，T细胞尤其是癌细胞特异性T细胞发挥着抗癌主力军的作用。T细胞是机体特异性识别和杀灭癌细胞的主要细胞，每一种癌细胞特异性T细胞的克隆可以特异性识别一种抗原表位。癌症患者体内尤其是经过免疫治疗或者放疗的患者体内都含有一定数量的癌细胞特异性T细胞。
[0003]研究显示，能够浸润到肿瘤部位的淋巴细胞，尤其是癌细胞特异性T细胞越多，肿瘤组织就越能被较好的控制。但是，不同类型的TILs在各类肿瘤的亚型中作用均不相同。其中，既有正向调节、发挥免疫监视作用的细胞，如CD8
+
TIL、NK细胞、CD4
+
Th1细胞等，又有负向调节、发挥免疫耐受作用的细胞，如CD4
+
Th2细胞、调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)。因此，浸润到肿瘤部位的很多淋巴细胞并不一定发挥抗癌功效，比如2型巨噬细胞反而会促进肿瘤的生长，调节性T细胞尤其是癌症特异性调节性T细胞也会促进癌症生长。
[0004]肿瘤患者的TILs由于包括以上因素在内的各种原因受到了抑制，不能有效杀伤肿瘤，因此人们希望通过一些体外培养方法将TIL细胞富集起来，再回输给患者，发挥抗肿瘤作用，即TIL细胞疗法。利用肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)治疗癌症的疗法已经发展多年，但是仍面临着如何更好地筛选杀伤性癌细胞特异性T细胞的问题(尤其是分选出广谱的癌细胞特异性T细胞的问题)。目前的方法主要是从处理的肿瘤组织中分离出T细胞等进行体外扩增后回输给患者使用。但是肿瘤浸润的T细胞很多并不都是肿瘤特异性的T细胞，而且很多肿瘤特异性的T细胞为调节性T细胞(Treg)或者耗竭失能的T细胞，并不能有效识别和杀伤癌细胞，所以即使机体分离扩增后回输给患者后效果也相对有限。而且，如果将Treg体外扩增后回输给患者反而会引起肿瘤组织生长更快。所以如何能够从肿瘤浸润淋巴细胞中筛选得到肿瘤特异性T细胞中的具有癌细胞识别和杀伤功能的效应性癌细胞特异性T细胞就显得非常关键，但是目前没有特别高效的手段可以很好地从肿瘤浸润淋巴细胞中分离该部分具有特异性肿瘤杀伤功能的效应性癌细胞特异性T细胞。

技术实现思路

[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种来源于肿瘤浸润淋巴细胞的细胞系统，使用负载癌细胞全细胞抗原的纳米粒子或微米粒子先体外激活效应性癌细胞特异性T细胞，然后再利用被激活的效应性癌细胞特异性T细胞特异性表达的标志物分离提取上述癌
细胞特异性T细胞，回输给患者预防或者治疗癌症，有效地解决了如何从肿瘤浸润淋巴细胞中特异性分离提取具有识别和杀伤癌细胞能力的广谱和多克隆的癌细胞特异性T细胞的问题。
[0006]本专利技术的第一个目的是提供一种来源于肿瘤浸润淋巴细胞的细胞系统，该细胞系统包括从肿瘤浸润淋巴细胞中提取的癌细胞特异性T细胞，所述的提取包括将(1)肿瘤浸润淋巴细胞或肿瘤浸润淋巴细胞中的T细胞、(2)抗原提呈细胞与(3)负载癌细胞全细胞抗原的纳米粒子(NP)或微米粒子(MP)共孵育以激活癌细胞特异性T细胞，再将被癌细胞全细胞抗原激活的癌细胞特异性T细胞分离的步骤；其中，癌细胞全细胞抗原包括经癌细胞和/或肿瘤组织裂解得到的水溶性抗原和/或非水溶性抗原，该非水溶性抗原经溶解剂或含溶解剂的溶解液溶解后负载于所述纳米粒子或微米粒子上。
[0007]进一步地，分离癌细胞特异性T细胞后，还包括对癌细胞特异性T细胞进行扩增或扩增分选的步骤。
[0008]进一步地，所述的扩增为体外扩增，扩增分选的方法包括但不限于与细胞因子和/或抗体共孵育。
[0009]进一步地，细胞因子包括但不限于白介素2(IL
‑
2)、白介素7(IL
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7)、白介素14(IL
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14)、白介素4(IL
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4)、白介素15(IL
‑
15)、白介素21(IL
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21)、白介素17(IL
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17)、白介素12(IL
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12)、白介素6(IL
‑
6)、白介素33(IL
‑
33)、γ干扰素(IFN
‑
γ)、TNF
‑
α。
[0010]进一步地，抗体包括但不限于αCD
‑
3抗体、αCD
‑
4抗体、αCD
‑
8抗体、αCD
‑
28抗体、αCD
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40抗体、αOX
‑
40抗体、αOX
‑
40L抗体。
[0011]进一步地，得到的癌细胞特异性T细胞包括CD4
+ T细胞和/或CD8
+ T细胞，优选为同时包括CD4
+ T细胞和CD8
+ T细胞。
[0012]进一步地，所述的分离包括利用被癌细胞全细胞抗原激活的癌细胞特异性T细胞的特异性表面标志物进行筛选的步骤。特异性表面标志物包括但不限于CD69、CD25、OX40(CD134)、CD137、CD28等。
[0013]进一步地，利用表面标志物分离癌细胞特异性T细胞的技术包括但不限于流式细胞术和磁珠分选法。
[0014]本专利技术中，使用负载癌细胞全细胞抗原的纳米粒子和/或微米粒子先特异性激活肿瘤浸润淋巴细胞中预存的已在淋巴结中被激活过的癌细胞特异性T细胞，再利用被激活的癌细胞特异性T细胞分泌特定细胞因子或者高表达某些表面分子的特性，利用流式细胞术等手段分离得到癌细胞特异性T细胞，经体外扩增后回输给患者使用，能够分离和扩增到最多样和广谱的具有识别和杀伤癌细胞功能的癌症特异性T细胞。
[0015]进一步地，所述共孵育包括但不限于：负载癌细胞全细胞抗原的纳米粒子和/或微米粒子、抗原提呈细胞、肿瘤浸润淋巴细胞或肿瘤浸润淋巴细胞中的T细胞三者同时共孵育；或者负载癌细胞全细胞抗原的纳米粒子和/或微米粒子先与抗原提呈细胞二者共孵育一段时间，再加入肿瘤浸润淋巴细胞或肿瘤浸润淋巴细胞中的T细胞三者同时共孵育；或者负载癌细胞全细胞抗原的纳米粒子和/或微米粒子先与抗原提呈细胞二者共孵育一段时间，分离出抗原提呈细胞，将抗原提呈细胞与肿瘤浸润淋巴细胞或肿瘤浸润淋巴细胞中的T细胞二者再同时共孵育。
[0016]进一步地，上述肿瘤浸润淋巴细胞中的T细胞是从肿瘤浸润淋巴细胞中分选出来
的T细胞，分选出的T细胞中包含癌细胞特异性T细胞，从肿瘤浸润淋巴细胞中分选出T细胞的方本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种来源于肿瘤浸润淋巴细胞的细胞系统，其特征在于：所述细胞系统包括从肿瘤浸润淋巴细胞中提取的癌细胞特异性T细胞；所述的提取包括将肿瘤浸润淋巴细胞或肿瘤浸润淋巴细胞中的T细胞、抗原提呈细胞与负载癌细胞全细胞抗原的纳米粒子和/或负载癌细胞全细胞抗原的微米粒子共孵育以激活癌细胞特异性T细胞，再将被癌细胞全细胞抗原激活的癌细胞特异性T细胞分离的步骤；其中，癌细胞全细胞抗原包括经癌细胞和/或肿瘤组织裂解得到的水溶性抗原和/或非水溶性抗原，所述非水溶性抗原经溶解剂或含溶解剂的溶解液溶解后负载于所述纳米粒子或微米粒子上。2.根据权利要求1所述的细胞系统，其特征在于：分离被癌细胞全细胞抗原激活的癌细胞特异性T细胞后，还包括对所述癌细胞特异性T细胞进行扩增或扩增分选的步骤。3.根据权利要求2所述的细胞系统，其特征在于：所述的扩增分选为将所述癌细胞特异性T细胞与细胞因子和/或抗体共孵育。4.根据权利要求1所述的细胞系统，其特征在于：所述的分离包括利用被癌细胞全细胞抗原激活的癌细胞特异性T细胞的表面标志物进行筛选的步骤。5.根据权利要求4所述的细胞系统，其特征在于：所述表面标志物包括CD69、CD25、OX40、CD137和CD28中的一种或多种。6.根据权利要求1所述的细胞系统，其特征在于：所述肿瘤浸润淋巴细胞中的T细胞为从肿瘤浸润淋巴细胞中分选出来的T细胞，所述的分选包括从肿瘤浸润淋巴细胞中分选出CD45
+
的细胞和/或CD3
+
的细胞、分选出CD45
+
CD3
+
的细胞、分选出CD3
+
CD8
+
的细胞、分选出CD45
+
CD3
+
CD8
+
的细胞、分选出CD3
+
CD4
+
的细胞或分选出CD45
+
CD3
+
CD4
+
的细胞。7.根据权利要求1所述的细胞系统，其特征在于：所述抗原提呈细胞包括B细胞、树突状细胞和巨噬细胞中的一种或多种。8.根据权利要求1所述的细胞系统，其特征在于：共孵育时加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘密，
申请(专利权)人：苏州尔生生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：