一种基于纳米复合材料构建夹心型适配体传感器检测GPC3的方法技术

一种基于纳米复合材料构建夹心型适配体传感器检测GPC3的方法，将金

【技术实现步骤摘要】
一种基于纳米复合材料构建夹心型适配体传感器检测GPC3的方法


[0001]本专利技术属于生物检测领域，具体涉及一种基于纳米复合材料构建夹心型适配体传感器检测GPC3的方法。

技术介绍

[0002]磷脂酰肌醇蛋白聚糖
‑
3（glypican
‑
3， GPC3）的检测方法有ELISA、放射免疫吸附法、荧光免疫分析法、化学发光免疫分析法、电化学免疫传感器等。公开号为CN 112014577 A的专利技术专利，公开了一种免疫试剂盒，采用磁珠微粒偶联鼠抗人GPC3单克隆抗体稀释的试剂M和碱性磷酸酶标记兔抗人GPC3多克隆抗体稀释的试剂R进行偶联，实现对血清中GPC3的检测，该方法具有较高的灵敏度，但制备工程繁琐，成本较高。公开号为CN 105717104 A的专利技术专利，利用膜过滤装置分离获取肝癌患者外周血中的CTC，运用细胞蜡块技术制作薄层切片，进而检测GPC3，该方法具有良好的稳定性和特异性，但所用仪器昂贵，操作复杂，需要专业技术人员检测。因此，需要建立一种快速、灵敏、便携检测GPC3的方法。

技术实现思路

[0003]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种基于血红素
‑
还原氧化石墨烯
‑
铂@钯纳米复合材料（H
‑
rGO
‑
Pt@Pd NPs），构建夹心型适配体传感器，实现GPC3检测，最低检测限为0.4801 μg/mL。
[0004]为解决该技术问题，利用π
‑
π键吸附作用合成具有高比表面积、高电导率以及类过氧化物酶性质的H
‑
rGO
‑
Pt@Pd NPs纳米复合材料，并通过π
‑
π键结合的方式将纳米复合材料与GPC3适配体（GPC3
Apt
）结合，制备出能够与GPC3特异性结合的H
‑
rGO
‑
Pt@Pd NPs
‑
GPC3
Apt
信号探针；采用电沉积技术将Au NPs@rGO修饰在丝网印刷电极表面；通过静电吸附作用将GPC3适配体修饰在Au NPs@rGO电极表面，由于GPC3能够与GPC3适配体特异性结合，形成稳定的化学结构，构建了H
‑
rGO
‑
Pt@Pd NPs
‑
GPC3
Apt
/GPC3/GPC3
Apt
/ Au NPs@rGO/SPCE夹心型电化学适配体传感器。在电极表面滴加过氧化氢（H2O2）和硝酸银（AgNO3），H
‑
rGO
‑
Pt@Pd NPs由于具有类过氧化物酶性质可有效催化H2O2与AgNO3反应，Ag
+
得到电子，被还原为金属Ag沉积在电极表面，通过用差分脉冲伏安法（DPV）检测沉积Ag传感器的电流响应，Ag的电流响应与GPC3浓度呈正相关，实现对GPC3的检测。
[0005]本专利技术按照以下步骤进行：步骤1：H
‑
rGO
‑
Pt@Pd NPs
‑
GPC3
Apt
信号探针的制备（1）还原氧化石墨烯（rGO）的制备：取氧化石墨烯（GO）溶于纯水，超声破碎；加入抗坏血酸（AA），搅拌，得rGO悬浮液；（2）血红素
‑
还原氧化石墨烯（H
‑
rGO）的制备：取血红素（Hemin）加入氨水（NH3·
H2O）中溶解，加入rGO溶液以及水合肼（N2H4·
H2O）溶液，水浴搅拌，离心，清洗，得H
‑
rGO悬浮液；
作为改进，还包括以下步骤：（3）H
‑
rGO
‑
Pt@Pd NPs的制备：在H
‑
rGO悬浮液中加入聚二烯丙基二甲基氯化铵（PDDA）和氯化钠（NaCl），搅拌，加入四氯钯酸钠（Na2PdCl4）和四氯铂酸钠（Na2PtCl4）后继续搅拌，再加入水合肼（N2H4·
H2O）溶液后搅拌、存放，离心，清洗，干燥，得H
‑
rGO
‑
Pd@Pd NPs固体；（4）H
‑
rGO
‑
Pt@Pd NPs
‑
GPC3
Apt
信号探针的制备：将GPC3适配体（GPC3
Apt
）溶液H
‑
rGO
‑
Pt@Pd NPs溶液超声均匀混合，孵育、离心、清洗，得H
‑
rGO
‑
Pt@Pd NPs
‑
GPC3
Apt
信号探针。
[0006]步骤2：电极的修饰与生物传感界面的构建（1）将丝网印刷电极（SPCE）置于稀硫酸（H2SO4）溶液中活化；（2）将活化后得SPCE置于含有氯金酸（HAuCl4）和GO的混合液中，进行电沉积，得Au NPs@rGO/SPCE电极；（3）将GPC3
Apt
滴加在Au NPs@rGO/SPCE的表面，孵育、洗涤、吹干，得GPC3
Apt
/Au NPs@rGO/SPCE。
[0007]步骤3：GPC3工作曲线的绘制（1）将不同浓度的GPC3标准液滴加在GPC3电化学生物传感界面，孵育，清洗，吹干，得GPC3/GPC3
Apt
/Au NPs@rGO/SPCE；（2）在GPC3/GPC3
Apt
/Au NPs@rGO/SPCE上滴加H
‑
rGO
‑
Pt@Pd NPs
‑ꢀ
GPC3
Apt
溶液，孵育、清洗、吹干，得到H
‑
rGO
‑
Pt@Pd NPs
‑
GPC3
Apt
/GPC3/GPC3
Apt
/ Au NPs@rGO/SPCE；（3）将H2O2和AgNO3溶液滴加到H
‑
rGO
‑
Pt@Pd NPs
‑
GPC3
Apt
/GPC3/ GPC3
Apt
/Au NPs@rGO/SPCE上，避光反应，清洗，得到工作电极Ag/H
‑
rGO
‑
Pt@Pd NPs
‑
GPC3
Apt
/GPC3/GPC3
Apt
/Au NPs@rGO/SPCE，备用；（4）将工作电极浸入到硝酸（HNO3）和硝酸钾（KNO3）的甘氨酸
‑
氢氧化钠（NaOH）缓冲液中，采用电化学工作站的DPV进行扫描，记录传感器的响应电流值；（5）分别对不同浓度的GPC3工作电极进行检测，记录传感器的响应电流，根据传感器的电流响应值与GPC3浓度的关系，并绘制出标准工作曲线；计算本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种非诊断目的基于纳米复合材料构建夹心型适配体传感器检测GPC3的方法，按以下步骤进行：步骤1：血红素
‑
还原氧化石墨烯
‑
铂@钯纳米复合材料H
‑
rGO
‑
Pt@Pd NPs
‑ꢀ
GPC3
Apt
信号探针的制备rGO的制备：氧化石墨烯GO倒入超纯水中，破碎均匀，加入抗坏血酸AA还原，得rGO悬浮液；H
‑
rGO的制备：氯化血红素Hemin加入氨水中溶解，加入rGO悬浮液以及水合肼N2H4·
H2O，水浴反应，离心清洗，得H
‑
rGO悬浮液；H
‑
rGO
‑
Pt@Pd NPs的制备：向H
‑
rGO悬浮液中加入聚二烯丙基二甲基氯化铵PDDA、NaCl、搅拌，再加入四氯钯酸钠Na2PdCl4、四氯铂酸钠Na2PtCl4和N2H4·
H2O，搅拌，即得H
‑
rGO
‑
Pt@Pd溶液；H
‑
rGO
‑
Pt@Pd NPs
‑
GPC3
Apt
信号探针的制备：将GPC3适配体GPC3
Apt
和H
‑
rGO
‑
Pt@Pd溶液混合，孵育，离心，去除上清液，得到H
‑
rGO
‑
Pt@Pd NPs
‑
GPC3
Apt
溶液；步骤2：电极的修饰与生物传感界面的构建将丝网印刷电极SPCE置于稀硫酸溶液活化；（2）将活化后的SPCE置入含有氯金酸HAuCl4和GO溶液的混合液中，进行恒电位沉积，得到Au NPs@rGO/SPCE；（3）将GPC3
Apt
滴加在Au NPs@rGO/SPCE的表面，孵育、洗涤、干燥，得到GPC3
Apt /Au NPs@rGO/SPCE；（4）在上述电极上滴加H2O2和AgNO3溶液，避光反应，清洗，吹干，得到工作电极Ag/H
‑
rGO
‑
Pt@Pd NPs
‑
GPC3
Apt
/GPC3 /GPC3
Apt
/...

【专利技术属性】
技术研发人员：李桂银，王博，连梅，包铭铭，周治德，梁晋涛，
申请(专利权)人：桂林电子科技大学，
类型：发明
国别省市：