一种从葛根中提取分离多种异黄酮类化合物的方法技术

本发明专利技术公开了一种从葛根中提取分离多种异黄酮类化合物的方法，其以葛根为原料，获得醇提取物，并通过简单工艺同时分离出高纯度的葛根素

【技术实现步骤摘要】
一种从葛根中提取分离多种异黄酮类化合物的方法


[0001]本专利技术属于化合物提取及分离
，具体涉及一种从葛根中提取分离多种异黄酮类化合物的方法。

技术介绍

[0002]异黄酮是黄酮的一种结构类型，是一类以C6‑
C3‑
C6为母核的化合物，广泛存在于植物中，特别是豆科植物，目前已经报道的天然异黄酮化合物200多个。天然异黄酮类化合物具有广泛的生物活性、营养学价值及治疗意义，是许多中药材的有效成分之一。近年来，随着研究的深入，天然异黄酮类化合物许多新的药理学作用也已被相继发现，同时天然异黄酮对于多种疾病的作用，包括肿瘤、心血管疾病、骨质疏松症和神经退行性疾病等的预防和治疗，因此受到了广大科研工作者的关注。
[0003]由于异黄酮类化合物为手性化合物，立体环境比较复杂，采用化学合成方式获得，合成路线繁琐，成本高，且纯度难以保证；因此，目前主要从豆科植物中获得分离提取的方式获得；
[0004]葛根，中药名。为豆科植物野葛的干燥根，习称野葛，是我国最常见的中药之一，具有悠久的临床使用历史。其始载于我国汉代的《神农本草经》，均味甘、辛，性凉，归脾、胃、肺经，具有解肌退热、生津止渴、透疹、升阳止泻、通经活络、解酒毒的功效。葛根异黄酮作为其中的主要成分，随着研究的深入进展已证明其具有抗氧化、解酒、抗炎、缓解骨质疏松等众多功效作用。由于葛根异黄酮良好的生物活性，有大量的文献对其进行了分离制备方法进行了报道，然而目前文献报道葛根异黄酮成分分离的成分主要集中在葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木等单一成分分离，其他成分作为废弃物处理，所以造成葛根资源的浪费，并且大部分只是以葛根药材为原料针对某一单体化合物进行分离报道或者以葛根提取物为原料分离葛根素、大豆苷、染料木苷等三种成分报道，然对同时分离葛根药材为原料进行中多种异黄酮类化合物的方法并未见报道。

技术实现思路

[0005]现有技术中的葛根提取过程中一般仅能提取分离少数种有效组分，造成资源浪费，如具有雌激素活性和抗MCF
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7人乳腺癌细胞增殖作用的活性葛根素
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4'
‑
O
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葡萄糖苷；具有降低血糖，提高免疫，保护心肌细胞的作用的3'
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羟基葛根素；以及具有抑制细胞凋亡来保护海马神经元免受损伤的3'
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甲氧基葛根素等有效组分均被废弃。本专利技术的技术方案，以葛根为原料，获得醇提取物，并通过简单工艺同时分离出高纯度的葛根素
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4'
‑
O
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葡萄糖苷、3'
‑
羟基葛根素、葛根素、3'
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甲氧基葛根素、大豆苷，且各组分的纯度均达到90％以上，使葛根资源得到综合利用，且提取分离的方法操作简单，成本低，得率高。
[0006]本专利技术提供的技术方案如下：
[0007]一种从葛根中提取分离多种异黄酮类化合物的方法，由以下步骤组成：
[0008](1)提取：取药材粉碎后，以体积分数为80％～95％的乙醇为溶媒，提取1到3次，每
次提取0.2到3个小时，合并提取液、将提取液减压浓缩得到葛根粗提物浸膏；
[0009](2)酸水溶液萃取及水解：往步骤(1)所得葛根粗提物浸膏中，加入质量浓度为0.5％
‑
4％的酸水溶液，搅拌，离心过滤，得滤饼和滤液，将所得滤液再加热水解，得酸水解液；
[0010](3)大孔树脂柱层析分离：取酸水解液进行大孔树脂分离，用体积浓度比为1:0
‑
5:5的水
‑
乙醇溶液进行梯度洗脱，用量为15BV，每个梯度所用5BV，收集洗脱液，得到3个部分，即Fr.1～Fr.3；
[0011](4)结晶：将步骤(3)中所获得Fr.2浓缩至固含量10％～40％，降温，在5℃，搅拌速度30r/min的条件下，搅拌析晶12h后，离心过滤，收率滤饼和滤液，滤饼干燥后的葛根素大于75％的葛根提取物粗品；
[0012](5)重结晶：往步骤(4)中所得的葛根素粗品中加入溶剂加热溶解，降温，在5℃，搅拌速度30r/min的条件下，搅拌析晶12h后，离心过滤，收集滤饼和滤液，滤饼干燥后的葛根素大于90％的葛根提取物精制品；
[0013](6)半制备分离：将步骤(3)中所获得Fr.1、Fr.3洗脱液合并，浓缩后加入甲醇溶解后，甲醇溶液经半制备型HPLC分别分离纯化葛根素
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4'
‑
O
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葡萄糖苷、3'
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羟基葛根素、3'
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甲氧基葛根素、大豆苷；色谱条件为：Eclipse XDB
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C18色谱柱，紫外检测器，柱温为40℃；检测波长为250nm；流动相：乙腈(A)
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0.01％乙酸水溶液(B)；梯度洗脱:0～10min，8％～8％A；10～30min，8％～12％A；30～40min，12％～15％B；40～70min，15％～95％A；并检测洗脱馏分的成分，分别收集葛根素
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4'
‑
O
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葡萄糖苷、3'
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羟基葛根素、3'
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甲氧基葛根素、大豆苷的洗脱馏分，干燥。
[0014]作为优选的技术方案，步骤(2)中的酸是醋酸、草酸、柠檬酸、苹果酸或马来酸；所述加热水解的温度为80
‑
100℃；酸溶液的添加量为药材质量：酸溶液质量＝1：5～1:20。用水溶液萃取的目的是可将葛根异黄酮类化合物溶解于酸水中，并将酸水中不溶解的杂质进行有效去除；加热的目的是将一些氧苷类化合物进行水解并保留酚苷，便于结晶等步骤的操作。
[0015]作为优选的技术方案，步骤(3)中的大孔树脂为LX
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100B、LSA
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100、XDA
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6、D101、AB
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8或X
‑
5。
[0016]作为优选的技术方案，步骤(3)中所述梯度洗脱各梯度的洗脱剂依次为：梯度Ⅰ，洗脱剂为体积分数5～10％的乙醇水溶液，用量为5BV；梯度Ⅱ，洗脱剂为体积分数10～25％的乙醇水溶液，用量为5BV；梯度Ⅲ，洗脱剂为体积分数35～50％的乙醇水溶液，用量为5BV。梯度洗脱的目的是：用不同浓度的乙醇将极性不同的异黄酮苷类化合物逐次洗脱，若乙醇浓度偏低或者洗脱剂用量少，则无法将目标成分洗脱完全，若乙醇浓度偏高或者洗脱剂用量过大，则不同的异黄酮苷类化合物分离效果差，从而并对进一步纯化产生影响。
[0017]作为优选的技术方案，步骤(5)中的溶剂为水、乙醇、乙酸乙酯、甲醇、正丁醇、冰醋酸中的一种或者两种不同的溶剂。
[0018]作为优选的技术方案，步骤(6)中甲醇溶解后的的固含量为5％～30％。
[0019]本专利技术与现有技术相比，具有以下有益效果：
[0020](1)本专利技术所述的方法通本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从葛根中提取分离多种异黄酮类化合物的方法，其特征在于，由以下步骤组成：(1)提取：取药材粉碎后，以体积分数为80％～95％的乙醇为溶媒，提取1到3次，每次提取0.2到3个小时，合并提取液、将提取液减压浓缩得到葛根粗提物浸膏；(2)酸水溶液萃取及水解：往步骤(1)所得葛根粗提物浸膏中，加入质量浓度为0.5％
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4％的酸水溶液，搅拌，离心过滤，得滤饼和滤液，将所得滤液再加热水解，得酸水解液；(3)大孔树脂柱层析分离：取酸水解液进行大孔树脂分离，用体积浓度比为1:0
‑
5:5的水
‑
乙醇溶液进行梯度洗脱，用量为15BV，每个梯度所用5BV，收集洗脱液，得到3个部分，即Fr.1～Fr.3；(4)结晶：将步骤(3)中所获得Fr.2浓缩至固含量10％～40％，降温，在5℃，搅拌速度30r/min的条件下，搅拌析晶12h后，离心过滤，收率滤饼和滤液，滤饼干燥后的葛根素大于75％的葛根提取物粗品；(5)重结晶：往步骤(4)中所得的葛根素粗品中加入溶剂加热溶解，降温，在5℃，搅拌速度30r/min的条件下，搅拌析晶12h后，离心过滤，收集滤饼和滤液，滤饼干燥后的葛根素大于90％的葛根提取物精制品；(6)半制备分离：将步骤(3)中所获得Fr.1、Fr.3洗脱液合并，浓缩后加入甲醇溶解后，甲醇溶液经半制备型HPLC分别分离纯化葛根素
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4'
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O
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葡萄糖苷、3'
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羟基葛根素、3'
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甲氧基葛根素、大豆苷；色谱条件为：Eclipse XDB
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C18色谱柱，紫外检测器，柱温为40℃；检测波长为250nm；流动相：乙腈(A)
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0.01％乙酸水溶液(B)；梯度洗脱:0～10min，8％～8％A；10～30min，8％～12％A；30～40mi...

【专利技术属性】
技术研发人员：李名洁，徐剑，王喆，
申请(专利权)人：劲牌有限公司，
类型：发明
国别省市：