一种结直肠靶向载药外泌体及应用和治疗结直肠疾病的药物制造技术

本发明专利技术公开了一种结直肠靶向载药外泌体及应用和治疗结直肠疾病的药物；所述结直肠靶向载药外泌体由用于治疗结直肠疾病的药物导入到具有结直肠组织靶向性的外泌体中获得，所述具有结直肠组织靶向性的外泌体来源于肺部位的细胞；结直肠疾病治疗药物包含上述结直肠靶向载药外泌体。与现有技术相比，本发明专利技术使用肺部位的细胞分泌的外泌体不需要作任何修饰就可以在结直肠富集，用肺部位的细胞来源的外泌体，解决了外泌体产量的问题，具有很好的应用前景；而且用肺部位的细胞来源的外泌体可以装载不同药物或活性分子，通过靶向结直肠组织给药，提高结直肠疾病的治疗效果，降低药物毒副反应。副反应。副反应。

【技术实现步骤摘要】
一种结直肠靶向载药外泌体及应用和治疗结直肠疾病的药物


[0001]本专利技术属于生物医学领域，涉及一种结直肠靶向载药外泌体及应用和治疗结直肠疾病的药物。

技术介绍

[0002]结肠和直肠是消化系统的一部分，二者组成一个肌肉长管，称为大肠。起源于结肠的癌症称为结肠癌，而起源于直肠的癌症称为直肠癌。二者也可以称之为结直肠癌。结肠直肠癌是胃肠道中常见的恶性肿瘤，是世界的第四大肿瘤类型，每年导致50万的患者死亡。早期症状不明显，随着癌肿的增大而表现排便习惯改变、便血、腹泻、腹泻与便秘交替、局部腹痛等症状，晚期则表现贫血、体重减轻等全身症状。其发病率和病死率在消化系统恶性肿瘤中仅次于胃癌、食管癌和原发性肝癌。
[0003]近50年来，尽管外科技术有迅猛发展，但大肠癌的手术治愈率、5年生存率始终徘徊在50％左右，治疗失败原因主要为局部复发率较高，故提高大肠癌的治疗效果必须考虑综合治疗。除了手术治疗的方法外，近年来也上市了一些针对于结直肠癌症治疗的药物。结直肠肿瘤的靶向药物治疗，按照作用机制分为三大类：第一种作用于肿瘤细胞生长信号通路，通过阻断肿瘤细胞生长信号，抑制肿瘤细胞的增殖。代表药物：西妥昔单抗、帕尼单抗。第二种作用于肿瘤生长的微环境(肿瘤血管生成)，通过阻断肿瘤细胞的血液供应，阻断其营养供应，达到“饿死肿瘤”目标。代表药物：贝伐珠单抗、瑞戈非尼。第三种作用于患者免疫细胞 (T细胞)，通过使免疫细胞持续活化，增强免疫细胞对肿瘤的识别和杀伤作用。代表药物：抗PD
‑
1单抗(Pembrolizumab)。这些药物虽然在一定层度上延长了患者的寿命，但因为其靶向能力较弱都具有明显的毒副作用。
[0004]良好的靶向药物，可以携带药物进入病兆部位，而正常组织和器官不富集药物。这样可以提高药物在病灶部位的有效浓度，进而提高疗效，同时也可以降低药物在正常组织和器官的浓度进而降低药物的副作用。虽然近年来靶向治疗得到医学药学领域的大力关注，有文献指出采用靶向基团(例如癌细胞表面特异性的受体结合的配体)与载药体系结合，可以增加药物的靶向作用，但是临床应用显示这样的靶向作用效果甚微。目前一直没有理想的药物靶向给药体系，这是癌症治疗方面亟待解决的重大科学难题。
[0005]近年来，外泌体的出现有望解决这一问题。研究发现外泌体是身体各个组织和细胞间信息传递的载体。它可以在身体进行远距离的信息传递。且外泌体可以自由跨越细胞膜是一个理想的载药体系。
[0006]化疗药物具有良好的抗肿瘤活性，但由于其较差的靶向性导致化疗药物具有极大的毒副作用。例如：奥沙利铂(Oxaliplatin)和五氟尿嘧啶等。奥沙利铂为第3代铂类抗癌药，为二氨环己烷的铂类化合物，即以1，2
‑
二氨环己烷基团代替顺铂的氨基。与其他铂类药作用相同，即均以DNA为靶作用部位，铂原子与 DNA形成交叉联结，拮抗其复制和转录。
[0007]因此，制备一种高效的结直肠靶向外泌体载药体系对结直肠部相关疾病进行治疗是亟需的。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的是要解决现有技术中存在的不足，提供一种结直肠靶向性外泌体及应用和治疗结直肠相关疾病的药物，通过靶向结直肠组织给药，提高结直肠疾病的治疗效果，降低药物毒副反应。
[0009]为达到上述目的，本专利技术是按照以下技术方案实施的：
[0010]本专利技术第一方面提供了一种结直肠组织靶向性外泌体，所述靶向外泌体来源于肺部位的细胞。
[0011]术语“外泌体”是一种囊泡，其从细胞向细胞外分泌，或具有由存在于细胞内的脂质双分子层构成的膜结构。外泌体的直径约为30
‑
1000nm，外泌体在多泡体与细胞膜融合时从细胞中释放出来，或直接从细胞膜中释放出来。已知外泌体发挥运输细胞内的生物分子蛋白、生物活性脂质和RNA(miRNA)的作用，以实现其在介导凝固、细胞间通讯和细胞免疫方面的功能性作用。
[0012]上述外泌体的概念包括微泡。已知外泌体的标记蛋白有CD63、CD81、 TSG101等，除此之外，已知的还有细胞表面受体(如：EGFR)，信号传导相关分子、细胞粘附相关蛋白、MSC相关抗原、热休克蛋白、囊泡形成相关Alix等蛋白。
[0013]在一些实施方案中，外泌体直径为约30到约500、直径为约30到约300、直径为约30到约250、直径为约30到约220、直径为约40到约175、约50到约150、约30到约150或约30到约120nm。
[0014]进一步，所述细胞选自正常细胞或其衍生株、癌细胞。
[0015]进一步，所述细胞来源于人或非人类哺乳动物。
[0016]进一步，所述非人类哺乳动物包括非人灵长类动物、啮齿动物、牛、猪、羊、犬、兔、猫、马。
[0017]进一步，所述啮齿动物包括小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠。
[0018]进一步，所述灵长类动物包括猴、猩猩、狒狒、猿。
[0019]在本专利技术中，所述肺部位的细胞是指来源于肺的细胞或者干细胞诱导分化的肺细胞。所述干细胞包括多能干细胞、胚胎干细胞。在本专利技术中，所述多能干细胞选自诱导多能干细胞。
[0020]诱导多能干细胞是通过诱导一种或多种干细胞特异性基因的表达而产生的非多能细胞(通常是成熟体细胞)的人工衍生干细胞。这样的干细胞特异性基因包括但不限于八聚体转录因子家族，即Oct
‑
3/4；Sox基因家族，即Sox1，Sox2， Sox3，Sox15和Sox 18；Klf基因家族，即Klf1，Klf2，Klf4和Klf5；Myc基因家族，即c
‑
myc和L
‑
myc；Nanog基因家族，即OCT4，NANOG和REX1。
[0021]进一步，所述肺部位的细胞包括胚肺成纤维细胞、胚肺细胞、肺成纤维细胞、胚肺二倍体细胞、肺细胞、肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞、肺癌细胞、诱导多能干细胞诱导的肺细胞。
[0022]进一步，所述胚肺成纤维细胞包括但不限于HFL
‑
1、HELF、IMR
‑
90，胚肺细胞包括但不限于MRC
‑
5、WI
‑
38、HLF，肺成纤维细胞包括但不限于HEL
‑
2、 HEL
‑
1、CCL
‑
153，胚肺二倍体细胞包括但不限于HLF
‑
02，肺细胞包括但不限于V79，肺泡上皮细胞包括但不限于HPAEpic、SJPL、ATII、AEC、AECII，支气管上皮细胞包括但不限于NHBEC、HBE、HBEC3
‑
KT、16HBE、BEAS
‑
2B、BEP2D、NHBE、MBEC、BBEC、4MBr
‑
5，肺癌细胞包括但不限于LLC1、A549、SK
‑
MES
‑
1、 NCL
‑
H460、H1299、MSTO
‑
211H、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种结直肠组织靶向性外泌体，其特征在于，所述靶向外泌体来源于肺部位的细胞；优选地，所述细胞选自正常细胞或其衍生株、癌细胞；优选地，所述细胞来源于人或非人类哺乳动物；优选地，所述非人类哺乳动物包括非人灵长类动物、啮齿动物、牛、猪、羊、犬、兔、猫、马；优选地，所述啮齿动物包括小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠。2.根据权利要求1所述的靶向性外泌体，其特征在于，所述肺部位的细胞包括胚肺成纤维细胞、胚肺细胞、肺成纤维细胞、胚肺二倍体细胞、肺细胞、肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞、肺癌细胞、诱导多能干细胞诱导的肺细胞；优选地，所述胚肺成纤维细胞包括HFL
‑
1、HELF、IMR
‑
90，胚肺细胞包括MRC
‑
5、WI
‑
38、HLF，肺成纤维细胞包括HEL
‑
2、HEL
‑
1、CCL
‑
153，胚肺二倍体细胞包括HLF
‑
02，肺细胞包括V79，肺泡上皮细胞包括HPAEpic、SJPL、ATII、AEC、AECII，支气管上皮细胞包括NHBEC、HBE、HBEC3
‑
KT、16HBE、BEAS
‑
2B、BEP2D、NHBE、MBEC、BBEC、4MBr
‑
5，肺癌细胞包括LLC1、A549、SK
‑
MES
‑
1、NCL
‑
H460、H1299、MSTO
‑
211H、HCL
‑
H1299。3.权利要求1或2所述的靶向性外泌体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)培养细胞，获取细胞培养液；2)离心，取上清液；3)二次离心，取上清液；4)再次离心，缓冲液重悬沉淀获得靶向性外泌体；优选地，其特征在于，步骤2)离心条件为2000g离心10min；优选地，步骤3)离心条件为10000g离心30min；优选地，步骤4)离心条件为100000g离心2h；优选地，步骤4)所述的缓冲液为PBS。4.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求1或2所述的靶向性外泌体；和治疗剂/预防剂。优选地，所述治疗剂或预防剂包括小分子化学药物...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜海涛，
申请(专利权)人：姜海涛，
类型：发明
国别省市：