一种超高效液相色谱串联质谱分析辐照羊肉代谢组学的方法技术

本发明专利技术公开了一种超高效液相色谱串联质谱分析辐照羊肉的代谢组学的方法，将不同贮存时间不同辐照剂量的羊肉样品，用有机溶剂提取、均质、研磨、超声、孵育、离心、干燥得到干燥物，将干燥物进行复溶、超声、离心，得到不同贮存时间不同辐照剂量的羊肉样品的上清液；用液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种超高效液相色谱串联质谱分析辐照羊肉代谢组学的方法


[0001]本专利技术属于肉类品质变化监管
，具体涉及一种超高效液相色谱串联质谱分析辐照羊肉代谢组学的方法。

技术介绍

[0002]肉的品质是决定消费者接受程度和购买意愿的主要特性。对肉制品中蛋白质、脂质、肽和小分子代谢物等成分进行分析可进一步了解肉的品质。新鲜肉中的核苷酸及氨基酸等非挥发性物质对风味前体至关重要，影响着肉和肉制品的口感、嫩度和保水能力。代谢组学是分析复杂生物系统中内源性代谢物的一种高通量方法，可以识别大量代谢物并对其进行分类，关注代谢物所涉及的显著代谢途径，建立代谢网络并推测代谢物的功能。基于LC
‑
MS的代谢组学可以通过分析肉类中的代谢物和代谢谱来探索肉的品质变化。
[0003]羊肉是蛋白质和其他营养素摄入的重要来源，屠宰加工过程易引起微生物污染。辐照是一种绿色杀菌技术，低于10kGy的辐照剂量处理可保障食品安全，延长肉及肉制品保质期，但辐照杀菌的同时会导致肉的理化特性发生不同程度的变化，影响其营养价值和感官特性。目前，关于辐照对羊肉影响的研究主要集中于理化指标测定，忽略了羊肉在辐照过程中的全面代谢谱差异及代谢物变化的研究。
[0004]因此，开发一种超高效液相色谱串联质谱分析辐照羊肉的方法很有必要。

技术实现思路

[0005]为了克服上述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种超高效液相色谱串联质谱识别辐照羊肉的方法，以解决辐照对羊肉影响的研究主要集中于理化指标测定，忽略了羊肉在辐照过程中的全面代谢谱差异及代谢物变化的问题。
[0006]为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：
[0007]本专利技术公开了一种超高效液相色谱串联质谱分析辐照羊肉代谢组学的方法，包括以下步骤：
[0008]1)将待测辐照羊肉样品，用有机溶剂提取、均质、研磨、超声、孵育、离心、干燥，得到干燥物，然后将干燥物进行复溶、超声、离心，得到待测辐照羊肉样品的上清液；
[0009]2)采用液相色谱
‑
串联质谱法对待测辐照羊肉样品的上清液进行测定，对得到的色谱数据进行保留时间比对、峰提取与整合、特征峰检测、背景漂移校正、数据库匹配及数据可视化处理，得到的结果数据集进行无监督的主成分分析和有监督的偏最小二乘
‑
判别分析，并进行筛选获得差异变量，得到待测辐照羊肉样品的差异代谢物，建立辐照羊肉的整体代谢谱。
[0010]优选地，步骤1中，有机溶剂为体积比为2:2:1的甲醇/乙腈/水的混合溶剂。
[0011]优选地，步骤1中，待测辐照羊肉样品的贮存时间为0、30、60天，辐照剂量为0、1、2、4、6kGy。
[0012]优选地，步骤1中，研磨时间为5min，涡旋30s，超声时间为10min，在
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20℃下孵育
20min，在10000
×
g下离心20min，复溶后在10000
×
g下离心15min。
[0013]优选地，步骤2中，待测辐照羊肉样品的上清液进行测定前经0.22μm膜过滤。
[0014]优选地，步骤2中，液相色谱条件为：Hypersil Gold色谱柱，流动相A为0.1％甲酸的水溶液，流动相B为0.1％甲酸的乙腈溶液；柱温为30℃，进样体积为5μL，流速为0.3mL/min；洗脱梯度为：0～1min，15％B，1～7min，15～40％B，7～9min，40～70％B，9～14min，70～100％B，14～17min，100％B，17～17.1min，100～15％B，17.1～20min，15％B。
[0015]优选地，步骤2中，质谱条件为：离子源为电喷雾电离源，采用正离子和负离子检测模式；鞘气流速48～50arb；辅助气流速11～15arb；毛细管温度300～350℃；辅助气加热温度360～400℃。
[0016]优选地，质谱采用Full MS和dd
‑
MS2扫描方式，在Full MS扫描模式下，扫描范围m/z为100～1500，Full MS扫描分辨率为70000FWHM，AGC为1e6；在dd
‑
MS2扫描模式下，质量分辨率为17500FWHM，AGC为2e5。
[0017]优选地，以变量重要性值大于1为标准进行筛选获得差异变量，得到待测羊肉样品的差异代谢物。
[0018]优选地，对得到的差异代谢物数据进行0.05概率水平上的方差分析。
[0019]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0020]本专利技术公开了一种超高效液相色谱串联质谱分析辐照羊肉代谢组学的方法，利用超高效液相色谱以其高分离度，高灵敏度和容易与高分辨质谱联用的特点，通过利用液相色谱
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串联质谱法的代谢组学技术建立羊肉的整体代谢谱，结合多元统计分析，筛选出对样品间差异有贡献的差异代谢物，监测与辐照相关的关键代谢产物的变化，解释辐照后羊肉的代谢物变化趋势，并明确影响辐照羊肉品质的关键代谢途径，同时分析了辐照处理后贮存时间对代谢物的趋势变化，为肉品质变化监管提供强有力保障，为进一步研究辐照对羊肉品质的影响提供了依据，为辐照羊肉代谢谱的研究提供了一个新的视角。该方法操作简便、省时、省力，检测灵敏度高，为研究肉品质变化提供了新的思路。
[0021]进一步地，在液相色谱的条件下，可以使上清液中的各化合物分离度和峰型良好，适合于后续辐照羊肉的代谢组学研究；在质谱的条件下，可以获得良好的谱峰强度和质谱图，有助于后续特征化合物的定性和定量分析。
[0022]进一步地，对得到的特征化合物数据进行0.05概率水平上的方差分析，可以得到具有显著差异的待测辐照羊肉样品的差异代谢化合物，更好的进行辐照羊肉代谢组学的分析。
附图说明
[0023]图1为本专利技术基于代谢组学的羊肉辐照过程中肉品质变化研究方法的流程图；
[0024]图2为本专利技术在正负模式下辐照羊肉中差异代谢化合物含量变化影响热图；
[0025]图3为本专利技术影响肉品质的代谢物在不同贮藏时间的变化图。
具体实施方式
[0026]为了使本
的人员更好地理解本专利技术方案，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是
本专利技术一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。
[0027]需要说明的是，本专利技术的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换，以便这里描述的本专利技术的实施例能够以除了在这里图示或描述的那些以外的顺序实施。此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种超高效液相色谱串联质谱分析辐照羊肉代谢组学的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将待测辐照羊肉样品，用有机溶剂提取、均质、研磨、超声、孵育、离心、干燥，得到干燥物，然后将干燥物进行复溶、超声、离心，得到待测辐照羊肉样品的上清液；2)采用液相色谱
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串联质谱法对待测辐照羊肉样品的上清液进行测定，对得到的色谱数据进行保留时间比对、峰提取与整合、特征峰检测、背景漂移校正、数据库匹配及数据可视化处理，得到的结果数据集进行无监督的主成分分析和有监督的偏最小二乘
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判别分析，并进行筛选获得差异变量，得到待测辐照羊肉样品的差异代谢物，建立辐照羊肉的整体代谢谱。2.根据权利要求1所述的超高效液相色谱串联质谱分析辐照羊肉代谢组学的方法，其特征在于，步骤1中，有机溶剂为体积比为2:2:1的甲醇/乙腈/水的混合溶剂。3.根据权利要求1所述的超高效液相色谱串联质谱分析辐照羊肉代谢组学的方法，其特征在于，步骤1中，待测辐照羊肉样品的贮存时间为0、30、60天，辐照剂量为0、1、2、4、6kGy。4.根据权利要求1所述的超高效液相色谱串联质谱分析辐照羊肉代谢组学的方法，其特征在于，步骤1中，研磨时间为5min，涡旋30s，超声时间为10min，在
‑
20℃下孵育20min，在10000
×
g下离心20min，复溶后在10000
×
g下离心15min。5.根据权利要求1所述的超高效液相色谱串联质谱分析辐照羊肉代谢组学的方法，其特征在于，步骤2中，待测辐照羊肉样品的上清液进行测定前经0.22μm膜过滤。6.根据权利要求1所述的超...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜雨轩，邸晨娜，贾玮，石琳，
申请(专利权)人：陕西科技大学，
类型：发明
国别省市：