一种甲基营养型芽孢杆菌及其在植物病害防治中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一株甲基营养型芽孢杆菌ZLS

【技术实现步骤摘要】
一种甲基营养型芽孢杆菌及其在植物病害防治中的应用


[0001]本专利技术属于微生物领域，具体涉及一种甲基营养型芽孢杆菌及其应用，尤其是涉及一种对镰孢菌具有显著抑菌活性的甲基营养型芽孢杆菌及其应用。

技术介绍

[0002]玉米是我国重要的粮食作物，但在生长过程中常常遭到多种病虫危害，其中拟轮枝镰孢（Fusarium verticillioides）、层出镰孢（F. proliferatum）、禾谷镰孢（F. graminearum）是常见的玉米致病菌，侵染玉米后容易引起玉米茎腐病、穗腐病、鞘腐病等，严重影响玉米质量与产量。镰孢菌病害问题已经成为玉米种植业的掣肘之一。
[0003]芽孢杆菌是最具潜力和商业价值的生防菌之一，它抗菌谱广，具有许多优点，且在自然界广泛存在，可以被自然分解，防治效果良好且稳定，是当前国内外研究和开发的热点，可通过发酵分泌次生代谢产物来抑制病原菌的生长。
[0004]解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）为芽孢杆菌属，是革兰氏阳性芽孢杆菌，解淀粉芽孢杆菌最早由Priest等发现，经鉴定为新型芽孢杆菌，它的经典模式菌株为ATCC23350。解淀粉芽孢杆菌在自然界分布很广，从堆肥、植物表面和体内、青贮玉米秸秆制成的饲料、海洋赤潮以及湖泊污水的底泥等中均可分离筛选得到。它具有广泛的抗菌能力，在发酵培养的过程中分泌次抗菌物质如脂肽、氨基酸等，这些此生代谢产物可以抑制病原菌的生长发育，还可以增强植株自身的免疫力。因此解淀粉芽孢杆菌经常被用来制备植物的生防菌。而甲基营养型芽孢杆菌（B. methylotrophicus）是2010年被首次发现新型芽孢杆菌。甲基营养型芽孢杆菌在自然界中分布广泛，土壤、水、空气等地方都可以被检测到，具有比较高的商业价值，可以用来生产多糖、蛋白酶等，还可以作为抑菌剂，抵抗外界病菌侵染。甲基营养型芽孢杆菌具有较强的抑制黄瓜枯萎病菌、炭疽病菌、立枯丝核菌等植物病原真菌的活性，具有很高的作物真菌病害防治的研发价值。但目前获得的甲基营养型芽孢杆菌大多活性不高，防效较差，因此仍需要活性更高的甲基营养型芽孢杆菌。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于针对现有技术中存在的问题，提供一种对镰孢菌具有显著抑菌活性的甲基营养型芽孢杆菌。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：一种甲基营养型芽孢杆菌ZLS
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3（Bacillus methylotrophicus），保藏于中国微生物保藏菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 16480。
[0007]本专利技术所述的甲基营养型芽孢杆菌ZLS
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3其16S rRNA序列如SEQ IDNo . 1所示。
[0008]进一步，本专利技术提供了一种发酵产物，由权利要求1所述的甲基营养型芽孢杆菌发酵制得。
[0009]在一些实施方案中，所述发酵产物为无细胞发酵液、发酵液的干燥物或发酵液的提取物。
[0010]本专利技术还提供了所述的甲基营养型芽孢杆菌ZLS
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3及其发酵产物在防治镰孢菌病害中的用途。
[0011]优选的，所述镰孢菌病害为镰孢菌病害玉米茎腐病、穗腐病、鞘腐病。
[0012]本专利技术还提供了所述的甲基营养型芽孢杆菌ZLS
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3及其发酵产物在促进植物生长上的用途。
[0013]本专利技术还提供了含有所述的甲基营养型芽孢杆菌ZLS
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3和/或其发酵产物的微生物产品。
[0014]在一些实施方案中，所述的产品其为菌剂或肥料。
[0015]由上述技术方案可知，本专利技术提供了一种对镰孢菌具有显著抑菌活性的甲基营养型芽孢杆菌及其应用。本专利技术所述甲基营养型芽孢杆菌ZLS
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3的发酵液包衣处理的种子株高显著高于对照组。对层出镰孢菌、拟轮枝镰孢菌、禾谷镰孢菌等镰孢菌具有显著的抑菌活性，可有效防治镰孢菌病害造成得到玉米茎腐病、穗腐病、鞘腐病，提高玉米质量与产量。
[0016]生物保藏菌株ZLS
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3：分类命名：甲基营养型芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus，于2018年9月18日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.16480。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0018]图1 本专利技术的甲基营养型芽孢杆菌菌株的16S rDNA 的聚类分析。
[0019]图2为甲基营养型芽孢杆菌ZLS
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3与禾谷镰孢、拟轮枝镰孢、层出镰孢平板对峙实验结果图；其中a:芽孢杆菌ZLS
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3拮抗禾谷镰孢(Fusarium graminearum)对峙培养7天; b:芽孢杆菌ZLS
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3拮抗拟轮枝镰孢(Fusarium verticilliodes)对峙培养7天; c: 芽孢杆菌ZLS
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3拮抗层出镰孢(Fusarium proliferatum)对峙培养7天。
[0020]图3 ZLS
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3菌剂对玉米的促生长作用。
具体实施方式
[0021]本专利技术公开了一种甲基营养型芽孢杆菌及其应用。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及产品已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。
[0022]为了进一步理解本专利技术，下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0023]如无特殊说明，本专利技术实施例中所涉及的试剂均为市售产品，均可以通过商业渠道购买获得。
[0024]实施例1、甲基营养型芽孢杆菌ZLS
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3菌株的分离及鉴定本专利技术的甲基营养型芽孢杆菌ZLS
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3是在分离培养玉米茎腐病的致病真菌过程中意外获得的“污染”菌株，表现出对镰孢菌具有较高的拮抗作用，进一步利用平板涂布和划线培养的方法纯化该细菌菌株并编号保存。
[0025]ZLS
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3菌株在LB培养基上培养单菌落为圆形，污白色、不透明、中央隆起、边缘整齐，后期有褶皱；显微观察其形态为杆状，且鞭毛特征明显，经革兰氏染色呈阳性，经芽孢染色后观察芽孢呈椭圆形或柱状。采用细菌16SrDNA通用PCR引物27F（5本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种甲基营养型芽孢杆菌（Bacillus methylotrophicus），其特征在于，保藏编号为CGMCC No.16480。2.一种保藏编号为CGMCC No.16480的甲基营养型芽孢杆菌在植物病害防治中的应用。3.根据权利要求2的用途，其特征在于，所述植物病害为玉米茎基腐病、玉米穗腐病、玉米大小斑病、番茄灰霉病、水稻纹枯病、辣椒...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘宁，曹志艳，董金皋，贾慧，冀璇，
申请(专利权)人：河北农业大学，
类型：发明
国别省市：